同时检测多种他汀类药物及其活性代谢产物的方法与流程

本发明涉及药物检测领域。更具体地说，本发明涉及一种同时检测多种他汀类药物及其活性代谢产物的方法。

背景技术：

1、他汀类药物在临床中广泛用于治疗高脂血症，对原发性高脂血症和混合型血脂异常治疗效果明显。他汀类药物能延缓动脉斑块在血管壁的聚集及沉淀，降低心肌梗死和中风的发病风险，是心血管疾病初级和次级预防的重要工具。长期高强度服用他汀类药物常引发肝功异常、肌肉疼痛甚至横纹肌溶解等严重不良反应。前期研究发现，药物的疗效和不良反应与药物体内暴露量相关。因此，明确药物在血液中的浓度对于规避不良反应、实时评估药物疗效尤为重要。

2、目前，单一他汀的药物浓度检测方法已有报道，如cn107144648a、cn111983113a、cn102384954a中记载。但随着临床合并用药、药物调整情况的增加，单一的药物浓度检测并不能及时评估患者的治疗情况。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种同时检测多种他汀类药物及其活性代谢产物的方法，已满足临床对于他汀类药物合并用药的检测需求。

2、为了实现本发明的目的和其它优点，提供了一种同时检测多种他汀类药物及其活性代谢产物的方法，包括：

3、步骤一、建立目标他汀类药物及其活性代谢产物的标准曲线；

4、步骤二、对待测血样进行前处理，得待测样品；

5、步骤三、采用uplc-ms/ms法对所述待测样品进行检测，并利用步骤一制备的标准曲线，对所述待测样品中的目标他汀类药物及其活性代谢产物进行定量。

6、优选的是，所述的同时检测多种他汀类药物及其活性代谢产物的方法，所述目标他汀类药物及其活性代谢产物包括：阿托伐他汀、2-羟基阿托伐他汀、4-羟基阿托伐他汀、瑞舒伐他汀、普伐他汀、匹伐他汀、氟伐他汀、辛伐他汀、辛伐他汀酸、洛伐他汀、洛伐他汀酸。

7、优选的是，所述的同时检测多种他汀类药物及其活性代谢产物的方法，所述前处理包括：将全血样本离心后，取上层血浆，加入含内标化合物的沉淀剂，再震荡离心，取上清液，即得所述待测样品，其中，所述上层血浆和所述沉淀剂的体积比为1:2-5，例如1:3、1:4等，所述沉淀剂为0.05％-0.5％的甲酸甲醇溶液，例如0.1％的甲酸甲醇溶液、0.2％的甲酸甲醇溶液、0.3％的甲酸甲醇溶液、0.4％的甲酸甲醇溶液等，所述沉淀剂的ph值为2.5-3.5，例如3.0。

8、优选的是，所述的同时检测多种他汀类药物及其活性代谢产物的方法，所述上层血浆和所述沉淀剂的体积比为1:3，所述沉淀剂为0.1％的甲酸甲醇溶液。

9、优选的是，所述的同时检测多种他汀类药物及其活性代谢产物的方法，所述内标化合物为阿托伐他汀-d5和瑞舒伐他汀-d6。

10、优选的是，所述的同时检测多种他汀类药物及其活性代谢产物的方法，采用uplc-ms/ms法进行检测时，

11、色谱条件：色谱柱：acquity uplctm beh c18 column 50mm×2.1mm 1.7μm；流速：0.2ml/min；进样体积：1μl；自动进样器温度：10℃；柱温：40℃；流动相：a：0.1％甲酸-10mmol乙酸铵水溶液，b：乙腈；梯度洗脱：0-3.0min，55％ a、45％b；3.0-5.0min，55％-90％a、余下为b；5.0-5.5min，90-55％ a、余下为b；

12、质谱条件：电离模式：电喷雾电离，正负离子切换模式；质谱扫描方式：多反应监测；毛细管电压：3.50kv；源和去溶剂的温度分别设置在150、350℃；吹扫气流量：1000l/h；碰撞气流量：0.13ml/min。

13、本发明至少包括以下有益效果：

14、第一、本发明的血液样本前处理方法，处理后可直接进样检测，无需再使用稀释剂稀释，且进样量仅为1μl，血液样本从收样到上样可控制在10分钟以内，大大节省了血液样本的前处理时间。

15、第二、本发明的检测方法所需血样样本少，仅需100ul的全血血浆样本即可满足检测要求。

16、第三、本发明的检测方法选用特定的色谱柱，并配合特定的检测条件，可同时检测11种不同极性、不同类型的他汀及其代谢产物，检测时间可控制在5.5分钟内，大大缩短了他汀类药物及其代谢产物的检测时间，且仅需2种内标化合物便可满足检测要求，大大节省了检测成本。

17、第四、本发明的检测方法的标准曲线范围能够完全覆盖11种他汀及其代谢物的治疗区间浓度和警戒浓度，尽可能的避免了实际临床样本可能超出检测线性范围的问题。

18、本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。

技术特征：

1.同时检测多种他汀类药物及其活性代谢产物的方法，其特征在于，包括：

2.如权利要求1所述的同时检测多种他汀类药物及其活性代谢产物的方法，其特征在于，所述目标他汀类药物及其活性代谢产物包括：阿托伐他汀、2-羟基阿托伐他汀、4-羟基阿托伐他汀、瑞舒伐他汀、普伐他汀、匹伐他汀、氟伐他汀、辛伐他汀、辛伐他汀酸、洛伐他汀、洛伐他汀酸。

3.如权利要求1所述的同时检测多种他汀类药物及其活性代谢产物的方法，其特征在于，所述前处理包括：将全血样本离心后，取上层血浆，加入含内标化合物的沉淀剂，再震荡离心，取上清液，即得所述待测样品，其中，所述上层血浆和所述沉淀剂的体积比为1:2-5，所述沉淀剂为0.05％-0.5％的甲酸甲醇溶液，所述沉淀剂的ph值为2.5-3.5。

4.如权利要求3所述的同时检测多种他汀类药物及其活性代谢产物的方法，其特征在于，所述上层血浆和所述沉淀剂的体积比为1:3，所述沉淀剂为0.1％的甲酸甲醇溶液。

5.如权利要求3所述的同时检测多种他汀类药物及其活性代谢产物的方法，其特征在于，所述内标化合物为阿托伐他汀-d5和瑞舒伐他汀-d6。

6.如权利要求1所述的同时检测多种他汀类药物及其活性代谢产物的方法，其特征在于，采用uplc-ms/ms法进行检测时，

技术总结
本发明公开了同时检测多种他汀类药物及其活性代谢产物的方法，包括：步骤一、建立目标他汀类药物及其活性代谢产物的标准曲线；步骤二、对待测血样进行前处理，得待测样品；步骤三、采用UPLC‑MS/MS法对所述待测样品进行检测，并利用步骤一制备的标准曲线，对所述待测样品中的目标他汀类药物及其活性代谢产物进行定量。本发明的检测方法可同时检测11种不同极性、不同类型的他汀及其代谢产物，检测时间可控制在5.5分钟内，大大缩短了他汀类药物及其代谢产物的检测时间，且仅需2种内标化合物便可满足检测要求，大大节省了检测成本。

技术研发人员：左先波,刘丽宏,张丹,王晓星,杜雯雯,秦伟
受保护的技术使用者：中日友好医院（中日友好临床医学研究所）
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13