黄水活性提取物及其用途的制作方法

本发明属于白酒副产物再利用，具体涉及一种黄水活性提取物及其用途。

背景技术：

1、黄水是固态酿造白酒过程中起糟滴窖产生的黄色或棕黄色液体，是微生物以粮食为原料的发酵产物，富含糖类、蛋白及白酒风味成份，黄水风味成份通过蒸馏方式得到回收利用，而剩余的底锅黄水则作为废液处理排放。黄水中丰富的多糖，蛋白质分解形成的多肽、小分子肽等活性化合物没有得到回收利用，导致黄水废液的cod值高至10万以上，同时黄水属于固态酿造白酒副产物，产量大，常常只能作为废液排掉，既造成了废液处理负担，又造成了极大的资源浪费。分离提取黄水中的活性成份，并进行活性评价，可以提升黄水循环利用价值。

2、小胶质细胞bv2作为中枢神经系统内的免疫细胞，既可通过吞噬脑组织中的病原体及有害颗粒对神经元起保护作用，又可在致炎因子的作用下，激活成反应性小胶质细胞，分泌炎性细胞因子对神经元起毒性作用，是治疗神经炎症及神经退行性疾病的一个重要靶点。神经病理性疼痛是神经系统损伤引起的一种慢性疼痛，其发病机制复杂，至今尚缺乏有效的治疗药物。活化的小胶质细胞表达p2x4受体和p2x7受体，可以诱导病理性疼痛的发生。

3、从黄水中提取活性成份，以细胞活力，p2x4、p2x7 mrna表达评价活性提取物对bv2神经细胞的治疗作用方面的研究未见报道。

技术实现思路

1、本发明为实现酿酒副产物黄水的循环利用价值，从黄水中提取获得了一种活性提取物，其具有体外抗氧化活性，并且经细胞实验，该活性提取物对bv2神经细胞具有良好的治疗作用。

2、本发明首先提供了一种黄水活性提取物，其制备方法包括以下步骤：

3、a、取黄水，经第一次静置冷藏，取上清液和有机溶剂混合均匀，再经第二次静置冷藏，然后离心除去沉淀，得清液；

4、b、取步骤a所得清液，先经超滤膜过滤，除去大分子，再经纳滤膜过滤，除去水分和有机试剂，得提取液，将提取液浓缩，即得黄水活性提取物。

5、其中，上述黄水活性提取物，步骤a中，所述黄水为浓香型白酒酿造过程中起糟滴窖时产生的黄色液态副产物。

6、其中，上述黄水活性提取物，步骤a中，所述有机溶剂为醇系有机溶剂。

7、优选的，上述黄水活性提取物，步骤a中，所述有机溶剂为食品级乙醇。

8、其中，上述黄水活性提取物，步骤a中，所述有机溶剂与黄水的体积比为3～4：1。

9、其中，上述黄水活性提取物，步骤a中，第一次静置冷藏的温度为0～10℃。

10、其中，上述黄水活性提取物，步骤a中，第一次静置冷藏的时间为24～48h。

11、其中，上述黄水活性提取物，步骤a中，第二次静置冷藏的温度为0～10℃。

12、其中，上述黄水活性提取物，步骤a中，第二次静置冷藏的时间为24～48h。

13、其中，上述黄水活性提取物，步骤a中，离心的温度为0～10℃。

14、其中，上述黄水活性提取物，步骤a中，离心的转速为4000～8000r/min。

15、其中，上述黄水活性提取物，步骤b中，所述超滤膜的截留分子量为3000～10000da。

16、其中，上述黄水活性提取物，步骤b中，所述纳滤膜的截留分子量为200～300da。

17、其中，上述黄水活性提取物，步骤b中，所述浓缩的温度为50～80℃。

18、本发明通过上述方法提取获得黄水活性提取物后，还采用超高效液相色谱-质谱，用targetlynx定量软件计算靶向数据峰面积，采用单点内标法对步骤b所得黄水活性提取物进行检测。

19、其中，上述黄水活性提取物中，检测时，所述超高效液相色谱采用反相色谱。

20、其中，上述黄水活性提取物中，检测时，所述超高效液相色谱采用梯度洗脱：流动相a：0.1％甲酸水溶液；流动相b：甲醇或乙腈；洗脱程序如下：

21、

22、其中，上述黄水活性提取物中，检测时，所述高效液相色谱的色谱柱为uplc hsst3柱；优选地，柱长为150mm，内径为2.1mm，粒径为1.8μm。

23、优选的，上述黄水活性提取物中，检测时，所述高效液相色谱的色谱柱得柱长为150mm，内径为2.1mm，粒径为1.8μm。

24、其中，上述黄水活性提取物中，检测时，所述高效液相色谱的柱温为30～50℃，流速为0.1～0.5ml/min，进样量为1～10ul。

25、优选的，上述黄水活性提取物中，检测时，所述高效液相色谱的柱温为50℃，流速为0.5ml/min，进样量为5ul。

26、其中，上述黄水活性提取物中，检测时，所述质谱为串联四极杆质谱系统，采用正模式检测。

27、其中，上述黄水活性提取物中，检测时，所述质谱的检测条件为：正离子离子源电压1.5kv、锥孔电压20v；去溶剂温度600℃，去溶剂气体流速1000l/h；锥孔气体流速10l/h。

28、基于上述黄水活性提取物，本发明还提供了一种药物组合物，其以前述黄水活性提取物为活性成分，添加药学上可接受的辅料，制备而成。

29、本发明还提供了上述黄水活性提取物、上述药物组合物在制备防治bv2神经细胞相关疾病的药物中的用途。

30、进一步的，上述黄水活性提取物、上述药物组合物可用于防治神经炎症、神经退行性疾病或神经病理性疼痛。

31、本发明的有益效果：

32、本发明将液液萃取、膜过滤等多种分离技术相结合，利用食品级乙醇等有机溶剂沉淀除去大分子的多糖和蛋白，再以超滤膜、纳滤膜分子截留方式，得到黄水中活性成份；经超高效液相色谱-质谱检测，黄水活性提取物中含有大量的氨基酸及小分子肽等氨基酸类衍生物，此类化合物具有多方面的生物活性。本发明提供黄水活性成份时，没有任何有毒有害化学试剂的参与，方法简便，安全性高。

33、本发明创造性地将黄水活性提取物在bv2神经细胞的治疗作用方面进行活性评估，以atp(三磷酸腺苷)诱导体外神经疼痛模型，以细胞活力，p2x4、p2x7 mrna表达作为活性评价指标，发现黄水活性提取物对bv2神经细胞有一定的治疗作用，为黄水在药用方面的价值提供了数据基础，提高了黄水的应用价值，扩大了黄水用途。

技术特征：

1.黄水活性提取物，其特征在于：其制备方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的黄水活性提取物，其特征在于：至少满足下列的一项：

3.根据权利要求1所述的黄水活性提取物，其特征在于：至少满足下列的一项：

4.根据权利要求1所述的黄水活性提取物，其特征在于：至少满足下列的一项：

5.根据权利要求1～4任一项所述的黄水活性提取物，其特征在于：采用超高效液相色谱-质谱对步骤b所得黄水活性提取物进行检测。

6.根据权利要求5所述的黄水活性提取物，其特征在于：至少满足下列的一项：

7.根据权利要求5所述的黄水活性提取物，其特征在于：至少满足下列的一项：

8.药物组合物，其特征在于：以权利要求1～7任一项所述黄水活性提取物为活性成分，添加药学上可接受的辅料，制备而成。

9.权利要求1～7任一项所述的黄水活性提取物、权利要求8所述的药物组合物在制备防治bv2神经细胞相关疾病的药物中的用途。

10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于：所述bv2神经细胞相关疾病为神经炎症、神经退行性疾病或神经病理性疼痛。

技术总结
本发明公开了一种黄水活性提取物及其用途，属于白酒副产物再利用技术领域。本发明为实现酿酒副产物黄水的循环利用价值，从黄水中提取获得了一种活性提取物，提取步骤为：取黄水，有机溶剂沉淀，离心，上清液依次经超滤膜过滤和纳滤膜过滤，最后浓缩，得到黄水活性提取物。本发明利用有机溶剂沉淀除去大分子的多糖和蛋白，再以超滤膜、纳滤膜分子截留方式，得到黄水中活性成份；经超高效液相色谱‑质谱检测，黄水活性提取物中含有大量氨基酸及小分子肽等氨基酸类衍生物，并通过细胞实验，验证了黄水活性提取物对BV2神经细胞有一定的保护作用，为黄水在药用方面的价值提供了数据基础，提高了黄水的应用价值，扩大了黄水用途。

技术研发人员：安明哲,李竣,郑佳,黄仙菊,赵东,李杨华,廖勤俭
受保护的技术使用者：宜宾五粮液股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/14