一种精制冠心口服液特征图谱构建和含量测定方法与流程

本发明属于药物分析检测。更具体地，涉及一种精制冠心口服液特征图谱构建和含量测定方法。

背景技术：

1、精制冠心口服液源于中国中医研究院西苑医院老中医郭士魁先生创立的冠心二号方，该方由丹参、赤芍、川芎、红花和降香五味药材组成，目前收载于中国药典(2020版)一部，用于淤血内停所致的胸痹，症见胸闷、心前区刺痛，冠心病心绞痛见上述证候者。

2、精制冠心同系列药物还有精制冠心片和精制冠心软胶囊，这两者制备方法的共同点为先将降香提取挥发油，蒸馏后水溶液与其他四味药材85％乙醇加热回流提取液合并浓缩，与挥发油混匀得到。精制冠心口服液则是将除红花外四味中药水煎煮后过滤，红花80℃温浸，与滤液合并浓缩制得。由于提取方法与制备工艺的差异，精制冠心片剂、软胶囊与口服液中化学成分和含量不尽相同，片剂和软胶囊中含大量脂溶性分子，而口服液主要包括酚酸类和芍药苷类水溶性成分。

3、中国专利申请cn105738499a公开了一种精制冠心片特征图谱的构建和6种成分的测定方法，其中片剂特征图谱包括芍药苷、迷迭香酸、丹酚酸b、藁本内酯、隐丹参酮和丹参酮ⅱa等共有峰；李双等([1]李双,鄢必新,张颖,等.精制冠心片质控方法再评价研究[j].人参研究,2021.)使用高效液相色谱法测定了精制冠心片中丹酚酸b、丹参酮ⅱa和芍药苷的含量。但是与此不同的是，精制冠心口服液中不含有隐丹参酮和丹参酮ⅱa等脂溶性成分，精制冠心片质量监控方法并不适用于口服液的检测；而且除了丹酚酸b和芍药苷，精制冠心口服液中还存在多个含量较高的水溶性成分没有合适的质量监控方法。

4、目前中国药典中仅采用高效液相色谱法对丹酚酸b和芍药苷两个成分在检测波长230nm进行了含量测定，但是该方法只检测丹参和赤芍中的一种成分，未对川芎、红花和降香中的活性成分进行监控，不能全面有效的衡量精制冠心口服液质量。并且，目前中国药典中精制冠心口服液含量测定方法，检测时间长、检测效率低、检测所得图谱色谱峰信息少，不利于实际生产应用。

5、因此，迫切需要提供一种检测时间短、色谱峰信息多、能全面监控精制冠心口服液质量的特征图谱构建和含量测定方法。

技术实现思路

1、本发明要解决的技术问题是克服现有精制冠心片方法不适用于口服液，且检测时间长、检测效率低、色谱峰信息少的缺陷和不足，提供一种检测时间短、色谱峰信息多、能全面监控精制冠心口服液质量的特征图谱构建和含量测定方法。

2、本发明另一目的是提供所述方法在精制冠心口服液质量监控中的应用。

3、本发明上述目的通过以下技术方案实现：

4、一种精制冠心口服液特征图谱构建和含量测定方法，采用超高效液相色谱法进行检测，所述超高效液相色谱法的条件为：

5、色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶，检测波长：230～290nm，柱温：25～30℃，流速0.25～0.30ml/min；流动相a：乙腈或甲醇，流动相b：0.1％磷酸溶液，在以下梯度洗脱条件下进行检测：

6、

7、进一步地，当构建精制冠心口服液特征图谱时，检测波长为228～232nm。优选地，所述检测波长为230nm。

8、更进一步地，当对精制冠心口服液进行含量测定时，测定酚酸类成分含量检测波长为284～288nm，测定芍药苷类成分含量检测波长为228～232nm。优选地，测定酚酸类成分含量检测波长为286nm，测定芍药苷类成分含量检测波长为228～232nm。更优选地，所述酚酸类成分包括丹参素、原儿茶醛、紫草酸、丹酚酸b和丹酚酸a；所述芍药苷类成分包括芍药内酯苷和芍药苷。

9、进一步地，所述色谱柱为内径2.0～2.1mm，柱长100mm～150mm，粒径1.7～2.0μm的十八烷基硅烷键合硅胶柱。优选地，所述色谱柱为waters acquity uplctm hss t3(2.1×150mm，1.8μm)或agilent rrhd eclipse plus c18(2.1×150mm，1.8μm)。

10、更进一步地，所述超高效液相色谱法的条件中，进样量为1.0～1.5μl。

11、进一步地，精制冠心口服液制备成供试品溶液再用超高效液相色谱法进行检测，所述供试品溶液的制备方法包括以下步骤：

12、将精制冠心口服液用醇溶液稀释，超声处理，过滤，取续滤液，即得。

13、优选地，所述稀释倍数为25～50倍；所述醇溶液为甲醇溶液或乙醇溶液，所述醇溶液的体积浓度为50～100％；所述超声处理的功率为300～500w、频率为35～40khz，处理时间为15～30min。

14、更进一步地，所述精制冠心口服液特征图谱构建和含量测定方法还需要制备对照品溶液，所述对照品溶液为对照品溶于50％-90％甲醇或乙醇溶液中制备得到。

15、进一步地，所述方法特征图谱构建中，检测出9个共有色谱峰：1号峰为没食子酸，2号峰为丹参素，3号峰为原儿茶醛，4号峰为芍药内酯苷，5号峰为芍药苷，6号峰为紫草酸，7号峰为丹酚酸b，8号峰为丹酚酸a，9号峰为(3r)-sativanone(根据lc-ms技术推断)；将7号峰丹酚酸b作为特征图谱参照物峰，其他峰相对保留时间在规定值的±10％之内，所述规定值分别为：1号峰：0.05、2号峰：0.10、3号峰：0.19、4号峰：0.42、5号峰：0.47、6号峰：0.94、7号峰：1.00、8号峰：1.07、9号峰：1.31。

16、优选地，所述共有色谱峰为特征峰，其中，属于丹参的特征峰为2、3、6、7、8号峰；归属于赤芍的特征峰为1、4、5号峰；归属于降香的特征峰为9号峰。

17、更进一步地，所述方法可同时测定精制冠心口服液中丹参素、原儿茶醛、紫草酸、丹酚酸b、丹酚酸a、芍药内酯苷和芍药苷的含量。其中，没食子酸专属性不强，(3r)-sativanone没有对照品，因此在含量测定中没有进行测定。

18、另外的，本发明还提供了一种精制冠心口服液质量监控方法，采用所述精制冠心口服液特征图谱构建和含量测定方法进行质量监控。

19、进一步地，精制冠心口服液含量测定结果规定：每1ml含丹参以丹参素、原儿茶醛、紫草酸、丹酚酸b和丹酚酸a总量计，不得少于7.5mg；每1ml含赤芍以芍药内酯苷和芍药苷总量计，不得少于4.3mg。

20、本发明具有以下有益效果：

21、本发明提供了一种精制冠心口服液特征图谱构建和含量测定方法，采用超高效液相色谱法进行检测，可以在一个色谱条件实现特征图谱和多成分含量测定分析，极大缩短了检测周期，提高分析效率，并且该方法具有较好的专属性、精密度、稳定性、准确性等，非常适合对精制冠心口服液的整体质量进行控制。

技术特征：

1.一种精制冠心口服液特征图谱构建和含量测定方法，其特征在于，采用超高效液相色谱法进行检测，所述超高效液相色谱法的条件为：

2.根据权利要求1所述精制冠心口服液特征图谱构建和含量测定方法，其特征在于，当构建精制冠心口服液特征图谱时，检测波长为228～232nm。

3.根据权利要求1所述精制冠心口服液特征图谱构建和含量测定方法，其特征在于，当对精制冠心口服液进行含量测定时，测定酚酸类成分含量检测波长为284～288nm，测定芍药苷类成分含量检测波长为228～232nm。

4.根据权利要求1所述精制冠心口服液特征图谱构建和含量测定方法，其特征在于，所述色谱柱为内径2.0～2.1mm，柱长100mm～150mm，粒径1.7～2.0μm的十八烷基硅烷键合硅胶柱。

5.根据权利要求1所述精制冠心口服液特征图谱构建和含量测定方法，其特征在于，所述超高效液相色谱法的条件中，进样量为1.0～1.5μl。

6.根据权利要求1所述精制冠心口服液特征图谱构建和含量测定方法，其特征在于，精制冠心口服液制备成供试品溶液再用超高效液相色谱法进行检测，所述供试品溶液的制备方法包括以下步骤：

7.根据权利要求1～6任一所述精制冠心口服液特征图谱构建和含量测定方法，其特征在于，所述方法特征图谱构建中，检测出9个共有色谱峰：1号峰为没食子酸，2号峰为丹参素，3号峰为原儿茶醛，4号峰为芍药内酯苷，5号峰为芍药苷，6号峰为紫草酸，7号峰为丹酚酸b，8号峰为丹酚酸a，9号峰为(3r)-sativanone；将7号峰丹酚酸b作为特征图谱参照物峰，其他峰相对保留时间在规定值的±10％之内，所述规定值分别为：1号峰：0.05、2号峰：0.10、3号峰：0.19、4号峰：0.42、5号峰：0.47、6号峰：0.94、7号峰：1.00、8号峰：1.07、9号峰：1.31。

8.根据权利要求1～6任一所述精制冠心口服液特征图谱构建和含量测定方法，其特征在于，所述方法可同时测定精制冠心口服液中丹参素、原儿茶醛、紫草酸、丹酚酸b、丹酚酸a、芍药内酯苷和芍药苷的含量。

9.一种精制冠心口服液质量监控方法，其特征在于，采用权利要求1～8任一所述精制冠心口服液特征图谱构建和含量测定方法进行质量监控。

10.根据权利要求9所述精制冠心口服液质量监控方法，其特征在于，精制冠心口服液含量测定结果规定：每1ml含丹参以丹参素、原儿茶醛、紫草酸、丹酚酸b和丹酚酸a总量计，不得少于7.5mg；每1ml含赤芍以芍药内酯苷和芍药苷总量计，不得少于4.3mg。

技术总结
本发明属于药物分析检测技术领域，具体涉及一种精制冠心口服液特征图谱构建和含量测定方法。该方法采用超高效液相色谱法进行检测，可以在一个色谱条件实现特征图谱和多成分含量测定分析，极大缩短了检测周期，提高分析效率，并且该方法具有较好的专属性、精密度、稳定性、准确性等，非常适合对精制冠心口服液的整体质量进行控制。

技术研发人员：苏薇薇,陈东松,王馨凝,方建华,彭维,陈新生,王永刚,罗庆发
受保护的技术使用者：广东利泰制药股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/14