一种自闭症早期诊断的生物标志物的筛查方法与应用

本发明涉及生物医药领域，特别是涉及一种自闭症早期诊断的生物标志物的筛查方法与应用。

背景技术：

1、自闭症是复杂，普遍和多因素的神经发育疾病，其直接和间接影响遍及许多不同的领域，全世界被诊断出患有自闭症的儿童患病率约为1/100，且患病率估计数随着时间的推移而增加。应激激素水平和应激反应与自闭症存在紧密关系。可的松是一种重要的应激激素，是应激反应中下丘脑-垂体-肾上腺(hpa)轴的最终产物，由肾上腺皮质在压力下释放。毛发中的可的松反映了未结合白蛋白的、游离的可的松，并且是人类和非人类灵长类动物压力的可靠生物标志物。因此，毛发可的松可以提供有关随时间变化的应激激素水平的信息，从而有助于描述应激功能长期变化模式。然而，目前该疾病尚无可靠的毛发生物标志物，存在以下局限：(1)对于猕猴中毛发可的松提取技术并不十分成熟。(2)现有技术基本上基于定点检测，并没有对观察对象的毛发可的松水平进行长期连续动态监测。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种自闭症早期诊断的生物标志物的筛查方法与应用，以解决上述现有技术存在的问题，通过文献筛选以及实验验证，提供了一种早期诊断自闭症的生物标志物毛发可的松的筛查方法，并且为自闭症尤其是儿童自闭症的早期诊断和长期检测奠定理论基础。

2、为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

3、本发明提供一种自闭症早期诊断的生物标志物的筛查方法，包括以下步骤：

4、(1)提供猕猴毛发作为实验样品，所述猕猴毛发来自具有自闭症核心行为表型的猕猴；

5、(2)对所述猕猴毛发进行预处理，并对所述猕猴毛发进行相关指标检测，以获取实验样品和对照样品之间的具有显著差异的指标，确定为潜在生物标志物；

6、(3)基于步骤(2)确定的潜在生物标志物，以具有患自闭症的高风险猕猴作为检测对象，连续定量观测具有患自闭症的高风险猕猴的毛发中所述潜在生物标志物的表达水平，确定具有患自闭症的高风险猕猴毛发潜在生物标志物与猕猴自闭症表型的关系，从而确定所述潜在生物标志物与猕猴自闭症相关的差异标志物，所得的差异标志物即为自闭症早期诊断的生物标志物。

7、优选的是，步骤(2)中，猕猴毛发进行预处理的方法包括以下步骤：

8、s1：将毛发样品用异丙醇洗涤，干燥，之后研磨成粉末；

9、s2：将所述粉末与甲醇混合提取，之后经离心，弃去上清液、干燥沉淀；

10、s3：向干燥的沉淀中加入磷酸盐缓冲盐水，以用于所述相关指标信息的检测。

11、优选的是，s1中，所述毛发样品与所述异丙醇的质量体积比为50:1；干燥条件为：35℃下干燥8h；研磨条件为：频率30hz，持续时间为4min。

12、优选的是，s2中，所述粉末与所述甲醇的质量体积比为50:1；离心条件为11000rpm离心5min；干燥条件为：室温下用氮气气流干燥。

13、优选的是，步骤(2)中，所述相关指标包括猕猴毛发中的可的松、重金属以及微量元素；所述潜在生物标志物为可的松。

14、优选的是，步骤(3)中，相比对照猕猴毛发中可的松，随着时间延长，具有患自闭症的高风险猕猴毛发可的松含量下降。

15、本发明还提供毛发可的松在制备自闭症早期诊断的生物标志物中的应用。

16、优选的是，所述自闭症包括猕猴和儿童。

17、本发明公开了以下技术效果：

18、本发明提供猕猴毛发样本采集具体步骤以及毛发可的松提取的成熟实验方法，测定方法。本发明采用具有自闭症患病风险的猕猴进行毛发标志物的检测，并对猕猴的毛发可的松水平进行长期连续动态监测，确定猕猴毛发可的松可以作为生物标志物应用于早期诊断自闭症中，这为自闭症尤其是儿童自闭症的早期诊断提供了新的标志物，并且提供了简单可行的标志物的检测方法，能够为长期连续动态监测自闭症病情发展提供理论基础。

技术特征：

1.一种自闭症早期诊断的生物标志物的筛查方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的筛查方法，其特征在于，步骤(2)中，猕猴毛发进行预处理的方法包括以下步骤：

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，s1中，所述毛发样品与所述异丙醇的质量体积比为50:1；干燥条件为：35℃下干燥8h；研磨条件为：频率30hz，持续时间为4min。

4.如权利要求2所述的筛查方法，其特征在于，s2中，所述粉末与所述甲醇的质量体积比为50:1；离心条件为11000rpm离心5min；干燥条件为：室温下用氮气气流干燥。

5.如权利要求1所述的筛查方法，其特征在于，步骤(2)中，所述相关指标包括猕猴毛发中的可的松、重金属以及微量元素；所述潜在生物标志物为可的松。

6.如权利要求5所述的筛查方法，其特征在于，步骤(3)中，相比对照猕猴毛发中可的松，随着时间延长，具有患自闭症的高风险猕猴毛发可的松含量下降。

7.毛发可的松在制备自闭症早期诊断的生物标志物中的应用。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述自闭症包括猕猴自闭症和儿童自闭症。

技术总结
本发明公开了一种自闭症早期诊断的生物标志物的筛查方法与应用，属于生物医药领域。本发明通过文献筛选以及实验验证，提供了选取自闭症早期标志物思路和文献筛查具体要求，猕猴毛发样本采集具体步骤以及毛发可的松提取的成熟实验方法，测定方法。本发明构建了完整的对于猕猴自闭症的早期毛发标志物的筛查方法，解决了现有技术筛选自闭症毛发标志物的限制：对于猕猴中毛发可的松提取技术并不十分成熟；现有技术缺乏基于对观察对象的毛发可的松水平进行长期连续动态监测。因此，本发明提供了自闭症的早期标志物鉴定方法，并且为自闭症患者尤其是自闭症儿童的早期诊断和长期监测奠定理论基础。

技术研发人员：冯晓丽,黎思雨
受保护的技术使用者：昆明医科大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/14