一种鉴别非小细胞肺癌及其肺腺癌与肺鳞癌的标志物及鉴别方法

本发明涉及一种鉴别非小细胞肺癌及其肺腺癌与肺鳞癌的标志物及鉴别方法，属于生物医学分析领域。

背景技术：

1、肺癌是全世界发病率和死亡率增长最快的恶性肿瘤之一，非小细胞肺癌(nsclc)是其主要亚型，分为3种主要病理亚型：腺癌(lung adenocarcinoma，luad)，鳞状细胞癌(lung squamous carcinoma，lusc)和大细胞癌(large-cell lung carcinoma，lclc)。腺癌本身占所有肺癌病例的38.5％，鳞状细胞癌占20％，大细胞癌占2.9％。根据疾病的阶段，nsclc的主要治疗选择包括外科手术，放疗和铂双线化疗。而随着高通量测序技术的发展，多种基因突变与异常表达被证实与nsclc的发病、耐药机制密切相关。鉴于超过60％的nsclc表达egfr，egfr已成为治疗这些肿瘤的重要治疗靶标。

2、尽管egfr突变和eml4-alk融合的发现使靶向疗法取得了重大进展，以pd-1/pd-l1为代表的免疫疗法也显示出极大的活力，但对现有药物的耐药性和疾病复发也带来了进一步的挑战，在肺癌中鉴定新的分子标靶并阐明其耐药机制成为了迫切需求。

3、focad是一个大型(基因组大小：337646bp，46个外显子)，高度保守的基因，其编码的蛋白质为focadhesin，属于黏着斑复合物蛋白，在胶质瘤和神经元细胞中发挥抑癌功能，在50％的胶质母细胞瘤中纯合缺失或突变。另外发现focadhesin通过调控激酶fak，丝/苏氨酸蛋白激酶polo-like kinase 1(plk1)磷酸化、三羧酸循环、电子传递呼吸链复合物i活性、微管组装、细胞g2/m期等，影响细胞生长。因此，focadhesin在细胞增殖、分化和基因表达的调节方面起着重要作用。已有研究表明，在结直肠癌和腺瘤性息肉病患者的种系中检测到了focad基因的杂合微缺失或截短突变，证实了focadhesin失活在各种癌症易感性和生长中的作用。

技术实现思路

1、本发明的目的在于为鉴别非小细胞肺癌及其肺腺癌与肺鳞癌寻找新的标志物及其发现该标志物的肿瘤调控功能，提供一种鉴别非小细胞肺癌及其肺腺癌与肺鳞癌的标志物及鉴别方法。

2、本发明的目的是通过如下技术方案来完成的，一种鉴别非小细胞肺癌及其肺腺癌与肺鳞癌的标志物，所述标志物为黏着斑复合物蛋白focadhesin，敲低focadhesin表达显著抑制了非小细胞肺癌的生长、克隆形成、迁移和侵袭。focadhesin在非小细胞肺癌中异常高表达，尤其在肺腺癌细胞中高表达，却在肺鳞癌细胞中低表达，从而鉴别肺腺癌与肺鳞癌。

3、一种鉴别非小细胞肺癌中肺腺癌与肺鳞癌的鉴别方法，该方法包括如下步骤：

4、a.tcga数据库分析focad在肺腺癌与肺鳞癌中的表达；

5、b.通过western blotting检测focadhesin在正常肺细胞与肺腺癌细胞株，癌旁正常组织与临床非小细胞肺癌组织样本中的表达；

6、c.使用慢病毒focad shrna分别感染肺腺癌pc-9和h1975细胞株，嘌呤霉素筛选h1975细胞8天建立稳定表达focadshrna细胞株，建立focad敲低细胞模型，制备蛋白裂解液，western blotting检测focadhesin表达；

7、d.瞬时敲低focadhesin的pc-9细胞以及嘌呤霉素筛选8天建立稳定表达focadshrnah1975细胞株，mtt实验检测focad敲低对pc-9与h1975细胞活力的影响并定量分析；

8、e.嘌呤霉素筛选8天建立稳定表达focadshrna细胞株h1975以及瞬时感染

9、focadshrna 6天细胞株pc-9，细胞克隆形成实验并定量分析；

10、f.瞬时感染focadshrna 6天细胞株pc-9，细胞划痕分析细胞迁移；

11、g.嘌呤霉素筛选8天建立稳定表达focadshrna细胞株h1975以及瞬时感染focadshrna6天细胞株pc-9，基质胶transwell分析细胞侵袭及其定量分析。

12、本发明通过黏着斑复合物focadhesin来鉴别解决了非小细胞肺癌中肺腺癌与肺鳞癌特征，从而可以快速的判断肿瘤发展情况。

技术特征：

1.一种鉴别非小细胞肺癌及其肺腺癌与肺鳞癌的标志物，其特征在于：所述标志物为黏着斑复合物蛋白focadhesin，所述focadhesin调控非小细胞肺癌的生长、克隆形成、迁移和侵袭，黏着斑复合物蛋白focadhesin在非小细胞肺癌中高表达，尤其在肺腺癌细胞中高表达，但在肺鳞癌细胞中低表达，从而鉴别肺腺癌与肺鳞癌。

2.一种利用权利要求1所述的鉴别非小细胞肺癌及其肺腺癌与肺鳞癌的鉴别方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：

技术总结
一种鉴别非小细胞肺癌及其肺腺癌与肺鳞癌的标志物及鉴别方法，所述标志物为黏着斑复合物蛋白Focadhesin（FOCAD），所述高表达Focadhesin调控非小细胞肺癌的生长、克隆形成、迁移和侵袭。与正常肺细胞和癌旁组织相比，Focadhesin在非小细胞肺癌中异常高表达，并在肺腺癌细胞中高表达，却在肺鳞癌细胞中低表达，从而鉴别肺腺癌与肺鳞癌，本发明通过黏着斑复合物蛋白Focadhesin来鉴别解决了非小细胞肺癌中肺腺癌与肺鳞癌的特征，从而可以快速的判断肿瘤发展情况。

技术研发人员：唐仟,王志鹏,欧文斌
受保护的技术使用者：浙江理工大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/14