一种何首乌道地性和生产规范性的关键技术指标的筛选方法与流程

本发明涉及中药质量评价，尤其涉及一种何首乌道地性和生产规范性的关键技术指标的筛选方法。

背景技术：

1、何首乌为蓼科植物何首乌属fallopia何首乌polygonum multiflorum thunb.的干燥块根，拥有千百年的药用历史，具有多成分、多途径、多靶点的作用特点。其化学成分丰富，目前分离得到的化合物高达180种，主要包括蒽醌类、二苯乙烯苷衍生物类、黄酮类、多酚类、生物碱类等；药理作用多样，经研究验证的有抗炎、抗氧化、免疫调节、抗肿瘤、调节血脂等。

2、中药生产中质量影响因素较为复杂，如产地、生长年限、炮制方式等，都可能通过影响其化学成分代谢而影响其安全性及有效性，进而影响整体质量。目前关于何首乌的质量控制和评价研究，多集中在何首中主要成分和现代药理活性成分，所选择的质控指标与何首乌整体质量和传统中医临床相关性较低。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的在于提供一种何首乌道地性和生产规范性的关键技术指标的筛选方法，本发明的筛选方法筛选出的差异性成分为何首乌道地产区鉴别及生长年限推测提供新方法，为何首乌药材及饮片质量控制和评价提供了科学依据。

2、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

3、本发明提供了一种何首乌道地性和生产规范性的关键技术指标的筛选方法，包括以下步骤：

4、对批量何首乌样品分别进行提取，得到批量何首乌代谢成分；

5、对所述批量何首乌代谢成分进行液质检测，得到批量何首乌样品的质谱信息；

6、将所述批量何首乌样品的质谱信息分别进行数据预处理，得到批量何首乌样品的整合数据；

7、对所述批量何首乌样品的整合数据进行两两间显著性分析，得到批量何首乌样品的潜在差异性代谢成分；

8、对所述批量何首乌样品的潜在差异性代谢成分进行偏最小二乘法分析，得到何首乌的关键技术指标。

9、优选地，所述关键技术指标包括产地差异性代谢成分或生长年限差异性代谢成分。

10、优选地，所述提取包括：将何首乌样品和乙醇溶液混合，进行提取，过滤所得滤液为何首乌代谢成分；所述乙醇溶液的体积浓度为70％；所述何首乌样品和乙醇溶液的用量比为1g：20ml；所述提取为超声提取，所述超声提取的时间为20min。

11、优选地，所述液质检测包括液相检测和质谱检测；

12、所述液相检测的参数包括：

13、色谱柱为agilent zorbax rrhd sb-c18，2.1mm×100mm，1.8μm；

14、流动相体系包括流动相a和流动相b；

15、所述流动相a为甲醇，所述流动相b为0.1％甲酸；

16、梯度洗脱为：0～5min，25％～30％流动相a；5～15min，30％～40％流动相a；15～18min，40％～50％流动相a；18～23min，50％～55％流动相a；23～30min，55％～65％流动相a；30～35min，65％～85％流动相a；35～40min，85％流动相a；40～50min，85％～90％流动相a；50～60min，90％流动相a；60～61min，90％～100％流动相a；61～70min，100％流动相a；柱温为35℃；流速：0.25ml/min；进样量1μl。

17、优选地，所述质谱检测的参数包括：

18、离子源为电喷雾离子源，模式为负模式，扫描模式为一级全扫描模式，质量范围为100～1500m/z，扫描速率为3spectra/s，毛细管电压为3.5kv，喷嘴电压为1kv，毛细管出口电压为150v，锥孔电压为65v；干燥气温度为350℃；干燥气流速为8l/min，鞘气温度为350℃，鞘气流速为11l/min。

19、优选地，所述数据预处理的软件为agilent mass hunter profinder b.06.00软件；所述整合数据的格式为cef格式。

20、优选地，所述两两间显著性分析前，还包括进行主成分分析。

21、优选地，所述两两间显著性分析包括t-test和fold change分析；

22、所述t-test中p<0.05；

23、所述fold change分析中倍数变化值fc≥1。

24、优选地，所述两两间显著性分析通过火山图体现。

25、优选地，所述偏最小二乘法分析中，vip值≥1。

26、本发明提供了一种何首乌道地性和生产规范性的关键技术指标的筛选方法，包括以下步骤：对批量何首乌样品分别进行提取，得到批量何首乌代谢成分；对所述批量何首乌代谢成分进行液质检测，得到批量何首乌样品的质谱信息；将所述批量何首乌样品的质谱信息分别进行数据预处理，得到批量何首乌样品的整合数据；对所述批量何首乌样品的整合数据进行两两间显著性分析，得到批量何首乌样品的潜在差异性代谢成分；对所述批量何首乌样品的潜在差异性代谢成分进行偏最小二乘法分析，得到何首乌的关键技术指标。

27、本发明的筛选方法采用uhplc-q-tof-ms技术，结合植物代谢组学理念和化学计量学分析方法对不同产地和生长年限的何首乌样品进行分析。筛选出的关键技术指标为何首乌道地产区鉴别及生长年限推测提供新方法，为何首乌药材及饮片质量控制和评价提供了科学依据。

技术特征：

1.一种何首乌道地性和生产规范性的关键技术指标的筛选方法，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，所述关键技术指标包括产地差异性代谢成分或生长年限差异性代谢成分。

3.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，所述提取包括：将何首乌样品和乙醇溶液混合，进行提取，过滤所得滤液为何首乌代谢成分；所述乙醇溶液的体积浓度为70％；所述何首乌样品和乙醇溶液的用量比为1g：20ml；所述提取为超声提取，所述超声提取的时间为20min。

4.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，所述液质检测包括液相检测和质谱检测；

5.根据权利要求4所述的筛选方法，其特征在于，所述质谱检测的参数包括：

6.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，所述数据预处理的软件为agilentmass hunter profinder b.06.00软件；所述整合数据的格式为cef格式。

7.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，所述两两间显著性分析前，还包括进行主成分分析。

8.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，所述两两间显著性分析包括t-test和fold change分析；

9.根据权利要求1或8所述的筛选方法，其特征在于，所述两两间显著性分析通过火山图体现。

10.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，所述偏最小二乘法分析中，vip值≥1。

技术总结
本发明属于中药质量评价技术领域，提供了一种何首乌道地性和生产规范性的关键技术指标的筛选方法，本发明的筛选方法采用UHPLC‑Q‑TOF‑MS技术，结合植物代谢组学理念和化学计量学分析方法对不同产地和生长年限的何首乌样品进行分析。筛选出的关键技术指标为何首乌道地产区鉴别及生长年限推测提供新方法，为何首乌药材及饮片质量控制和评价提供了科学依据。

技术研发人员：王雪婷,魏锋,马双成,杨建波,程显隆,王莹,高慧宇,宋云飞
受保护的技术使用者：中国食品药品检定研究院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/14