生物样品中新型载体制剂所释放游离药物的在线SPE分离方法与流程

本发明涉及载体制剂spe分离方法，尤其涉及生物样品中新型载体制剂所释放游离药物的在线spe分离方法。

背景技术：

1、spe是一种吸附剂萃取，样品通过填充吸附剂的一次性萃取柱，分析物和杂质被保留在柱上，然后分别用选择性溶剂去除杂质，洗脱出分析物，从而达到分离的目的。在复杂的生物样品中评估游离药物浓度，到目前为止最流行的方法是平衡透析和超滤，而后者似乎更受欢迎，因为它的简单性和高通量的潜力。替代方法包括分析超速离心法、固相微萃取(spme)和光学生物传感器(表面等离子体共振)，虽然还有一些技术可以无需从结合蛋白中分离药物即可测量游离药物的浓度(如量热法.色谱法，电泳法和光谱法)，但是不适合于分析复杂的生物样品。结合现有的分析手段可以得知生物样品中所释放的游离药物在分析上存在不便，难度高、效率低的问题。鉴于上述的多种原因，我们提出一种能够将生物样品中新型载体制剂所释放游离药物快速、高效检测的在线spe分离方法。

技术实现思路

1、本发明的目的是针对背景技术中存在的样品中所释放的游离药物在分析上存在不便，难度高、效率低还存在分析周期长等的问题，提出一种能够将生物样品中新型载体制剂所释放游离药物快速、高效检测的在线spe分离方法。

2、本发明的技术方案：生物样品中新型载体制剂所释放游离药物的在线spe分离方法，包括用于游离药物分离分析的处理系统，系统包括分析泵、spe泵、高压样品管理器和色谱柱加热器/冷却器；

3、还包括载体制剂所释放游离药物的在线分析方法，所述方法包括以下处理步骤：

4、步骤一：加载；通过spe进样器端口加载带有游离药物的样品；

5、步骤二：清洗；目标游离药物进行清洗；

6、步骤三：洗脱；二元溶剂管理器采用反冲梯度，将萃取柱a上吸附的分析物洗脱到uolc分析柱上，进行峰的重聚焦；

7、步骤四：再平衡；在步骤三进行的过程中萃取柱b再生，重现平衡到原始条件，进行下一个分析。

8、优选的，所述系统配置有uplc光电二极管阵列、荧光检测器、质谱仪，所述系统通过masslynx软件控制。

9、优选的，所述步骤一中加载泵为四元溶剂管理器，设置为2ml/min的高水溶液。

10、优选的，所述步骤一用于将样品从进样环转移至萃取柱a上，并对目标游离药物进行吸附后清除保留较弱的干扰物。

11、优选的，清除保留较弱的干扰物采用含有＜20％有机溶剂的清洗液。

12、优选的，所述处理系统还配置有附加溶剂管路，用于在洗脱步骤前为清洗步骤选择最佳溶剂混合。

13、与现有技术相比，本发明具有如下有益的技术效果：

14、1、本发明对游离药物的分离分析中从加载样品开始，通过spe进样器端口加载样品，加载泵为uplc四元溶剂管理器(qsm)，设置为2ml/min的高水溶液；它将样品从进样环移动到萃取柱a上；目标分析物被吸附后，萃取方法继续用温和的清洗液(<20％的有机溶剂)清除保留较弱的干扰物；完成清洗步骤后，二元溶剂管理器(bsm)采用反冲梯度，将萃取柱a上吸附的分析物洗脱到uplc分析柱上，进行峰的重聚焦；在萃取柱a的洗脱过程中，萃取柱b进行再生，然后重现平衡到原始条件，进行下一个分析；即便是在spe和lc需要不同的条件和吸附剂时，在线spe系统也可以排列多种方法以进行连续操作；使用附加溶剂管路，可以在洗脱前为清洗步骤选择最佳的溶剂混合方法，并选择高效的溶剂混合方法进行残留管理，从而进一步优化萃取方法；本发明还可以旁路整个spe通路进样，以用做标准的uplc/ms/ms系统；

15、2、本发明提出的分离分析系统，使得生物样品萃取、净化、浓缩、分离和检测、定量整个过程均在同一个密闭的管路系统、同一软件环境中全自动完成；大大减小了人工干预、分析成本，提高了实验室分析效率，能够轻松地应对质控。

技术特征：

1.生物样品中新型载体制剂所释放游离药物的在线spe分离方法，其特征在于，包括用于游离药物分离分析的处理系统，系统包括分析泵、spe泵、高压样品管理器和色谱柱加热器/冷却器；

2.根据权利要求1所述的生物样品中新型载体制剂所释放游离药物的在线spe分离方法，其特征在于，所述系统配置有uplc光电二极管阵列、荧光检测器、质谱仪，所述系统通过masslynx软件控制。

3.根据权利要求2所述的生物样品中新型载体制剂所释放游离药物的在线spe分离方法，其特征在于，所述步骤一中加载泵为四元溶剂管理器，设置为2ml/min的高水溶液。

4.根据权利要求3所述的生物样品中新型载体制剂所释放游离药物的在线spe分离方法，其特征在于，所述步骤一用于将样品从进样环转移至萃取柱a上，并对目标游离药物进行吸附后清除保留较弱的干扰物。

5.根据权利要求4所述的生物样品中新型载体制剂所释放游离药物的在线spe分离方法，其特征在于，清除保留较弱的干扰物采用含有＜20％有机溶剂的清洗液。

6.根据权利要求1所述的生物样品中新型载体制剂所释放游离药物的在线spe分离方法，其特征在于，所述处理系统还配置有附加溶剂管路，用于在洗脱步骤前为清洗步骤选择最佳溶剂混合。

技术总结
本发明涉及载体制剂SPE分离方法技术领域，尤其涉及生物样品中新型载体制剂所释放游离药物的在线SPE分离方法。其技术方案包括用于游离药物分离分析的处理系统，系统包括分析泵、SPE泵、高压样品管理器和色谱柱加热器/冷却器；还包括载体制剂所释放游离药物的在线分析方法，所述方法包括以下处理步骤：步骤一：加载；步骤二：清洗；步骤三：洗脱；步骤四：再平衡。本发明提出的分离分析系统，使得生物样品萃取、净化、浓缩、分离和检测、定量整个过程均在同一个密闭的管路系统、同一软件环境中全自动完成；大大减小了人工干预、分析成本，提高了实验室分析效率，能够轻松地应对质控。

技术研发人员：李卫
受保护的技术使用者：上海衡领医药科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15