本发明涉及肿瘤检测试剂,特别涉及一种以gd2神经节苷脂为靶点检测髓母细胞瘤微小残留病灶的试剂组合物及其应用、试剂盒。
背景技术:
1、髓母细胞瘤(medulloblastoma)是首先由bailey和cushing命名的一种儿童后颅窝恶性胶质瘤。髓母细胞瘤的细胞形态很像胚胎期的髓母细胞,因此采用这个名称。髓母细胞是一种很原始的无极细胞。在人胚胎中仅见于后髓帆,这点与髓母细胞瘤好发于小脑下蚓部相符合。髓母细胞瘤是颅内恶性程度最高的胶质瘤,肿瘤高度恶性,生长快,病程短,自发病至就诊平均在4个月左右,最短的10天,最长的1年左右。主要表现为颅内压增高症状和小脑症状。
2、目前,对髓母细胞瘤的诊断技术主要通过脑脊液细胞涂片检测,但涂片技术灵敏度有限,不能可靠地检测到微小病灶,而且无法准确地量化浸润性肿瘤细胞的数量,低于1%的肿瘤细胞数量几乎不能被常规的细胞形态学检测到,且骨髓分类计数对操作形态识别能力要求高,主观性较强,缺乏可以量化的实验室指标。
3、综上,现有髓母细胞瘤的脑脊液细胞涂片检测技术存在技术灵敏度有限,不能可靠地检测到微小病灶,主观性强,难以形成规范化检测的问题。
技术实现思路
1、为解决上述背景技术中现有技术中的不足,本发明提供一种以gd2神经节苷脂为靶点检测髓母细胞瘤微小残留病灶的试剂组合物,其技术方案如下:
2、该试剂组合物由抗cd45抗体、抗cd56抗体、抗cd81抗体以及抗gd2抗体四种不同荧光素标记的胞膜单克隆抗体组成;所述试剂组合物用于加入到待测样本呈单个细胞悬液状态的流式管中。
3、在一实施例中,所述抗cd45抗体、所述抗cd56抗体、所述抗cd81抗体以及所述抗gd2抗体均为荧光素标记的胞膜单克隆抗体;
4、所述抗cd45抗体、所述抗cd56抗体、所述抗cd81抗体以及所述抗gd2抗体的荧光标记顺序为fitc、pe、percp、apc。
5、在一实施例中,所述抗cd45抗体、所述抗cd56抗体、所述抗cd81抗体以及所述抗gd2抗体以体积比为(1~1.5):(1~1.5):(1~1.5):(1~1.5)混合。
6、本发明还提供一种试剂盒,其包括试剂组合物以及多个容器;各所述容器分别容置如上所述的试剂组合物中的各种抗体(所述抗cd45抗体、所述抗cd56抗体、所述抗cd81抗体以及所述抗gd2抗体)。优选地,所述试剂盒还包括缓冲液,与流式细胞仪配套使用的流式管。
7、本发明还提供一种试剂组合物在制备用于检测髓母细胞瘤患者脑脊液的流式细胞上机样本中的应用,其中,所述试剂组合物为如上所述的试剂组合物。
8、本发明还提供一种试剂组合物制备用于检测髓母细胞瘤患者脑脊液的流式细胞上机样本中的方法,其包括以下步骤:
9、将待测样本加入流式管中,使其成单个细胞悬液状态,每管流式管的体积不低于100μl,并保证细胞量不少于1×105/管;
10、向装有待测样本的流式管中加入所述试剂组合物,并将流式管于室温避光孵育;
11、向孵育后的流式管中加入磷酸盐缓冲液混匀,离心处理去上清液,用细胞染色缓冲液重悬细胞,即得到所述流式细胞上机样本。优选地,所述离心处理采用1500r/mi n×5mi n密度梯度离心。
12、其中,所述试剂组合物为如上所述的试剂组合物。
13、在一实施例中,所述单个细胞悬液状态的待测样品量、抗cd45抗体、抗cd56抗体、抗cd81抗体以及抗gd2抗体的比例为(100~200)μl:(1~1.5)μl:(1~1.5)μl:(1~1.5)μl:(1~1.5)μl。
14、本发明还提供一种检测髓母细胞瘤脑脊液微小残留病灶的装置,其包括检测模块和分析模块;
15、所述检测模块包括流式细胞上机样本,所述检测模块用于通过流式细胞检测术检测流式细胞上机样本,获得检测结果;即其功能为对流式细胞上机样本进行流式细胞上机检测;
16、所述分析模块用于分析所述检测模块的检测结果;即其功能为对检测结果进行分析,以判别髓母细胞瘤;
17、其中,通过如上所述的试剂组合物加入到待测样本呈单个细胞悬液状态的流式管中,制得所述流式细胞上机样本;或,采用权利要求上所述的试剂组合物制备用于检测髓母细胞瘤患者脑脊液的流式细胞上机样本的方法,制得所述流式细胞上机样本。
18、在一实施例中,其用于检测髓母细胞瘤脑脊液微小残留病灶的过程为:
19、s1、制备流式细胞上机样本:
20、s2、将流式细胞上机样本进行流式细胞上机检测:
21、其中,流式细胞上机检测时的设门方式为:使用fsc/ssc设置活细胞门p1,得到单个活细胞;p1门内使用cd45/ssc抗体设置各血细胞门;设置p2门得到cd45-细胞;p2门内,使用cd56/cd81抗体设置p3门检测cd56+/cd81+细胞;在p3门内,使用gd2/ssc抗体检测gd2+细胞。
22、本发明还提供一种通过流式细胞术检测髓母细胞瘤脑脊液微小残留病灶的方法,包括以下步骤:
23、s1、制备流式细胞上机样本:
24、其中,通过如上所述的试剂组合物加入到待测样本呈单个细胞悬液状态的流式管中,制得所述流式细胞上机样本;或,采用如上所述的试剂组合物制备用于检测髓母细胞瘤患者脑脊液的流式细胞上机样本的方法,制得所述流式细胞上机样本;
25、s2、将流式细胞上机样本进行流式细胞上机检测:
26、其中,流式细胞上机检测时的设门方式为:使用fsc/ssc设置活细胞门p1,得到单个活细胞;p1门内使用cd45/ssc抗体设置各血细胞门;设置p2门得到cd45-细胞;p2门内,使用cd56/cd81抗体设置p3门检测cd56+/cd81+细胞;在p3门内,使用gd2/ssc抗体检测gd2+细胞。
27、基于上述,与现有技术相比,本发明具有以下有益效果:
28、本发明提供的试剂组合物,可应用于流式细胞术检测髓母细胞瘤患者脑脊液的微小残留病灶,实现了高度灵敏、高特异性和高准确度诊断,可用于对髓母细胞瘤患者脑脊液的微小残留病灶进行筛查、诊断和随访,能够提升检测的效率、准确性和规范化,为将来实现自动化、人工智能化提供方便。
29、本发明的其它特征和有益效果将在随后的说明书中阐述,并且,部分地从说明书中变得显而易见,或者通过实施本发明而了解。本发明的目的和其他有益效果可通过在说明书、权利要求书以及附图中所特别指出的结构来实现和获得。
1.一种以gd2神经节苷脂为靶点检测髓母细胞瘤微小残留病灶的试剂组合物,其特征在于:由抗cd45抗体、抗cd56抗体、抗cd81抗体以及抗gd2抗体四种不同荧光素标记的胞膜单克隆抗体组成;
2.根据权利要求1所述的以gd2神经节苷脂为靶点检测髓母细胞瘤微小残留病灶的试剂组合物,其特征在于:所述抗cd45抗体、所述抗cd56抗体、所述抗cd81抗体以及所述抗gd2抗体均为荧光素标记的胞膜单克隆抗体;
3.根据权利要求1所述的以gd2神经节苷脂为靶点检测髓母细胞瘤微小残留病灶的试剂组合物,其特征在于:所述抗cd45抗体、所述抗cd56抗体、所述抗cd81抗体以及所述抗gd2抗体以体积比为(1~1.5):(1~1.5):(1~1.5):(1~1.5)混合。
4.一种试剂盒,其特征在于:包括试剂组合物以及多个容器;
5.试剂组合物在制备用于检测髓母细胞瘤患者脑脊液的流式细胞上机样本中的应用,其特征在于:
6.试剂组合物制备用于检测髓母细胞瘤患者脑脊液的流式细胞上机样本中的方法,其特征在于:包括以下步骤:
7.根据权利要求6所述的试剂组合物制备用于检测髓母细胞瘤患者脑脊液的流式细胞上机样本中的方法,其特征在于:
8.一种检测髓母细胞瘤脑脊液微小残留病灶的装置,其特征在于:包括检测模块和分析模块;
9.根据权利要求8所述的检测髓母细胞瘤脑脊液微小残留病灶的装置,其特征在于:其用于检测髓母细胞瘤脑脊液微小残留病灶的过程为:
10.一种通过流式细胞术检测髓母细胞瘤脑脊液微小残留病灶的方法,其特征在于,包括以下步骤: