一种磷酸胆碱含量测定的高效液相分析方法与流程

本发明属于分析，具体涉及一种磷酸胆碱含量测定的高效液相分析方法。

背景技术：

1、磷酸胆碱(cas：645-84-1)，英文名为phosphoryl choline，可参与合成磷脂，具有保护肝脏，强化肝脏，促进脂质代谢和保护脂肪肝的作用，还能加速甲基转移，供给活性甲基，促进肝脏细胞的再生；此外磷酸胆碱在体内可合成乙酰胆碱，而乙酰胆碱可活化营养神经系统；可以分解组胺，使肾胺酶活性增强，具有解毒作用。磷酸胆碱主要用作食品添加剂，用于酿造制品的品质改良剂，添加合成清酒中，可增加浓稠香气；也可稳定氨基酸及其他酒质的成分；也可用作调味料，增加菜肴鲜味。

2、目前查到使用高效液相色谱-质谱法检测饮料中磷酸胆碱的含量，但由于液相色谱-质谱法检测成本高；且磷酸胆碱没有显色基团，无法用型紫外检测器检测；目前没有相适应的液相色谱法对其进行准确定量，因此开发建立一种磷酸胆碱的高效液相色谱检测方法成为亟待解决的问题。

技术实现思路

1、本发明克服了高效液相-质谱法检测成本高，磷含量常用磷钼酸比色法，前处理繁琐操作步骤多的缺点，且磷钼酸具有腐蚀性、显色稳定时间短的缺点；而该检测方法具有样品前处理方便，试剂试液易得，检出浓度适宜，目标峰保留时间适宜，可快速通过外标法定量磷酸胆碱的含量，具有准确性、重现性和稀释后稳定性高的优点，且检测成本大大降低。

2、本发明的目的在于提供一种hplc-rid法测定磷酸胆碱含量的方法，该方法采用hplc法(等度或梯度洗脱、通用型示差检测器)进行检测，选用高分子包被型的阳离子交换柱作为色谱柱，用甲酸铵缓冲液(用甲酸调节ph)：乙腈等度或梯度洗脱，从而实现磷酸胆碱的快速定量检测。

3、本发明的技术方案如下：试样经纯水或甲醇溶解经微孔滤膜后注入高效液相色谱仪，在设置仪器参数条件下采集并记录色谱图，外标法定量计算；其中设置仪器条件为选用高分子包被型的阳离子色谱柱，柱温为30℃～40℃，流动相为体积比5～70的甲酸铵缓冲液(用甲酸调节ph值)和95～30的乙腈等度或梯度洗脱，流速为0.5ml/min～1.0ml/min，进样体积为10μl～20μl，检测器为通用型示差检测器。

4、本发明提供了一种磷酸胆碱含量测定的高效液相分析方法，所述方法包括如下步骤：

5、分别配制好供试品溶液和对照品溶液注入高效液相色谱仪中，其色谱条件为：选用高分子包被型的阳离子交换柱为分析柱，柱温为30℃～40℃，流速为0.5ml/min～1.0ml/min，流动相选择甲酸铵缓冲溶液(甲酸调节ph至3.0～4.0)为流动相a，乙腈为流动相b,以流动相a：流动相b体积比为(5～70：95～30)等度洗脱，稀释剂为纯水。

6、优选的，选用通用型rid检测器，检测器温度为40℃。

7、本发明利用外标法以峰面积计算供试品溶液中磷酸胆碱的含量。

8、本发明采用规格包括5μm 250×4.6mm的高分包被型阳离子色谱柱。

9、优选的，所述流动相a为甲酸铵缓冲液(用甲酸调节ph至3.0)，流动相b为乙腈。

10、本发明中优选流速为0.8ml/min，柱温为30℃，运行时间为30min。

11、本发明中供试品溶液、对照品溶液的配制方法如下：

12、(1)供试品溶液的制备：取产品适量，用水溶解并稀释制成含磷酸胆碱15mg/ml的供试品溶液。

13、(2)对照品溶液的制备：取磷酸胆碱对照品，用水溶解并稀释制成含磷酸胆碱10mg/ml的对照品溶液。

14、本发明中还包括高效液相系统适用性溶液，取磷酸胆碱适量，用水溶解制成含磷酸胆碱10mg/ml的溶液，连续进样6次，为系统适用性溶液。

15、本发明的具体测定方法：

16、分别量取系统适用性溶液溶液、供试品溶液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，标记磷酸胆碱的保留时间，并记录磷酸胆碱与相邻杂质的分离度，记录磷酸胆碱对照品溶液系统重复性。

17、精密量取磷酸胆碱对照品溶液20μl注入液相色谱仪，重复6次，记录色谱图，以峰面积计算相对标准偏差。精密量取供试品溶液，记录色谱图，用外标法以峰面积计定量磷酸胆碱的含量。

18、综上，本发明的效益效果如下：

19、1、本发明采用通用型rid检测器检测，该检测器灵敏度较高，基线稳定，检测成本低，检测器易获得，实现了产品前处理简单，快速准确定量磷酸胆碱的含量；

20、2、本发明还以甲酸铵缓冲液(甲酸调节ph3.0)为流动相a：以乙腈为流动相b，体积比为35：65等度洗脱，避免了以纯水为流动相，双泵高压梯度洗脱的高效液相检测，对所用色谱柱损耗小，延长色谱柱使用寿命，降低检测费用；

21、3、本发明分析方法具有较高的准确性、精密性和稳定性、方法试样配制简单、可实现磷酸胆碱的快速准确定量，节约检测时间和成本。

技术特征：

1.一种磷酸胆碱含量测定的高效液相分析方法，其特征在于，采用hplc法进行检测，且在检测时，hplc采用等度或梯度洗脱，选用高分子包被型的阳离子交换柱作为色谱柱，通用型示差检测器检测。

2.根据权利要求1所述高效液相分析方法，其特征在于，用甲酸铵缓冲液：乙腈等度或梯度洗脱，从而实现磷酸胆碱的快速定量检测。

3.根据权利要求1所述高效液相分析方法，其特征在于，试样经纯水或甲醇溶解经微孔滤膜过滤后注入高效液相色谱仪，在设置仪器参数条件下采集并记录色谱图，外标法定量计算；其中设置仪器条件为选用高分子包被型的阳离子色谱柱，柱温为30℃～40℃，流动相为体积比5～70的甲酸铵缓冲液和95～30的乙腈等度或梯度洗脱，流速为0.5ml/min～1.0ml/min，进样体积为10μl～20μl，检测器为通用型示差检测器。

4.根据权利要求1所述高效液相分析方法，其特征在于，所述hplc检测采用规格为5μm250×4.6mm的高分子包被型阳离子色谱柱。

5.根据权利要求1所述高效液相分析方法，其特征在于，在进行所述检测前，配制供试品溶液、对照品溶液：

6.根据权利要求5所述高效液相分析方法，其特征在于，分别量取对照品溶液、供试品溶液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，标记磷酸胆碱的保留时间，并记录磷酸胆碱与相邻杂质的分离度，记录磷酸胆碱对照品溶液系统重复性；

技术总结
本发明属于分析技术领域，具体公开了一种磷酸胆碱含量测定的高效液相分析方法。该检测方法选用高分子包被型的阳离子交换柱为分析柱；柱温为30℃～40℃；流速为0.5ml/min～1.0ml/min；进样量为10μl～20μl；流动相为甲酸铵缓冲液‑乙腈(5～70：95～30)；稀释剂为纯水，检测器为通用型示差(RID)检测器，检测器温度为30℃～40℃，利用外标法计算供试品中磷酸胆碱含量。本发明提供一种操作简便，检测器易得、准确度和灵敏性高，方法专属性和重现性好，便于标准化操作的高效液相分析的方法，能快速准确的定量磷酸胆碱的含量。

技术研发人员：惠翠,邵英禄,姜妍,闫奇,王伟,于凯
受保护的技术使用者：沈阳金久奇科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15