一种幽门螺旋杆菌试纸条及其制备方法与流程

本发明涉及免疫层析检测，具体涉及一种幽门螺旋杆菌试纸条制备方法。

背景技术：

1、幽门螺旋杆菌可导致胃癌且具有传染性、感染率高等特性，使得其作为一种大众的常见病，影响着多数人的胃部健康，因此建立起幽门螺旋杆菌的快速检测方法显得尤为重要。基于传统胶体金的制备方法往往耗时久且偶联时容易聚沉，使得实验进度慢且易失败。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种幽门螺旋杆菌试纸条制备方法，以解决上述背景技术中提出的现有的问题。

2、为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种幽门螺旋杆菌试纸条，包括pvc底板和顺次在pvc底板上粘连的样品垫、结合垫、反应膜和吸水垫，所述结合垫上喷涂有被胶体金偶联标记的幽门螺旋杆菌包被抗体，所述偶联标记的幽门螺旋杆菌包被抗体的浓度为0.03-0.1mg/ml；

3、所述胶体金的发射波长为500-550nm，粒径为10-50nm；

4、所述反应膜上喷涂有检测线和质控线，其中检测线为t线，质控线为c线；所述检测线上喷涂有包被幽门螺旋杆菌的捕获抗体溶液，所述质控线上喷涂有羊抗鼠igg抗体溶液。

5、优选的，所述反应膜为结合聚合物的硝酸纤维素膜，所述pvc底板的宽度为0.3-0.5cm。

6、优选的，所述样品垫与结合垫部分重合，且样品垫与结合垫的重合部分长度为0.2-0.4cm；

7、所述结合垫与反应膜部分重合，且结合垫与反应膜重合部长度为0.2-0.4cm；

8、所述反应膜与吸水垫部分重合，且反应膜与吸水垫重合部分长度为0.2-0.4cm。

9、本发明还公开了一种幽门螺旋杆菌试纸条的制备方法，经过胶体金的制备、负载有胶体金的偶联物溶液的制备和整体的制备，完成幽门螺旋杆菌试纸条的制备；具体步骤如下：

10、(ⅰ)胶体金的制备：

11、a.配备5％的柠檬酸钠溶液；

12、b.将25μl20％四氯金酸水合物加入100μl超纯水里，加热至沸腾后，向其中加入900μl配置好的柠檬酸钠水溶液，持续加热直至变红后继续加热10min，得到胶体金；

13、(ⅱ)负载有胶体金的偶联物溶液的制备：取100μl20倍浓缩的胶体金溶液，加入1μl幽门螺旋杆菌抗体，摇匀，再加入1μl10％牛血清白蛋白溶液，摇匀，得到混合溶液a，按1：6.5的比例将混合溶液a加入到丁醇中进行脱水，取出丁醇，加100μl超纯水，离心，再经过1％pbs缓冲溶液和1％牛血清白蛋白溶液洗涤一次，最后取出混合溶液a，最终重悬在100μlelutionbuffer中，得到负载有胶体金的偶联物溶液，并将其置于4℃下避光保存，备用；

14、(ⅲ)整体的制备：

15、(a)将包被幽门螺旋杆菌的捕获抗体与0.1mol的pbs缓冲液混合得到2mg/ml的包被幽门螺旋杆菌的捕获抗体溶液，并将该溶液喷涂在反应膜的检测线上，形成检测区；

16、(b)将羊抗鼠igg抗体与0.1mol的pbs缓冲液混合得到2mg/ml的羊抗鼠igg抗体溶液；并将该溶液喷涂在反应膜的质控线上，形成质控区；

17、(c)将负载有胶体金的偶联物溶液喷涂在结合垫上，烘干，备用；

18、(d)在pvc底板上依次固定样品垫、结合垫、反应膜和吸水垫，即完成了幽门螺旋杆菌试纸条的制备。

19、与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明可以直接用于检测幽门螺旋杆菌，相较于现有的通过pcr检测的技术，能够有效的缩短检测时间，且检测成本低，操作便捷度高；同时，本申请利用胶体金进行标记，利用丁醇进行脱水，该方法能够大幅度提高偶联的时间，比传统的吸附法更加的稳定，不易聚沉。

技术特征：

1.一种幽门螺旋杆菌试纸条，包括pvc底板和顺次在pvc底板(4)上粘连的样品垫(1)、结合垫(3)、反应膜(2)和吸水垫(5)，其特征在于：所述结合垫(3)上喷涂有被胶体金偶联标记的幽门螺旋杆菌包被抗体，所述偶联标记的幽门螺旋杆菌包被抗体的浓度为0.03-0.1mg/ml；

2.根据权利要求1所述的一种幽门螺旋杆菌试纸条，其特征在于：所述反应膜(2)为结合聚合物的硝酸纤维素膜，所述pvc底板(4)的宽度为0.3-0.5cm。

3.根据权利要求1所述的一种幽门螺旋杆菌试纸条，其特征在于：所述样品垫(1)与结合垫(3)部分重合，且样品垫(1)与结合垫(3)的重合部分长度为0.2-0.4cm；

4.一种如权利要求1所述的幽门螺旋杆菌试纸条的制备方法，其特征在于：经过胶体金的制备、负载有胶体金的偶联物溶液的制备和整体的制备，完成幽门螺旋杆菌试纸条的制备；具体步骤如下：

技术总结
本发明公开了一种幽门螺旋杆菌试纸条及其制备方法，包括PVC底板和顺次在PVC底板上粘连的样品垫、结合垫、反应膜和吸水垫，所述结合垫上喷涂有被胶体金偶联标记的幽门螺旋杆菌包被抗体，所述偶联标记的幽门螺旋杆菌包被抗体的浓度为0.03‑0.1mg/ml；经过胶体金的制备、负载有胶体金的偶联物溶液的制备和整体的制备，完成幽门螺旋杆菌试纸条的制备；本发明可以直接用于检测幽门螺旋杆菌，相较于现有的通过PCR检测的技术，能够有效的缩短检测时间，且检测成本低，操作便捷度高；同时，本申请利用胶体金进行标记，利用丁醇进行脱水，该方法能够大幅度提高偶联的时间，比传统的吸附法更加的稳定，不易聚沉。

技术研发人员：朱星宇,刘国东,孙春雪,任宏鑫,王振洋,朱永新
受保护的技术使用者：江苏相霖生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15