一种通过FAS对胚胎种植潜能进行无创性评估的方法与流程

本发明涉及生殖医学领域，具体而言是一种无创性预测胚胎种植潜能的方法。

背景技术：

1、人类辅助生殖技术(art)是治疗不孕不育患者的先进技术。为提高活产率和降低多胎妊娠率，选择具有更高发育潜能的胚胎进行单胚胎移植至关重要。传统的胚胎选择主要是基于胚胎的形态学评分，这方法具有较强的主观性。因此，需要通过一种客观、无创性的评估方法来预测胚胎种植潜能。众多研究证据表明，胚胎能够分泌各种蛋白，例如细胞因子、趋化因子、生长因子等，而这些分泌蛋白可能在胚胎种植中发挥重要作用。因此，通过检测胚胎条件培养液中的分泌蛋白来无创性预测胚胎种植潜能成为可能。但胚胎分泌蛋白含量极低，且体积小(25-30μl)，导致检测困难，许多技术的灵敏度无法达到检测要求，而单分子阵列(simoa)平台能够以超高灵敏度检测单囊胚条件培养液(sbcm)中的单个分泌因子。

2、fas与肿瘤坏死因子家族有关，在传递细胞凋亡信号和触发凋亡的过程中发挥作用。有研究证明，在小鼠囊胚中检测到fas mrna和蛋白的表达，是胚胎发育的关键因素。另外有研究发现，种植成功比种植失败的囊胚条件培养液中fas水平显著升高。但该研究的pea检测方法背景信号强，操作过程繁琐，易引入变异因素，制约临床应用。simoa是基于泊松分布原理和单分子技术发展起来的数字化超灵敏检测蛋白标志物的平台。该技术平台采用传统elisa双抗夹心法的方法，将蛋白捕获至50fl的反应微孔并荧光成像，通过计算并实现对蛋白的定量检测。因此，基于simoa技术开发一种高灵敏度、自动化检测、快速且适合推广的fas检测方法，对检测胚胎发育潜能的可能标志物fas具有重要意义。本发明通过检测人单囊胚条件培养液中fas的含量，并分析研究fas的浓度与胚胎质量和妊娠结局的关系。

技术实现思路

1、本发明的主要目的是提供一种通过fas对胚胎种植潜能进行无创性评估的方法，以解决现有技术中存在的不足。

2、为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：一种通过fas对胚胎种植潜能进行无创性评估的方法，具体包括以下步骤：

3、s10：胚胎培养与单囊胚条件培养液样品收集：

4、在胚胎培养到day 3时，将卵裂期胚胎单独转移至25ul含10％人血清白蛋白的囊胚培养液液滴中，培养至day 5或day 6；根据gardner评分系统对形成的囊胚进行评分，且对可利用囊胚进行玻璃化冷冻处理；胚胎冷冻后收集囊胚条件培养液，冻存于-80℃，作为研究待检测的样品；

5、s20：胚胎移植及妊娠结局追踪：

6、解冻囊胚并在胚胎移植日进行胚胎移植，移植30天后，b超见妊娠囊，则判定为临床妊娠；

7、s30：检测样品的选择与前处理：

8、选择来源于冻融胚胎移植的单囊胚条件培养液样品；样品室温解冻后，测量样品体积，并进行样品稀释处理；

9、s40：用自开发的fas simoa试剂盒来检测来源于移植胚胎的单囊胚条件培养液中fas的含量；

10、s50：通过对单囊胚条件培养液中fas的检测数据进行统计分析，确定fas对胚胎种植潜能的预测价值。

11、优选地，在所述的s10中，根据gardner评分系统对形成的囊胚进行评分，囊胚评级分为1级(aa,ab,ba,bb)、2级(ac,ca,bc,cb)、3级(cc)囊胚，其中1级定义为优质囊胚，1、2级定义为可利用囊胚。

12、优选地，在所述的s10中，胚胎冷冻后收集30ul的囊胚条件培养液至200ul的ep管，冻存于-80℃，作为研究待检测的样品。

13、本发明公开的一种通过fas对胚胎种植潜能进行无创性评估的方法，通过研究分析发现单囊胚条件培养液中fas含量能够用于预测发育潜能更好的囊胚，进而能够提高胚胎的种植率。

技术特征：

1.一种通过fas对胚胎种植潜能进行无创性评估的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种通过fas对胚胎种植潜能进行无创性评估的方法，其特征在于，在所述的s10中，根据gardner评分系统对形成的囊胚进行评分，囊胚评级分为1级(aa,ab,ba,bb)、2级(ac,ca,bc,cb)、3级(cc)囊胚，其中1级定义为优质囊胚，1、2级定义为可利用囊胚。

3.根据权利要求2所述的一种通过fas对胚胎种植潜能进行无创性评估的方法，其特征在于，在所述的s10中，胚胎冷冻后收集30ul的囊胚条件培养液至200ul的ep管，冻存于-80℃，作为研究待检测的样品。

技术总结
本发明公开一种通过FAS对胚胎种植潜能进行无创性评估的方法，包括以下步骤：S10：胚胎培养与单囊胚条件培养液样品收集：S20：解冻囊胚并在胚胎移植日进行胚胎移植，移植30天后，B超见妊娠囊，则判定为临床妊娠；S30：选择来源于冻融胚胎移植的单囊胚条件培养液样品；样品室温解冻后，测量样品体积，并进行样品稀释处理；S40：用自开发的FASSimoa试剂盒来检测来源于移植胚胎的单囊胚条件培养液中FAS的含量；S50：通过对单囊胚条件培养液中FAS的检测数据进行统计分析，确定FAS对胚胎种植潜能的预测价值。本发明通过研究发现单囊胚条件培养液中FAS的含量能够预测胚胎的发育潜能，选择具有更好发育潜能的胚胎用于胚胎移植，以提高胚胎种植率。

技术研发人员：刘苏,陈培林,钟惠娴,陈露平,刁梁辉,孙青
受保护的技术使用者：深圳中山泌尿外科医院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15