一种同时检测6种免疫抑制剂浓度的血样前处理方法与流程

本公开涉及血药检测，尤其涉及一种同时检测6种免疫抑制剂浓度的血样前处理方法。

背景技术：

1、目前测定血液中硫唑嘌呤、6-巯基嘌呤、6-甲基巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、6-硫鸟嘌呤核苷、咪唑立宾等免疫抑制剂的含量通常可以采用高效液相色谱质谱联用法，但是并没有同时检测上述物质的方法，同时，已被报道的文献方法大多存在着样品量需求较大，标准曲线前处理需添加基质、单物质检测等问题，上述问题会增加检测难度降低检测效率，尚不适于大通量的样本检测。

2、而对于血药浓度检测，在检测前，需要先对血液或者血浆/血清样品进行样品前处理，目前，常用的血液样品前处理的方法主要有：有机溶剂提取法、固相萃取法和二者联用的方法。但是若需要同时检测血液中多种药物浓度时，由于不同样品之间的极性相差较大，可能无法实现多种药物在同一条件下进行样品前处理，进而无法满足同时检测多种药物浓度的要求。

3、因此，需要提供一种能够同时实现多种免疫抑制剂浓度检测的血样前处理方法，以备后续的样品检测。

技术实现思路

1、为了解决上述技术问题，本公开提供了一种同时检测6种免疫抑制剂浓度的血样前处理方法。

2、第一方面，本公开提供了一种同时检测6种免疫抑制剂浓度的血样前处理方法，所述血样前处理方法包括：

3、将待处理血样、内标物和蛋白沉淀剂混合并取清液进行稀释，得到待测样品；

4、其中，所述6种免疫抑制剂为硫唑嘌呤、6-巯基嘌呤、6-甲基巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、6-硫鸟嘌呤核苷和咪唑立宾。

5、相比于目前现有的前处理工艺复杂，并且不能同时处理6种免疫抑制剂而言，本公开提供的血样前处理方法仅是利用简单的蛋白沉淀剂进行处理，后续再利用稀释剂进行稀释，即可完成整个血样前处理过程，简单快捷，并且能够极大程度的降低基质效应和溶剂效应。

6、本公开提供的血样前处理方法能够实现6种免疫抑制剂浓度的待测血样的同时处理，最后检测能够一针出6种免疫抑制剂的检测结果，且分析时间短，能够极大程度的提高检测效率并且降低了血样前处理的难度，因此，本公开提供的血样前处理方法能够适用于高通量样品的前处理。

7、本公开提供的血样前处理方法得到的待测样品能够利用液相色谱或者液相色谱-质谱联用的方法进行后续的检测，本公开并不对后续的检测方法进行任何限定，任何能够实现检测的方法均能够应用。

8、作为本公开的一种优选技术方案，所述稀释使用的溶剂为纯水。

9、作为本公开的一种优选技术方案，所述清液与纯水的体积比为1:(1-5)，例如1:2、1:3、1:4等。

10、若稀释倍数较小，则无法完全避免基质效应和溶剂效应，若稀释过量，则会导致目标物的检测信号较弱。

11、作为本公开的一种优选技术方案，所述蛋白沉淀剂选自甲醇和/或乙腈。

12、作为本公开的一种优选技术方案，所述待处理血样与所述蛋白沉淀剂的体积比为1:(5-10)，例如1:6、1:7、1:8、1:9等。

13、在本公开中，待处理血样和蛋白沉淀剂的体积比在此范围内能够保证前处理的处理效果，能够尽可能的去除杂质，使样品更加稳定；若蛋白沉淀剂的添加量过低，则有可能导致杂质沉淀不完全，若蛋白沉淀剂含量过高，则会导致待处理血样被过多稀释，即待测样品中的待测物浓度过低，进而导致后续检测的困难。

14、作为本公开的一种优选技术方案，所述6种免疫抑制剂的内标物分别为硫唑嘌呤-d3、6-甲基巯基嘌呤-d3、6-巯基嘌呤-13c,15n2。

15、通过本公开限定的血样前处理条件，能够使得在仅使用3种内标物的前提下完成样品检测，节约了内标成本，且简化了前处理难度。

16、在本公开中，硫唑嘌呤、6-硫鸟嘌呤核苷和咪唑立宾对应的内标为硫唑嘌呤-d3；6-甲基巯基嘌呤和6-硫鸟嘌呤对应的内标为6-甲基巯基嘌呤-d3；6-巯基嘌呤对应的内标为6-巯基嘌呤-13c,15n2。

17、作为本公开的一种优选技术方案，在所述内标工作液中，硫唑嘌呤-d3的浓度为3.0μg/ml，6-甲基巯基嘌呤-d3的浓度为22.5μg/ml，6-巯基嘌呤-13c,15n2的浓度为3.0μg/ml。

18、作为本公开的一种优选技术方案，所述待处理血样为血浆或血清。

19、作为本公开的一种优选技术方案，所述血样前处理方法包括：

20、将待处理血样、内标工作液和蛋白沉淀剂混合，离心取上清液，然后利用纯水对上清液进行稀释，得到所述待测样品；

21、其中，所述内标工作液为含有所述6种免疫抑制剂的内标物的溶液。

22、作为本公开的一种优选技术方案，所述待处理血样和所述内标工作液的体积比为(5-10):1，例如6:1、7:1、8:1、9:1等。

23、作为本公开的一种优选技术方案，所述内标工作液利用稀释剂由内标母液稀释得到，所述内标母液是利用溶剂分别溶解所述6种免疫抑制剂各自的内标物标准品得到。

24、内标工作液的制备方法为目前本领域常用的制备方法，因此，本公开不进行过多的内标工作液的限定，任何能够可以得到所述内标工作液的制备方法均可用于被公开。

25、作为本公开的一种优选技术方案，所述稀释剂为甲醇水溶液，所述甲醇水溶液的浓度为60-80％，所述60-80％可以为65％、70％、75％、80％等。

26、本公开实施例提供的技术方案与现有技术相比具有如下优点：

27、(1)本公开提供的样本前处理仅需50μl血清，节约成本同时简化前处理步骤；

28、(2)本公开提供的血样前处理方法简单快捷，能够在尽可能短的时间内完成血样的前处理，便于后续的检测。

技术特征：

1.一种同时检测6种免疫抑制剂浓度的血样前处理方法，其特征在于，所述血样前处理方法包括：

2.根据权利要求1所述的血样前处理方法，其特征在于，所述稀释使用的溶剂为纯水。

3.根据权利要求2所述的血样前处理方法，其特征在于，所述清液与纯水的体积比为1:(1-5)。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的血样前处理方法，其特征在于，所述蛋白沉淀剂选自甲醇和/或乙腈。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的血样前处理方法，其特征在于，所述待处理血样与所述蛋白沉淀剂的体积比为1:(5-10)。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的血样前处理方法，其特征在于，所述6种免疫抑制剂的内标物分别为硫唑嘌呤-d3、6-甲基巯基嘌呤-d3、6-巯基嘌呤-13c,15n2；

7.根据权利要求1-6中任一项所述的血样前处理方法，其特征在于，所述血样前处理方法包括：

8.根据权利要求7所述的血样前处理方法，其特征在于，所述待处理血样和所述内标工作液的体积比为(5-10):1。

9.根据权利要求7或8所述的血样前处理方法，其特征在于，所述内标工作液利用稀释剂由内标母液稀释得到，所述内标母液是利用溶剂分别溶解所述6种免疫抑制剂各自的内标物标准品得到。

10.根据权利要求9所述的血样前处理方法，其特征在于，所述稀释剂为甲醇水溶液，所述甲醇水溶液的浓度为60-80％。

技术总结
本公开涉及一种同时检测6种免疫抑制剂浓度的血样前处理方法，所述血样前处理方法包括：将待处理血样、内标物和蛋白沉淀剂混合并取清液进行稀释，得到待测样品；其中，所述6种免疫抑制剂为硫唑嘌呤、6‑巯基嘌呤、6‑甲基巯基嘌呤、6‑硫鸟嘌呤、6‑硫鸟嘌呤核苷和咪唑立宾。本公开提供的样本前处理仅需50μL血清，节约成本同时简化前处理步骤；本公开提供的血样前处理方法简单快捷，能够在尽可能短的时间内完成血样的前处理，便于后续的检测。

技术研发人员：张杰,贾永娟,刘春冉,刘杏立,倪君君
受保护的技术使用者：苏州和合医学检验有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16