韭菜中的腐霉利及其代谢物3,5-二氯苯胺测定方法

本发明涉及农药检测，具体为一种韭菜中的腐霉利及其代谢物3,5-二氯苯胺测定方法。

背景技术：

1、韭菜是常见的农作物之一，其适应性强，抗寒耐热，种植广泛，可常年生产。韭菜的叶、花葶和花均作蔬菜食用；补肾健胃，裨益良多。但病虫害的频繁发生会严重影响韭菜的种植，尤其雨水偏多时，灰霉病(叶片、叶柄发病呈灰白色，水渍状，组织软化至腐烂，高湿时表面生有灰霉)时有发生。

2、腐霉利作为一种广谱内吸性杀菌剂，其主要是抑制菌体内甘油三酯的合成，具有保护和治疗的双重作用，常用于防治灰霉病，在韭菜上残留的腐霉利及其代谢物(3,5-二氯苯胺)若进入人体则会干扰内分泌，影响身体健康；3,5-二氯苯胺是在腐霉利的生物降解过程中产生的代谢物之一，其在高浓度下具有毒性、进入土壤或水体后，可能对土壤和水质造成污染，影响生态系统的平衡，对环境和人体均会产生影响。因此，对韭菜中腐霉利及其代谢产物3,5-二氯苯胺的定性定量检测尤为重要。

3、韭菜基质复杂，所含蒜氨酸会水解产生一系列硫化酯和硫醚等，对腐霉利及其代谢产物3,5-二氯苯胺的检测产生干扰，增大了检测难度。目前，常用的腐霉利检测方法有气相色谱法(gc)、气相色谱-串联质谱法(gc-ms/ms)、液相色谱法(lc)、液相色谱-质谱联用法(lc-ms)等。其中gc法具有灵敏、快速、准确、易于推广等优点，适用于基质较复杂的痕量化合物分析，定性准确度高。但前处理多采用固相萃取方法，操作繁琐且需要大量的有机试剂。

4、quechers(quick、easy、cheap、effective、rugged、safe)法是近年来新开发的快速样品前处理技术，其原理与高效液相色谱(hplc)和固相萃取(spe)相似，利用吸附剂填料与基质中的杂质相互作用，吸附杂质从而达到除杂净化的目的。其操作简单快捷且耗材用量少，在农药残留检测项目中的应用愈加广泛。

5、基于此，有必要利用quechers方法进一步优化为适合于对韭菜中腐霉利及其代谢产物3,5-二氯苯胺检测的前处理，确定最佳的实验条件，实现检测高灵敏度和高准确度，为韭菜中腐霉利及其代谢物的检测工作提供可靠参考。

技术实现思路

1、本发明意在提供一种韭菜中的腐霉利及其代谢物3,5-二氯苯胺测定方法，以解决现有技术在对韭菜中的腐霉利及其代谢物3,5-二氯苯胺测定过程中，操作繁琐且需要大量的试剂的问题。

2、为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

3、韭菜中的腐霉利及其代谢物3,5-二氯苯胺测定方法，包括以下步骤：

4、s1、将韭菜待测试样加入盛装有溶剂一的离心管中振荡，加入分层剂，震荡，离心，得到上清液a；

5、s2、取步骤s1得到的上清液a至另一离心管中，加入干燥剂和净化试剂，再次振荡离心，得到上清液b；

6、s3、取步骤s2得到的上清液b至试管中，先利用氮气吹至近干，然后再次加入溶剂二使其复溶，过膜，得到待测溶液c；

7、s4、利用气相色谱法对待测溶液c进行检测，即可以得到韭菜中的腐霉利及其代谢物3,5-二氯苯胺的含量。

8、进一步地，在s1中，溶剂一为乙腈，分层剂为nacl；待测试样、分层剂与溶剂一的质量比为1:0.2:1.5。

9、进一步地，在s2中，干燥剂为mgso4，净化试剂为n-丙基乙二胺；上清液a、干燥剂和净化试剂的质量之比为10:0.2:0.02；

10、进一步地，在s1和s2中，振荡离心的条件均为：先振荡5min，然后在8000r·min-1条件下，离心5min。

11、进一步地，在s3中，溶剂二为正己烷，上清液b与溶剂二的体积比为2:1。

12、进一步地，在s4中，气相色谱法对待测溶液c进行检测的色谱条件色谱柱为：

13、rtx-1毛细管柱为30m×0.25mm×0.25μm；进样口温度为250℃；

14、升温程序：初始温度为50℃保持1min，以20℃·min-1的速率升温至260℃，保持5min；

15、进样方式：不分流进样；柱流速为1.0ml·min-1；进样量为1.0μl。

16、技术方案的有益效果是：

17、1、本发明提供的测定方法对韭菜中的腐霉利及其代谢物3,5-二氯苯胺测定的回收率高(平均回收率在90.5％～95.6％之间)，降低了对人和环境的影响；

18、2、本发明提供的测定方法检测精确度和准确度高(相对标准偏差rsd在2.7％～7.3％)，可用内标法进行校正；而且还具有重现性，对韭菜中的腐霉利及其代谢物3,5-二氯苯胺测定数据准确；

19、3、本发明提供的测定方法操作简便，无需良好训练和较高技能便可很好地完成；测定的过程对溶剂使用量少，污染小，价格低廉且不使用含氯化物溶剂。

技术特征：

1.韭菜中的腐霉利及其代谢物3,5-二氯苯胺测定方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的韭菜中的腐霉利及其代谢物3,5-二氯苯胺测定方法，其特征在于，在s1中，溶剂一为乙腈；分层剂为nacl，待测试样、分层剂与溶剂一的质量比为1:0.2:1.5。

3.根据权利要求1所述的韭菜中的腐霉利及其代谢物3,5-二氯苯胺测定方法，其特征在于，在s2中，干燥剂为mgso4，净化试剂为n-丙基乙二胺；上清液a、干燥剂和净化试剂的质量之比为10:0.2:0.02。

4.根据权利要求1所述的韭菜中的腐霉利及其代谢物3,5-二氯苯胺测定方法，其特征在于，在s1和s2中，振荡离心的条件均为：先振荡5min，然后在8000r·min-1条件下，离心5min。

5.根据权利要求1所述的韭菜中的腐霉利及其代谢物3,5-二氯苯胺测定方法，其特征在于，在s3中，溶剂二为正己烷，上清液b与溶剂二的体积比为2:1。

6.根据权利要求1所述的韭菜中的腐霉利及其代谢物3,5-二氯苯胺测定方法，其特征在于，在s4中，气相色谱法对待测溶液c进行检测的色谱条件色谱柱为：

技术总结
本发明属于农药检测技术领域，公开了一种韭菜中的腐霉利及其代谢物3,5‑二氯苯胺测定方法，包括S1、将韭菜待测试样加入盛装有乙腈的离心管中振荡，加入NaCl，震荡，离心，得到上清液A；S2、取上清液A至另一离心管中，加入MgSO4和N‑丙基乙二胺，振荡离心，得到上清液B；S3、取上清液B至试管中，先利用氮气吹至近干，然后再次加入正己烷使其复溶，过膜，得到待测溶液C；S4、利用气相色谱法对待测溶液C进行检测，即可以得到韭菜中的腐霉利及其代谢物3,5‑二氯苯胺的含量。本发明利用QuEChERs方法进一步优化，将其用于对韭菜中腐霉利及其代谢产物3,5‑二氯苯胺检测的前处理，确定最佳的实验条件，实现检测高灵敏度和高准确度。

技术研发人员：徐国锋,闫震,匡立学
受保护的技术使用者：中国农业科学院果树研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16