一种检测HPVIgG抗体试剂盒及其制备方法与流程

本发明涉及检测，具体涉及一种检测hpv igg抗体试剂盒及其制备方法。

背景技术：

1、人乳头瘤病毒(hpv)是一种嗜人体皮肤和黏膜组织细胞的dna病毒，可广泛感染人类皮肤及生殖道、呼吸道上皮组织，它与人类多种良恶性肿瘤密切相关。目前已知hpv有近100个基因型，与人类常见疾病相关的有10多个基因型。人们根据其致癌性把其分为高危型和低危型，高危型hpv主要有16、18、31、33、39、45、51、52、56、58、59、68型；低危型hpv主要有6、11、42、43、44型。高危型hpv与宫颈癌关系密切，低危型hpv常在湿疣病人中发现。who在《关于保证重组人乳头瘤病毒类颗粒(vlp)疫苗安全性、有效性及质量的建议(who/bs/2015.2252)》中指出，中和抗体是评价hpv疫苗诱导的免疫反应是否有保护作用的金标准。《柳叶刀-感染病学》最新发表的一项研究发明，hpv疫苗诱导的中和抗体可用作疫苗效力的替代指标，来评估疫苗对高危型hpv感染和相关癌前病变的预防能力。建立稳健和标准化的血清学抗体检测方法，对当前和未来的hpv疫苗评估至关重要。

2、其中igg抗体(immunoglobulin g)在免疫应答中起着激活补体，中和多种毒素的作用。igg抗体持续时间长，是唯一能在母亲妊娠期穿过胎盘保护胎儿的抗体。它们还从乳腺分泌进入初乳，使新生儿第一时间得到抗体保护。igg是四链单体，占血清ig总量的75％，是血清和细胞外液中最主要的抗体成分。

3、化学发光免疫分析(chemiluminescence immunoassay，clia)是近十年来在世界范围内发展非常迅速的非放射性免疫分析。它具有高灵敏度、检测范围宽、操作简便快速、标记物稳定性好、无污染、仪器简单经济等优点。它是放射性免疫分析与普通酶免疫分析的取代者，是免疫分析重要的发展方向。

4、目前，接种hpv疫苗仍是预防宫颈癌主要方式之一，但检测hpv抗体的相关技术存在灵敏度低、特异性差的缺点，且对进行检测的环境条件(例如实验室安全等级)与样品质量要求较高，检测步骤繁复且容易造成受试者不适等。

5、因此，亟需提供一种检测hpv igg抗体试剂盒及其制备方法，提高检测的灵敏度和特异性，可以在常规或低生物安全等级的实验室环境内进行操作，操作简便，结果判断客观，从而达到快速评估igg抗体的水平。

技术实现思路

1、本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一，为此本发明提出一种检测hpv igg抗体试剂盒及其制备方法，提高检测的灵敏度和特异性，可以在常规或低生物安全等级的实验室环境内进行操作，操作简便，结果判断客观，从而达到快速评估中和抗体的水平。

2、本发明的第一方面提供一种检测hpv igg抗体试剂盒。

3、具体的，包括鼠源人igg抗体-吖啶酯发光试剂、hpv l1-vlp抗原-磁微粒偶联物；

4、所述鼠源人igg抗体-吖啶酯发光试剂包括鼠源人igg抗体和吖啶酯；

5、所述hpv l1-vlp抗原-磁微粒偶联物包括hpv l1-vlp抗原和磁微粒；

6、所述hpv l1-vlp抗原通过将hpv病毒的l1基因删除n末端序列同时采用点突变改造l1基因并进行蛋白质表达、蛋白质纯化和颗粒组装制得。

7、优选的，所述鼠源人igg抗体与吖啶酯的质量比为1-3：1。

8、进一步优选的，所述鼠源人igg抗体与吖啶酯的质量比为2：1。

9、优选的，所述hpv l1-vlp抗原与磁微粒的质量比为1：15-25。

10、进一步优选的，所述hpv l1-vlp抗原与磁微粒的质量比为1：20。

11、优选的，所述hpv病毒的l1基因为hpv6 l1基因、hpv11 l1基因、hpv16l1基因、hpv18 l1基因、hpv31 l1基因、hpv33 l1基因、hpv35 l1基因、hpv45 l1基因、hpv52 l1基因、hpv58 l1基因、hpv59 l1基因中的至少一种。

12、进一步优选的，所述hpv病毒的l1基因为hpv16 l1基因、hpv18 l1基因中的至少一种。

13、优选的，所述磁微粒为羧基磁微粒。

14、优选的，所述的检测hpv igg抗体试剂盒还包括激发液和预激发液。

15、优选的，所述激发液包括无机碱和增强剂。

16、优选的，所述预激发液包括无机酸和氧化剂。

17、本发明的第二方面提供一种检测hpv igg抗体试剂盒的制备方法。

18、具体的，包括以下步骤：

19、使用洗涤缓冲液洗涤磁微粒，加入等量的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和n-羟基丁二酰亚胺振荡活化；将磁微粒与hpv l1-vlp抗原反应4-6h。加入封闭缓冲液封闭1-3h，洗涤缓冲液洗涤后制得hpv l1-vlp抗原-磁微粒偶联物；

20、将鼠源人igg抗体与吖啶酯混合，偶联0.1-1.5h，透析法去除游离的吖啶酯，过凝胶层析柱纯化，根据发光强度收集流出液，制得鼠源人igg抗体-吖啶酯发光试剂。

21、本发明的第三方面提供一种检测hpv igg抗体试剂盒的检测方法。

22、具体的，包括以下步骤：

23、将待测样品与hpv l1-vlp抗原-磁微粒偶联物、鼠源人igg抗体-吖啶酯发光试剂混合，外加磁场制得沉淀复合物，弃上清液，沉淀复合物清洗后使用化学发光免疫分析法测量。

24、相对于现有技术，本发明的有益效果如下：

25、本发明通过hpv l1-vlp抗原-磁微粒偶联物与igg抗体的特异性结合，在外置磁场的作用下能够检测出血清中igg抗体水平。本发明检测hpv igg抗体试剂盒灵敏度高、特异性强，并且具有良好的重复性和准确性。

技术特征：

1.一种检测hpv igg抗体试剂盒，其特征在于，包括鼠源人igg抗体-吖啶酯发光试剂、hpv l1-vlp抗原-磁微粒偶联物；

2.根据权利要求1所述的检测hpv igg抗体试剂盒，其特征在于，所述鼠源人igg抗体与吖啶酯的质量比为1-3：1。

3.根据权利要求1所述的检测hpv igg抗体试剂盒，其特征在于，所述hpv l1-vlp抗原与磁微粒的质量比为1：15-25。

4.根据权利要求1所述的检测hpv igg抗体试剂盒，其特征在于，所述hpv病毒的l1基因为hpv6 l1基因、hpv11 l1基因、hpv16 l1基因、hpv18 l1基因、hpv31 l1基因、hpv33 l1基因、hpv35 l1基因、hpv45 l1基因、hpv52l1基因、hpv58 l1基因、hpv59 l1基因中的至少一种。

5.根据权利要求1所述的检测hpv igg抗体试剂盒，其特征在于，所述磁微粒为羧基磁微粒。

6.根据权利要求1所述的检测hpv igg抗体试剂盒，其特征在于，还包括激发液和预激发液。

7.根据权利要求6所述的检测hpv igg抗体试剂盒，其特征在于，所述激发液包括无机碱和增强剂。

8.根据权利要求6所述的检测hpv igg抗体试剂盒，其特征在于，所述预激发液包括无机酸和氧化剂。

9.权利要求1至8中任一项所述的检测hpv igg抗体试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

10.权利要求1至8中任一项所述的检测hpv igg抗体试剂盒的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

技术总结
本发明涉及检测技术领域，具体公开了一种检测HPV IgG抗体试剂盒及其制备方法。该试剂盒包括鼠源人IgG抗体‑吖啶酯发光试剂、HPV L1‑VLP抗原‑磁微粒偶联物；所述鼠源人IgG抗体‑吖啶酯发光试剂包括鼠源人IgG抗体和吖啶酯；所述HPV L1‑VLP抗原‑磁微粒偶联物包括HPV L1‑VLP抗原和磁微粒；所述HPV L1‑VLP抗原通过将HPV病毒的L1基因删除N末端序列同时采用点突变改造L1基因并进行蛋白质表达、蛋白质纯化和颗粒组装制得。本发明检测HPV IgG抗体试剂盒灵敏度高、特异性强，并且具有良好的重复性和准确性。

技术研发人员：陆家海,廖聪慧,叶宇翔,肖人苗
受保护的技术使用者：广东省一鼎生物技术有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16