一种抗体稀释液及其制备方法和应用与流程

本发明属于生物，具体涉及一种抗体稀释液及其制备方法和应用。

背景技术：

1、在众多生物实验当中，免疫实验方法应用极为普遍，包括免疫吸附、免疫荧光、免疫组化、免疫共沉淀等，其核心都是抗原抗体的特异识别和结合。诚然，抗原抗体结合最关键是抗体的特异性，但抗原抗体相互匹配的浓度，反应的温度、时间，所处溶液的电解质含量以及ph值等因素都会影响两者的结合。这些都需要抗体稀释液去调节和平衡。

2、目前现有的抗体稀释液主要有如下问题：一是抗体稀释液仅使抗体浓度下降，并不能促进抗原抗体识别和结合，往往只能通过延长孵育时间来达到抗原抗体结合的目的；二是不能有效避免非特异性背景的产生；三是抗体稀释液的成分相当复杂，不利于配制，还有生物危害，例如中国专利cn114441746a利用牛血清白蛋白(bsa)以及山羊igg来保护抗体，增加抗体的稳定性，但是bsa和igg的加入不仅会带来病毒支原体感染的风险，存在生物安全问题，而且很大程度上提高了制作成本，不适合推广应用；还如中国专利cn109991408a含有聚乙烯吡咯烷酮、腺苷三磷酸镁盐等多种成分，配制困难，不利于实际操作；四是由于抗体本身为蛋白质，结构不稳定，常温或者更高温度条件下存在变性的可能，出现非特异性结合，现有抗体稀释液进行稀释后通常需要在4℃条件下进行孵育，保持其原有活性，例如中国专利cn115201461a公开了一种抗体稀释液的改良方法，将聚乙二醇水凝胶添加到常用的抗体稀释液tbst中，水凝胶独特的记忆性，在抗原抗体结合以后对结合部分进行包绕，从而使其形成稳定的“抗原-抗体复合物”，有效提高抗原抗体结合率，但是其只能在4℃条件下进行孵育。

技术实现思路

1、本发明的目的在于解决现有技术的不足，提供一种配制简单，无毒无害，成本低，使用安全、方便的抗体稀释液，能够保护抗体，增加抗体的稳定性，实现常温孵育，并且缩短孵育时间，大大提高抗原抗体结合率，减少非特异性结合。

2、本发明提供了一种抗体稀释液，所述抗体稀释液包括如下组分：羧甲基纤维素钠、氯化钠、三羟甲基氨基甲烷、吐温-20和水。

3、优选的，所述抗体稀释液中羧甲基纤维素钠的浓度为0.5～5mol/l；

4、所述抗体稀释液中氯化钠的浓度为0.1～0.2mol/l；

5、所述抗体稀释液中三羟甲基氨基甲烷的浓度为0.02～0.03mol/l；

6、所述抗体稀释液中吐温-20的体积百分含量为0.1％～0.15％。

7、优选的，所述抗体稀释液中羧甲基纤维素钠的浓度为1～2mol/l；

8、所述抗体稀释液中氯化钠的浓度为0.15mol/l；

9、所述抗体稀释液中三羟甲基氨基甲烷的浓度为0.02mol/l；

10、所述抗体稀释液中吐温-20的体积百分含量为0.1％。

11、优选的，所述抗体稀释液的ph为7.0～7.2。

12、本发明还提供了上述技术方案所述的抗体稀释液的制备方法，包括如下步骤：

13、将所述三羟甲基氨基甲烷、氯化钠和水混合，调节ph至7.0～7.2，得到缓冲溶液；

14、将所述缓冲溶液、羧甲基纤维素钠和吐温-20混合，得到所述抗体稀释液。

15、本发明还提供了一种抗体产品，所述抗体产品利用上述技术方案所述的抗体稀释液稀释抗体得到。

16、本发明还提供了上述技术方案所述的抗体稀释液或抗体产品在制备抗体检测产品的应用。

17、本发明还提供了上述技术方案所述的抗体稀释液或所述的抗体产品在抗体检测中的应用。

18、优选的，所述应用包括利用抗体稀释液稀释抗体后孵育待检测物或利用所述抗体产品孵育待检测物；

19、所述孵育的温度为10～37℃，时间为30～60min。

20、本发明还提供了一种用于抗体检测的试剂盒，包括上述技术方案所述的抗体稀释液或抗体产品。

21、有益效果：

22、本发明提供了一种抗体稀释液，包括羧甲基纤维素钠、氯化钠、三羟甲基氨基甲烷、吐温-20和水，其中氯化钠和三羟甲基氨基甲烷提供了抗原抗体结合所需的电解质环境；甲基纤维素钠溶于水可以形成阴离子型胶体溶液，不仅能有效增加抗原抗体的接触时间，而且能增加抗原抗体的有效接触时间，加快抗原抗体复合物的形成，防止抗原抗体脱离；在前述组分的配合下，吐温-20可以有效防止非特异性背景的产生。本发明调整抗体稀释液的组成，对抗体进行稀释后，在常温条件下(10～37℃)孵育30～60min，即可实现抗原抗体结合，孵育时间短且配制简单、稳定安全，极大提高了抗原抗体结合率；并且杂带很浅甚至几乎没有，极大提高抗原抗体结合率，减少非特异性结合。

技术特征：

1.一种抗体稀释液，其特征在于，所述抗体稀释液包括如下组分：羧甲基纤维素钠、氯化钠、三羟甲基氨基甲烷、吐温-20和水。

2.根据权利要求1所述的抗体稀释液，其特征在于，所述抗体稀释液中羧甲基纤维素钠的浓度为0.5～5mol/l；

3.根据权利要求2所述的抗体稀释液，其特征在于，所述抗体稀释液中羧甲基纤维素钠的浓度为1～2mol/l；

4.根据权利要求1～3任一项所述的抗体稀释液，其特征在于，所述抗体稀释液的ph为7.0～7.2。

5.权利要求1～4任一项所述的抗体稀释液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

6.一种抗体产品，其特征在于，所述抗体产品利用权利要求1～4任一项所述的抗体稀释液或权利要求5所述的制备方法得到的抗体稀释液稀释抗体得到。

7.权利要求1～4任一项所述的抗体稀释液或权利要求5所述的制备方法得到的抗体稀释液或权利要求6所述的抗体产品在制备抗体检测产品的应用。

8.权利要求1～4任一项所述的抗体稀释液或权利要求5所述的制备方法得到的抗体稀释液或权利要求6所述的抗体产品在抗体检测中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述应用包括利用抗体稀释液稀释抗体后孵育待检测物或利用所述抗体产品孵育待检测物；

10.一种用于抗体检测的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1～4任一项所述的抗体稀释液或权利要求5所述的制备方法得到的抗体稀释液或权利要求6所述的抗体产品。

技术总结
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种抗体稀释液及其制备方法和应用。本发明抗体稀释液，以羧甲基纤维素钠、氯化钠、三羟甲基氨基甲烷、吐温‑20和水为成分，对抗体进行稀释后在常温条件下(10～37℃)孵育30～60min，即可实现抗原抗体结合，孵育时间短且配制简单、稳定安全，极大提高了抗原抗体结合率；并且杂带很浅甚至几乎没有，极大提高抗原抗体结合率，减少非特异性结合。

技术研发人员：冯悦华,邢兆宇,李青,潘靓,王榕,杨洋
受保护的技术使用者：常州市第一人民医院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16