一种谷物中黄曲霉素的检测方法与流程

本发明属于黄曲霉素检测，涉及一种谷物中黄曲霉素的检测方法。

背景技术：

1、黄曲霉素又称黄曲毒素，是黄曲霉菌属黄曲霉菌、寄生曲霉菌产生的代谢物，是一组化学结构类似的化合物总称，二氢呋喃香豆素的衍生物。

2、黄曲霉素已分离出的黄曲霉毒素及其衍生物有二十多种，包括b1、b2、g1、g2、m1等毒素和毒醇，存在于土壤、动植物等中。它属于一类致癌物，是霉菌毒素中毒性最大、对人类健康危害极为突出的一类霉菌毒素。黄曲霉毒素主要污染粮油及其制品，各种植物性与动物性食品也能被污染。产毒素的黄曲霉菌很容易在水分含量较高(水分含量低于12％则不能繁殖)的禾谷类作物、油料作物籽实及其加工副产品中寄生繁殖和产生毒素，使其发霉变质，人们通过误食这些食品或其加工副产品，又经消化道吸收毒素进入人体而中毒。

3、黄曲霉毒素被公认为强致肝癌的物质，其中黄曲霉毒素b1的致癌性最强。如果长期食用含有黄曲霉毒素的食物的人，其肝脏将受到较大的损害。最近在许多国家报道了人许多黄曲霉毒素急性中毒的新证据，其综合病症的显著特征为呕吐、腹痛、肺水肿、惊厥痉挛、昏迷、大脑水肿而引起死亡和肝脏、肾形矿脉和心脏的脂肪过多等。

4、随着科技的进步黄曲霉素检测方法也与时俱进，目前市场上存在4种黄曲霉素检测方法。

5、1.黄曲霉素荧光定量快速检测法。黄曲霉素荧光定量检测技术基于免疫层析和特异性免疫反应，针对检测项目遴选高特异性的单克隆抗体，依托先进的荧光量子点微球标记技术，在层析作用完成特异性结合，并激发荧光强度，通过专用的荧光设备测量检测线和质控线的荧光强度值，结合内置的标准曲线完成检测过程。相较于传统的胶体金检测技术具备灵敏度高、数字稳定等优势。

6、2.黄曲霉素酶联免疫(elsia)定量快速检测法。黄曲霉素酶联免疫快速检测法本方案基于elisa酶联免疫定量检测技术,精选高特特性行抗体，配备2点与5点定标，根据抗原或特异性抗体的固相化及酶标记与结合技术,底物显色完成定量分析。

7、3.黄曲霉素胶体金定性/定量快速检测法。黄曲霉素胶体金定量/定性检测方案基于将胶体金作为示踪标志物用于抗原抗体的免疫反应，待检物质加样至试剂卡后,在层析作用下，待检物质中的抗原与金标试剂的结合物发生特异性结合而被截留，聚集于检测带并产生颜色，配合读数仪和内置标准曲线，确定待测物质含量，本检测方案同时具备定性和定量的分析产品，为目前主流的检测方式。

8、4.黄曲霉素免疫亲和层析柱检测法。黄曲霉素检测免析亲和柱方案基于抗原抗体特异性可逆结合特性技术，根据抗原抗体的高特异性，从复杂的待测样品中提取目标化合物，再结合液相色谱法及液相色谱-质谱联用检测技术进行定量检测。

技术实现思路

1、本发明的主要目的在于提供一种成本低廉、简便、快捷的薄层色谱法鉴别谷物中的黄曲霉素b1、b2，可快速完成谷物初筛。

2、本发明采用了以下技术方案来实现上述目的：

3、一种谷物中黄曲霉素的检测方法，其特征在于，采用薄层色谱法检测谷物中的黄曲霉素b1、黄曲霉素b2。

4、进一步的，上述薄层色谱法检测谷物中黄曲霉素b1、黄曲霉素b2的具体步骤如下：

5、谷物供试品溶液、黄曲霉素b1对照品溶液、黄曲霉素b2对照品溶液，分别点于同一硅胶g薄层板上，以二氯甲烷-氯仿混合溶液为展开剂，上行展开，展开至薄层板一半高度时，取出晾干，向剩余展开剂中加入正丙醇，混匀后，将晾干后的薄层板再次上行展开，取出晾干，向薄层板上喷洒10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点清晰，在可见光下检视。

6、更进一步的，上述上述薄层色谱法检测谷物中黄曲霉素b1、黄曲霉素b2的具体步骤如下：

7、分别吸取谷物供试品溶液、黄曲霉素b1对照品溶液、黄曲霉素b2对照品溶液，分别点于同一硅胶g薄层板上，以二氯甲烷∶氯仿＝7∶3为展开剂，上行展开，展开至薄层板一半高度时，取出晾干，向剩余展开剂中加入正丙醇，正丙醇的加入量为初始氯仿用量的20％，混匀后，将晾干后的薄层板再次上行展开，取出晾干，向薄层板上喷洒10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点清晰，在可见光下检视。

8、上述谷物供试品溶液的制备方法为：

9、将谷物粉碎，加甲醇-甲酸混合溶液，超声提取，提取液加入石油醚，振荡，静置分层；取甲醇层，加入氯仿，振荡，加入水，振荡，静置分层；取氯仿层，减压浓缩，氮吹，使氯仿完全挥发；氮吹后的样品用甲醇复溶，即得供试品溶液；

10、进一步的，上述谷物供试品溶液的制备方法中甲醇与甲酸的使用比例为10:1。

11、上述黄曲霉素b1对照品溶液、黄曲霉素b2对照品溶液的制备方法为：

12、取黄曲霉素b1标准品，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即为黄曲霉素b1对照品溶液；取黄曲霉素b2标准品，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即为黄曲霉素b2对照品溶液。

13、本发明具有以下有益效果：

14、1.在样品前处理阶段，本发明采用了甲醇-甲酸溶液提取，石油醚去杂，氯仿进一步纯化等方式，对谷物中的黄曲霉素b1、b2进行有效提取、高效富集，使其更有利于检测。

15、2.本发明所述的薄层色谱法中，对展开剂进行了优化，选用二氯甲烷和氯仿作为展开剂对样品进行部分展开，后在展开剂中加入正丙醇，调节展开剂的极性，将样品再次展开，采用该方式对样品展开，含黄曲霉素的谷物样品中的黄曲霉素b1、b2在与对照品对应的位置上，显相同颜色的斑点，色谱分离良好，特征斑点突出。

16、3.本发明所提供的谷物中黄曲霉素的检测方法，操作简单、快捷、成本较低，可对谷物进行快速检测，进行初步的筛选，在谷物存储前，将谷物进行分类，不会使得含黄曲霉素的谷物与正常谷物混合，提高了检测效率，实用性较强。

技术特征：

1.一种谷物中黄曲霉素的检测方法，其特征在于，采用薄层色谱法检测谷物中的黄曲霉素b1、b2。

2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述的薄层色谱法检测谷物中的黄曲霉素b1、b2的步骤为：

3.如权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述薄层色谱法检测谷物中黄曲霉素b1、黄曲霉素b2的步骤为：

4.如权利要求2或3所述的检测方法，其特征在于，所述的谷物供试品溶液的制备方法为：

5.如权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述的谷物供试品溶液的制备方法中甲醇与甲酸的使用比例为10:1。

6.如权利要求2或3所述的检测方法，其特征在于，所述的黄曲霉素b1对照品溶液、黄曲霉素b2对照品溶液的制备方法为：

技术总结
本发明涉及一种谷物中黄曲霉素的检测方法，属于黄曲霉素检测技术领域。本发明所述薄层色谱检测法步骤为将谷物供试品溶液、黄曲霉素B1对照品溶液、黄曲霉素B2对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷‑氯仿混合溶液为展开剂，上行展开，展开至薄层板一半高度时，取出晾干，向剩余展开剂中加入正丙醇，混匀后，将晾干后的薄层板再次上行展开，取出晾干，向薄层板上喷洒10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点清晰，在可见光下检视。利用本发明所提供的谷物中黄曲霉素的检测方法，操作简单、快捷、成本较低，可对谷物进行快速检测，进行初步的筛选，提高了检测效率，实用性较强。

技术研发人员：徐铭海,徐乐田,冯静
受保护的技术使用者：山东华检检测有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16