一种维生素D提取及结构鉴定方法

本发明涉及提取鉴定，具体涉及一种维生素d提取及结构鉴定方法。

背景技术：

1、鱼肝油是从鱼类肝脏中提取出的一类富含维生素a(va)、维生素d(vd)以及不饱和脂肪酸的脂肪油。vd是一种脂溶性维生素，有助于人体小肠黏膜对钙的吸收，预防佝偻病、软骨病，也可降低罹患癌症的风险，然而vd摄入过量也会导致健康风险。鱼肝油中天然vd结构复杂，目前尚未有研究能够准确分析其结构组成。将鱼肝油各部分纯化分离，准确收集部分vd相关物质，可初步确定鱼肝油中部分vd的存在形式。目前市场中，鱼肝油产品主要体现在保健品领域，多数添加合成的维生素a和维生素d，并宣称是“天然”鱼肝油；在药品领域，很多时候人们把维生素ad滴剂与鱼肝油混为一谈。但这些都存在很大差别。

2、因此，有必要研发一种有效的维生素d提取及结构鉴定方法来解决上述问题。

技术实现思路

1、本发明目的是：提供一种维生素d提取及结构鉴定方法，以解决上述问题。

2、本发明的技术方案是：

3、一种维生素d提取及结构鉴定方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

4、(1)配制样本溶液：称取粗制鱼肝油，利用异丙醇溶解定容于棕色容量瓶中，获得样本溶液；

5、(2)将所述样本溶液注入反相液相色谱中进行净化制备，准确收集维生素d流出液，氮气吹干，正己烷溶解，超声、离心处理，获得供试品溶液；

6、(3)将所述供试品溶液注入检测用液相色谱系统进行维生素d3含量测定，分析色谱图。

7、进一步的，在步骤(2)中，所述反相液相色谱的色谱条件为：c18色谱柱；检测波长为254nm；进样量为200μl；流速为1.0ml/min；柱温为30℃。

8、进一步的，在步骤(2)中，所述反相液相色谱的流动相为色谱甲醇。

9、进一步的，在步骤(3)中，所述液相色谱系统的色谱条件为：c18色谱柱；检测波长为254nm；进样量为50μl；流速为1.5ml/min；柱温为35℃。

10、进一步的，在步骤(3)中，所述液相色谱系统的的流动相为乙腈和异丙醇。

11、进一步的，所述乙腈:异丙醇的体积比为7:3。

12、进一步的，在步骤(3)中，所述维生素d3的成分结构为vd3-epa酯和vd3-dha酯。

13、进一步的，所述vd3-epa酯占比范围为10％～20％(v:v)，vd3-dha酯占比范围为80％～90％(v:v)。

14、本发明提供了一种维生素d提取及结构鉴定方法，建立了维生素d含量测定新方法，用于维生素d单体的含量测定。新方法相较于药典方法更加快速便捷，且测定结果与药典方法同样准确；将新方法与药典方法结合使用，可以有效鉴别“人工鱼肝油”和天然鱼肝油；可以有效分离出维生素d相关物质，初步确定为vd3-epa酯和vd3-dha酯。

技术特征：

1.一种维生素d提取及结构鉴定方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种维生素d提取及结构鉴定方法，其特征在于：在步骤(2)中，所述反相液相色谱的色谱条件为：c18色谱柱；检测波长为254nm；进样量为200μl；流速为1.0ml/min；柱温为30℃。

3.根据权利要求1所述的一种维生素d提取及结构鉴定方法，其特征在于：在步骤(2)中，所述反相液相色谱的流动相为色谱甲醇。

4.根据权利要求1所述的一种维生素d提取及结构鉴定方法，其特征在于：在步骤(3)中，所述液相色谱系统的色谱条件为：c18色谱柱；检测波长为254nm；进样量为50μl；流速为1.5ml/min；柱温为35℃。

5.根据权利要求1所述的一种维生素d提取及结构鉴定方法，其特征在于：在步骤(3)中，所述液相色谱系统的的流动相为乙腈和异丙醇。

6.根据权利要求5所述的一种维生素d提取及结构鉴定方法，其特征在于：所述乙腈:异丙醇的体积比为7:3。

7.根据权利要求1所述的一种维生素d提取及结构鉴定方法，其特征在于：在步骤(3)中，所述维生素d3的成分结构为vd3-epa酯和vd3-dha酯。

8.根据权利要求7所述的一种维生素d提取及结构鉴定方法，其特征在于：所述vd3-epa酯占比范围为10％～20％，vd3-dha酯占比范围为80％～90％。

技术总结
本发明公开了一种维生素D提取及结构鉴定方法，包括如下步骤：配制样本溶液：称取粗制鱼肝油，利用异丙醇溶解定容于棕色容量瓶中，获得样本溶液；将样本溶液注入反相液相色谱中进行净化制备，准确收集维生素D流出液，氮气吹干，正己烷溶解，超声、离心处理，获得供试品溶液；将供试品溶液注入检测用液相色谱系统进行维生素D3含量测定，分析色谱图。该方法建立了维生素D含量测定新方法，用于维生素D单体的含量测定。新方法相较于药典方法更加快速便捷，且测定结果与药典方法同样准确；将新方法与药典方法结合使用，可以有效鉴别“人工鱼肝油”和天然鱼肝油；可以有效分离出维生素D相关物质，初步确定为VD3‑EPA酯和VD3‑DHA酯。

技术研发人员：金晴昊,郑舟军,庄黛娜,张倩倩,彭鼎新
受保护的技术使用者：浙江药科职业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15