一种食管癌生物标志物、抗原、抗体及其制备方法和应用

本发明涉及医药生物，特别涉及一种食管癌生物标志物、抗原、抗体及其制备方法和应用。

背景技术：

1、丝氨酸蛋白酶抑制剂(serine proteinase inhibitor，serpin)超家族是迄今为止发现的最大的蛋白酶抑制剂家族，该家族参与调控机体的许多生理和病理过程，比如血液凝固、纤维蛋白溶解、细胞凋亡、炎症、补体激活和细胞迁移。其中b亚族(serpin bfamily)是人类serpin中最大的一个成员。serpin b家族中很多成员都与肿瘤的发生发展密切相关，目前在消化系统肿瘤中研究较多的是serpin b1、serpin b3、serpin b4、serpinb5，其中serpin b3能够抑制半胱氨酸蛋白酶如组织蛋白酶k、l、s和v活性，具有抗细胞调亡、促进细胞增殖和迁移作用。serpin b3在肿瘤发生发展中有着重要作用。研究表明serpin b3与宫颈癌、肺癌、食管癌和头颈部肿瘤等鳞状细胞癌的发生及侵袭迁移密切相关。

2、蛋白质乙酰化修饰，指的是在蛋白质原有基础上面嫁接上乙酰化基团，它属于蛋白质翻译后修饰的一种，包括组蛋白乙酰化和非组蛋白乙酰化，主要发生位点在赖氨酸上。蛋白质乙酰化修饰会影响蛋白质的功能作用的发挥，比如酶的活化与失活、蛋白质稳定性、亚细胞结构定位和特殊功能复合体的形成等。非组蛋白乙酰化也参与了与生理学和疾病相关的关键细胞过程，如基因转录、dna损伤修复、细胞分裂、信号转导、蛋白质折叠、自噬和代谢。总之，对蛋白质新的乙酰化位点的研究以及乙酰化修饰组学研究能够为揭示更多病症的原因提供重要指导意义，并为疾病的治疗提供新的思路。

3、食管癌(又称食管鳞癌)是世界上常见十大恶性肿瘤之一，我国是世界食管癌高发国家，组织类型主要为鳞状细胞癌。食管癌起病时症状不明显，多数患者在就诊时已处于晚期，而中晚期患者术后5年总体生存率仅10％左右，如果在早期食管癌阶段即接受手术，5年生存率可达90％。因此，找到食管癌早期发现的关键技术，是减少食管癌发病率和死亡率的重要途径。目前，胃镜是临床诊断食管癌最有效的检查，但是消化道内镜检查具有侵入性，操作不便，患者较痛苦，还有感染、出血等风险，而且检测费用较贵。因此，目前亟需一种对于预测食管癌患病风险具有较高特异性和敏感性的食管癌生物标志物对食管癌进行早期筛查，以指导临床尽早进行干预和治疗。

技术实现思路

1、针对现有技术中的缺陷，本发明提供了一种食管癌生物标志物、抗原多肽以及可与其特异性结合的抗体，用于检测食管癌细胞中serpinb3多肽k125位点乙酰化水平。

2、本发明提供一种食管癌生物标志物，所述生物标志物为人serpinb3乙酰化多肽，所述人serpinb3乙酰化多肽的序列为daik-k(acetyl)-fyqtsvesvdc，其中acetyl表示乙酰化。

3、进一步的，所述食管癌生物标志物为食管癌诊断、预后、治疗效果检测的标志物中的任意一种。

4、本发明还提供一种抗原，所述抗原为所述人serpinb3乙酰化多肽和载体蛋白的偶联物；所述载体蛋白选自klh、ova、thy或bsa。

5、本发明还提供一种抗体，可与所述人serpinb3乙酰化多肽或所述的抗原特异性结合。

6、进一步的，所述多克隆抗体为利用daik-k(acetyl)-fyqtsvesvdc和载体蛋白的偶联物免疫非人动物接着纯化提取所述非人动物的血清后获得的。

7、进一步的，所述抗体用于检测生物样本中serpinb3蛋白k125乙酰化位点的乙酰化水平。

8、本发明还提供一种抗体的制备方法，包括如下步骤：

9、s1：人工合所述的人serpinb3乙酰化多肽；

10、s2：人serpinb3乙酰化多肽与载体蛋白偶联；

11、s3：动物免疫与采血；

12、s4：抗体效价检测；

13、s5：抗体亲和纯化；

14、s6：纯化后的抗体进行鉴定。

15、进一步的，所述的生物标志物或所述抗原或所述抗体在制备用于食管癌检测的试剂或试剂盒中的应用。

16、本发明还提供一种食管癌筛查试剂盒，包括所述抗体。

17、进一步的，所述筛查试剂盒还包括抗原修复液、pbs缓冲溶液、酶阻断剂、辣根酶标羊抗小鼠/兔igg聚合物、dab显色剂、苏木素染液、乙醇、环保透明剂、0.5％氨水和超纯水。

18、综上，与现有技术相比，本发明达到了以下技术效果：

19、(1)本发明提供了一种用于检测食管癌的生物标志物，填补了食管癌乙酰化修饰蛋白标志物的空白，为生物标志物的鉴定提供新的思路。

20、(2)本发明采用人工合成的方式制成一段serpinb3蛋白k125乙酰化位点的抗原多肽，以及制备相应的多克隆抗体。

21、(3)本发明的多克隆抗体能够特异性识别serpinb3蛋白k125乙酰化位点，检测该位点的乙酰化水平。

22、(4)本发明提供了一种用于食管癌筛查的试剂盒。

技术特征：

1.一种食管癌生物标志物，其特征在于，所述食管癌生物标志物为人serpinb3乙酰化多肽，所述人serpinb3乙酰化多肽的序列为daik-k(acetyl)-fyqtsvesvdc，其中acetyl表示乙酰化。

2.根据权利要求1所述的食管癌生物标志物，其特征在于，所述食管癌生物标志物为食管癌诊断、预后、治疗效果检测的标志物中的任意一种。

3.一种抗原，其特征在于，所述抗原为权利要求1所述的人serpinb3乙酰化多肽和载体蛋白的偶联物；所述载体蛋白选自klh、ova、thy或bsa。

4.一种抗体，其特征在于，所述抗体可与权利要求1所述人serpinb3乙酰化多肽和/或权利要求3所述的抗原特异性结合。

5.根据权利要求4所述的抗体，其特征在于，所述多克隆抗体为利用daik-k(acetyl)-fyqtsvesvdc和载体蛋白的偶联物免疫非人动物接着纯化提取所述非人动物的血清后获得的。

6.根据权利要求4～5任一项所述的抗体，其特征在于，所述抗体用于检测生物样本中serpinb3蛋白k125乙酰化位点的乙酰化水平。

7.一种抗体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

8.权利要求1所述的生物标志物或权利要求3所述抗原或权利要求4～6任一项所述抗体在制备用于食管癌检测的试剂或试剂盒中的应用。

9.一种食管癌筛查试剂盒，其特征在于，包括权利要求4～6任一项所述的抗体。

10.根据权利要求9所述的筛查试剂盒，其特征在于，所述筛查试剂盒还包括抗原修复液、pbs缓冲溶液、酶阻断剂、辣根酶标羊抗小鼠/兔igg聚合物、dab显色剂、苏木素染液、乙醇、环保透明剂、0.5％氨水和超纯水。

技术总结
本发明公开了一种食管癌生物标志物、抗原、抗体及其制备方法和应用，所述生物标志物为人SERPINB3乙酰化多肽，多肽序列为DAIK‑K(acetyl)‑FYQTSVESVDC。所述抗原为人SERPINB3乙酰化多肽与载体蛋白的偶联物。所述抗体可用于检测生物样本中人SERPINB3乙酰化多肽K125位点的乙酰化水平。本发明的检测试剂盒可用于检测不同样本之间人SERPINB3蛋白K125位点乙酰化水平的差异，本发明探讨SERPINB3蛋白K125位点乙酰化对肿瘤细胞增殖、迁移以及侵袭过程的影响，为肿瘤的诊断和预后判断、探索肿瘤细胞增殖及转移机制研究提供新的工具。

技术研发人员：黄国良,汪婧,林洁,李文凯
受保护的技术使用者：广东医科大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15