评估抗体-药物缀合物的方法与流程

背景技术：

1、抗体-药物-缀合物(adc)是一类新兴的药物分子。它们定位到特异性靶标并递送有效药物的能力使其成为开发基于靶标的治疗产品的有吸引力的选择。adc是通过将有效药物分子与单克隆抗体化学接头来产生的。与单克隆抗体缀合的药物分子的平均数量称为药物与抗体之比(“dar”)。dar是adc产品的重要质量属性，因为它会影响产品的功效、安全性和/或稳定性。因此，以可靠且高通量的方式评估adc产品的dar的方法是可取的。

技术实现思路

1、本公开提供了评估adc产品的dar的方法，这些方法提供相对于已知方法的优势。具体地，本公开的方法可以在高通量的应用中和/或在评估期间无需稀释adc样品的情况下使用。

2、紫外-可见(uv-vis)和比尔-朗伯(beer-lambert)定律

3、dar传统上是使用uv-vis光谱法测量的(参见例如，chen，methodsmol.biol.1045：267-73(2013))。该分析的基础是比尔-朗伯定律，即物质的吸光度与浓度之间的正比关系：

4、a＝εcl，

5、其中a是吸光度，ε是消光系数(物质的物理常数)，l是穿过含有细胞的分析物的路径长度，并且c是浓度。

6、使用uv-vis光谱法对adc产品进行dar测量依赖于抗体的最大吸收(例如，280nm)与药物的最大吸收(例如，252nm)之差。例如，平均dar可以使用缀合材料在280nm和252nm处测量的吸收的差来计算。尽管uv-vis方法已在工业中广泛使用，但它缺少进行配制筛选研究所需的通量。它在不进行样品稀释的情况下无法使用，从而导致与样品稀释有关的误差。

7、因此，本公开至少部分地基于使用尺寸排阻色谱法(例如，uplc)和斜率光谱法测量dar的替代方法。对这些方法进行了表征，并在再现性、精密度和灵敏度方面与uv-vis光谱法进行了比较。生成的数据支持使用基于uplc的dar方法来克服传统uv-vis方法的通量限制。此外，基于斜率光谱法的方法可用于在不进行样品稀释的情况下分析adc样品。

技术特征：

1.一种确定包含抗体-药物缀合物的组合物的样品中药物与抗体之比(dar)的方法，其包括：

2.权利要求1的方法，其包括：基于所述dar

3.权利要求1或2的方法，其中所述样品包括0.1μg/μl至500μg/μl的抗体-药物缀合物(adc)。

4.权利要求1或2的方法，其中所述抗体是抗-肿瘤抗体。

5.权利要求1或2的方法，其中所述药物是促凋亡剂、细胞生长抑制剂或细胞毒性剂。

6.权利要求2的方法，其中使所述组合物无法用于商业发布包括对所述组合物进行标记或将所述组合物销毁。

7.权利要求1或2的方法，其中所述药物包括化学治疗剂。

8.权利要求7的方法，其中所述化学治疗剂包括微管靶向剂、埃博霉素、组蛋白脱乙酰酶抑制剂、拓扑异构酶抑制剂、激酶抑制剂、核苷酸类似物、核苷酸前体类似物、肽抗生素、基于铂的药剂、类维生素a、或长春花生物碱。

9.权利要求7的方法，其中所述化学治疗剂包括放线菌素、全反式视黄酸、奥瑞斯他汀(auiristatin)、阿扎胞苷、硫唑嘌呤、博来霉素、硼替佐米、卡铂、卡培他滨、顺铂、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、姜黄素、阿糖胞苷、柔红霉素、多西他赛、去氧氟尿苷、多柔比星、表柔比星、埃博霉素、依托泊苷、氟尿嘧啶、吉西他滨、羟基脲、伊达比星、伊马替尼、伊立替康、美坦辛、氮芥、巯嘌呤、甲氨蝶呤、米托蒽醌、抗美登醇(maytansinoid)、奥沙利铂、紫杉醇、培美曲塞、替尼泊苷、硫鸟嘌呤、托泊替康、戊柔比星、长春碱、长春新碱、长春地辛、或长春瑞滨。

10.权利要求1或2的方法，其中所述抗体包括阿德木单抗、恩美曲妥珠单抗、阿仑单抗、安那妥单抗、阿珀利珠单抗、巴维昔单抗、贝伐单抗、贝妥莫单抗、博纳吐单抗、本妥昔单抗、cantuzumab、卡妥索单抗、西妥昔单抗、达雷木单抗、地舒单抗、依决洛单抗、依匹莫单抗、伊瑞西珠、法勒珠单抗、吉妥珠单抗奥佐米星、格列珠单抗、伊匹单抗、替伊莫单抗、拉贝珠单抗、洛沃妥珠单抗、鲁卡木单抗、玛帕妥木单抗、米拉妥珠单抗、米拉图珠单抗、尼妥珠单抗、奥滨尤妥珠单抗、奥法木单抗、奥戈伏单抗、帕尼单抗、pemtumomab、帕妥珠单抗、利妥昔单抗、西罗珠单抗、托西莫单抗、曲妥珠单抗、维妥珠单抗、或沃罗西单抗(volociximab)。

11.一种确定包含抗体-药物缀合物的样品中药物与抗体之比(dar)的方法，其包括：

12.权利要求11的方法，其中所述尺寸排阻色谱包括超高效液相色谱(uplc)、反相(rp)uplc或高效液相色谱(hplc)。

13.权利要求11或12的方法，其中所述样品包括0.1μg/μl至500μg/μl的抗体-药物缀合物(adc)。

14.权利要求11或12的方法，其中所述抗体是抗-肿瘤抗体。

15.权利要求11或12的方法，其中所述药物是促凋亡剂、细胞生长抑制剂或细胞毒性剂。

16.一种确定包含抗体-药物缀合物的第一样品中药物与抗体之比(dar)的方法，其包括：

17.权利要求16的方法，进一步包括根据具有已知浓度的所述抗体的溶液的吸光度，计算所述抗体在所述第一光波长处或在所述第二光波长处的消光系数。

18.权利要求16的方法，进一步包括根据具有已知浓度的所述药物的溶液的吸光度，计算所述药物在所述第一光波长处或在所述第二光波长处的消光系数。

19.权利要求16的方法，其中所述尺寸排阻色谱包括超高效液相色谱(uplc)、反相(rp)uplc或高效液相色谱(hplc)。

20.权利要求16-19中任一项的方法，其中所述第一样品包括1μg/μl至500μg/μl的抗体-药物缀合物(adc)。

21.权利要求16-19中任一项的方法，其中所述抗体是抗-肿瘤抗体。

22.权利要求16-19中任一项的方法，其中所述药物是促凋亡剂、细胞生长抑制剂或细胞毒性剂。

23.权利要求16-19中任一项的方法，其中对吸光度响应的峰进行积分包括检测吸光度响应的每个峰的峰肩。

24.权利要求16-19中任一项的方法，其中对吸光度响应的峰进行积分包括对高分子量(hmw)峰、低分子量(lmw)峰和主峰的面积求和。

25.权利要求16-19中任一项的方法，其中所述时间间隔是3至9分钟。

技术总结
本发明涉及评估抗体‑药物缀合物的方法。本公开提供了评估ADC产品的DAR的方法，这些方法提供相对于已知方法的优势。具体地，本公开的方法可以在高通量的应用中和/或在评估期间无需稀释ADC样品的情况下使用。

技术研发人员：A.斯金纳,N.库利巴
受保护的技术使用者：里珍纳龙药品有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16