一种水体生物中内分泌干扰物及其代谢物的快速检测方法

本发明属于有机污染物检测，具体涉及一种水体生物中内分泌干扰物(edcs)及其代谢物的快速检测方法。

背景技术：

1、内分泌干扰物(endocrine disrupting chemicals，edcs)是指可以干扰人类和动物正常内分泌系统的化学物质，对人类健康和生态系统构成巨大威胁，是我国非常重视的一类新污染物。农药、多环芳烃、二恶英、溴化阻燃剂、雌激素和烷基酚是这类污染物的代表，与日常生活密切相关。edcs主要来自于人类的生产活动和生活，如农业生产、工业排放以及污水处理厂的排放等，最终经过河流汇入海洋。edcs即使在痕量水平也会对海洋生态系统造成不可忽视的严重威胁。例如，它会造成栖息地破坏、个体雌性化、种群衰退、物种数减少、濒危灭绝等严重问题。

2、然而，目前海洋中edcs的相关研究仍存在诸多问题。例如，浓度痕量、海洋生物体内污染数据少、分析方法单一、代谢产物分析数据少等诸多困难。大多数分析方法仅限于某一类edcs的分析，因此，建立同时监测多类别水体edcs及其代谢物的一体化分析方法，了解水体生物中edcs的污染状况，对于积极预防edcs的破坏，保护水生生态系统安全具有重要意义。

技术实现思路

1、基于上述背景技术存在的问题，本发明提供了一种水体生物中内分泌干扰物及其代谢物的快速(5～6h)检测方法，该检测方法对前处理以及净化等操作进行了优化，使其具有操作简单、前处理耗时短、兼容性强、有机溶剂消耗少、成本低等优点。

2、本发明的目的通过下述技术方案来实现：

3、一种水体生物中内分泌干扰物及其代谢产物的快速检测方法，包括以下步骤：

4、s1.取水体生物样品的肌肉组织于离心管中，加入同位素内标物平衡；加入乙腈，匀浆，超声萃取，离心，取上清液；重复提取，合并上清液；

5、s2.将上清液移至装有c18填料的离心管中，涡旋摇匀，离心，取上清液；乙腈再次提取填料，涡旋摇匀离心，合并上清液；

6、s3.将步骤s2的上清液移于氮吹管中，氮吹浓缩后定容于甲醇中，用0.22微米ptfe材质滤膜过滤；用高效液相色谱-串联质谱测定过滤液中的内分泌干扰物及其代谢产物，通过数据处理，得到水体生物中内分泌干扰物及其代谢产物的含量。

7、优选地，步骤s1中所述水体生物样品的质量和乙腈的体积比为(0.5～2)g:(8～10)ml。

8、优选地，步骤s1中所述水体生物样品为鱼、虾、贝、蟹或螺中的一种以上。

9、优选地，步骤s1中所述平衡的时间为10～30min，所述超声的时间为10～15min，离心的转速为8000～10000rpm，离心的时间为5～8min。

10、优选地，步骤s1中所述同位素内标物为prp-d7、bp-1-d5、e1-d4、17b-e2-d4和13c12-bpa。

11、优选地，步骤s2中所述c18填料的质量和步骤s1中水体生物样品的肌肉组织的质量比为(0.8～3.5):(0.5～2)。

12、优选地，步骤s2中所述离心的转速为8000～10000rpm，离心的时间为5～8min。

13、优选地，步骤s6中所述高效液相色谱-串联质谱的测试条件为：所用液相色谱流动相为超纯水和甲醇，流速为0.3～0.4ml/min，柱温为35～40℃，梯度洗脱程序开始为5％甲醇，0.1～0.2min内升至40％～50％甲醇，5～6min内升至60～70％甲醇，10～11min内升至90～95％甲醇，保留4～5min；使用1.8μ的c18反相色谱柱分离edcs；离子源为ajs esi负模式，离子源中氮气温度为300～350℃，流速为4～6l/min，鞘气温度为300～350℃，流速为10～12l/min，毛细管电压为3000～4000v。

14、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

15、1.本发明方法对前处理以及净化等操作进行了优化，使其具有操作简单、前处理耗时短(5～6h)、兼容性强、有机溶剂消耗少、成本低等优点，简化了样品前处理步骤，能够实现水生生物中内分泌干扰物及其代谢物的定性定量分析。相较于传统的固相萃取方法，本发明方法省去了固相萃取中富集小柱所需的活化、淋洗、洗脱等繁琐步骤，大大减少了有机溶剂使用量和前处理时间，同时降低成本，有利于大批量处理样品。

16、2.本发明可用于多类edcs同时处理，比传统的方法多针对某一类edcs进行处理，显著提高了样品的分析效率，能为进一步开展edcs的膳食暴露风险评估以及在水体中污染状况的研究提供有效的方法手段。

17、3.本发明不仅可用于生物中edcs分析，还可用于其代谢产物的分析，方法兼容性强，可为水产品edcs污染状况研究提供有效的手段。

技术特征：

1.一种水体生物中内分泌干扰物及其代谢产物的快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的水体生物中内分泌干扰物及其代谢产物的快速检测方法，其特征在于，步骤s1中所述水体生物样品的质量和乙腈的体积比为(0.5～2)g:(8～10)ml。

3.根据权利要求1所述的水体生物中内分泌干扰物及其代谢产物的快速检测方法，其特征在于，步骤s1中所述水体生物样品为鱼、虾、贝、蟹或螺中的一种以上。

4.根据权利要求1所述的水体生物中内分泌干扰物及其代谢产物的快速检测方法，其特征在于，步骤s1中所述平衡的时间为10～30min，所述超声的时间为10～15min，离心的转速为8000～10000rpm，离心的时间为5～8min。

5.根据权利要求1所述的水体生物中内分泌干扰物及其代谢产物的快速检测方法，其特征在于，步骤s1中所述同位素内标物为prp-d7、bp-1-d5、e1-d4、17b-e2-d4和13c12-bpa。

6.根据权利要求1所述的水体生物中内分泌干扰物及其代谢产物的快速检测方法，其特征在于，步骤s2中所述c18填料的质量和步骤s1中水体生物样品的肌肉组织的质量比为(0.8～3.5):(0.5～2)。

7.根据权利要求1所述的水体生物中内分泌干扰物及其代谢产物的快速检测方法，其特征在于，步骤s2中所述离心的转速为8000～10000rpm，离心的时间为5～8min。

8.根据权利要求1所述的水体生物中内分泌干扰物及其代谢产物的快速检测方法，其特征在于，步骤s3中所述高效液相色谱-串联质谱的测试条件为：所用液相色谱流动相为超纯水和甲醇，流速为0.3～0.4ml/min，柱温为35～40℃，梯度洗脱程序开始为5％甲醇，0.1～0.2min内升至40％～50％甲醇，5～6min内升至60～70％甲醇，10～11min内升至90～95％甲醇，保留4～5min；使用1.8μ的c18反相色谱柱分离edcs；离子源为ajs esi负模式，离子源中氮气温度为300～350℃，流速为4～6l/min，鞘气温度为300～350℃，流速为10～12l/min，毛细管电压为3000～4000v。

技术总结
本发明属于有机污染物检测技术领域，公开了一种水体生物中内分泌干扰物(EDCs)及其代谢物的快速检测方法。该方法是将生物中样品于离心管中，加入同位素内标物平衡，加入乙腈匀浆后超声提取，重复提取后合并上清液于装有C18填料的离心管，涡旋离心，取上清液氮吹浓缩，定容过滤上机，经数据定量分析得到EDCs的含量水平。本发明的方法能够实现水生生物中内分泌干扰物及其代谢物的定性定量分析，具有操作简单、前处理耗时短、兼容性强、有机溶剂消耗少、成本低等优点，可为水产品EDCs污染状况研究提供有效的手段。

技术研发人员：高艳蓬,王光耀,刘珊,吴念念,翁伟新,安太成
受保护的技术使用者：广东工业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/5