检测四种呼吸道疾病的免疫层析试纸条及其制备方法和包含其的试剂盒与流程

本发明属于生物检测，涉及检测四种呼吸道疾病的免疫层析试纸条及其制备方法和包含其的试剂盒，特别是涉及快速检测新型冠状病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒和呼吸道合胞病毒抗原的胶体金免疫层析试剂盒。

背景技术：

1、当前临床上探明大多数的急性上呼吸道疾病和大部分的下呼吸道疾病是由细菌外的病原引起，其中以呼吸道病毒最常见。常见的呼吸道病毒包括新型冠状病毒(covid-19)、呼吸道合胞病毒(rsv)a型、流感病毒a(flua)、流感病毒b(flub)等。对怀疑为上呼吸道感染的病患开展早期干预，确定感染病菌类型，能够指导临床用药开展，避免出现抗菌药物滥用的问题发生，利于疾病的及时治疗与诊断。精确的病原学分析不仅是确诊依据，也是合理选择治疗方案的基础，了解呼吸道病毒检测手段和开展快速病毒检测，已成为当务之急。

2、尽管检测常见的呼吸道病毒的方案已有报道，例如cn114487388a，但是检测效果有待提升。

技术实现思路

1、基于此，本申请实施例的主要目的包括提供一种免疫层析试纸条，采用该免疫层析试纸条能够实现对新型冠状病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒和呼吸道合胞病毒的一体化检测且检测效果好。

2、在本申请的第一方面，提供一种检测四种呼吸道疾病的免疫层析试纸条，所述试纸条包括底板以及依次搭接在所述底板上的样品垫、结合垫、分析膜和吸水垫；所述试纸条还包括不干胶垫，所述不干胶垫覆盖在所述样品垫搭接所述结合垫的一端的端部、所述结合垫以及所述分析膜搭接所述结合垫的一端的端部；

3、所述结合垫上包被有胶体金标记的抗新型冠状病毒单克隆抗体1、抗甲型流感病毒单克隆抗体1、抗乙型流感病毒单克隆抗体1、抗呼吸道合胞病毒单克隆抗体1以及质控蛋白1；

4、所述分析膜上设有包被抗新型冠状病毒单克隆抗体2的检测线1、包被抗甲型流感病毒单克隆抗体2的检测线2、包被抗乙型流感病毒单克隆抗体2的检测线3、包被抗呼吸道合胞病毒单克隆抗体2的检测线4以及包被质控蛋白2的质控线，所述质控蛋白2特异性结合所述质控蛋白1；

5、其中，

6、所述抗新型冠状病毒单克隆抗体1的特异性识别位点为np蛋白216-221aa片段，

7、所述抗甲型流感病毒单克隆抗体1的特异性识别位点为ha蛋白341-355aa片段，

8、所述抗乙型流感病毒单克隆抗体1的特异性识别位点为na蛋白18-26aa片段，

9、所述抗呼吸道合胞病毒单克隆抗体1的特异性识别位点为f蛋白24-31aa片段，

10、所述抗新型冠状病毒单克隆抗体2的特异性识别位点为np蛋白223-231aa片段，

11、所述抗甲型流感病毒单克隆抗体2的特异性识别位点为ha蛋白438-444aa片段，

12、所述抗乙型流感病毒单克隆抗体2的特异性识别位点为na蛋白440-447aa片段，

13、所述抗呼吸道合胞病毒单克隆抗体2的特异性识别位点为f蛋白555-562aa片段。

14、在本申请的一些实施方式中，沿层析方向，所述分析膜上依次设有质控线、检测线1、检测线3、检测线2和检测线4。

15、在本申请的一些实施方式中，所述质控蛋白1包括鼠igg，所述质控蛋白2包括羊抗鼠igg。

16、在本申请的一些实施方式中，所述分析膜的材质包括硝酸纤维素。

17、在本申请的一些实施方式中，所述底板的材质包括pvc。

18、在本申请的一些实施方式中，所述结合垫的材质包括聚酯。

19、在本申请的一些实施方式中，所述胶体金的平均粒径为30nm-50nm。

20、在本申请的第二方面，提供一种检测四种呼吸道疾病的试剂盒，所述试剂盒包括试纸卡，所述试纸卡包括卡壳以及安装在所述卡壳中的第一方面中所述的试纸条；

21、所述卡壳上设有加样孔和检测窗口，所述加样孔和所述样品垫对应，所述检测窗口与所述分析膜对应。

22、在本申请的一些实施方式中，所述卡壳包括盖体和壳体，所述加样孔和所述检测窗口设置在所述盖体上。

23、在本申请的一些实施方式中，所述卡壳的一端还设有手柄。

24、在本申请的一些实施方式中，所述试剂盒还包括样本缓冲液和拭子中的一种或者多种。

25、在本申请的一些实施方式中，所述样本缓冲液包含2g/l-2.5g/l的磷酸盐、8g/l-9g/l的氯化钠以及8g/l-12g/l的曲拉，ph值为8.5-9.5。

26、在本申请的第三方面，提供第一方面中所述的免疫层析试纸条的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：

27、组装所述的样品垫、结合垫、分析膜、吸水垫和不干胶垫，制备免疫层析试纸条。

28、在本申请的一些实施方式中，所述样品垫经处理液处理后去除溶剂再进行组装。

29、在本申请的一些实施方式中，所述处理液包含1wt％-2wt％bsa、0.5wt％-1.5wt％吐温-20以及0.05m-0.15m、ph7-7.6的tris缓冲液。

30、相对于传统技术，本申请具有如下优点：

31、本申请提供新型冠状病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒和呼吸道合胞病毒一体化检测试纸条，通过选择合适的包被抗体以及设计合适试纸条结构，有效的解决四个指标之间彼此交叉反应所产生的干扰问题，从而更好的在临床呼吸道疾病中的诊断应用。并且，本申请不需要昂贵仪器，操作流程简便，成本低，具有快速、准确度高、特异性高等特点，便于在条件落后及不发达地区开展应用。

技术特征：

1.一种检测四种呼吸道疾病的免疫层析试纸条，其特征在于，所述试纸条包括底板以及依次搭接在所述底板上的样品垫、结合垫、分析膜和吸水垫；所述试纸条还包括不干胶垫，所述不干胶垫覆盖在所述样品垫搭接所述结合垫的一端的端部、所述结合垫以及所述分析膜搭接所述结合垫的一端的端部；

2.根据权利要求1所述的检测四种呼吸道疾病的免疫层析试纸条，其特征在于，沿层析方向，所述分析膜上依次设有所述的质控线、检测线1、检测线3、检测线2和检测线4。

3.根据权利要求1或者2所述的检测四种呼吸道疾病的免疫层析试纸条，其特征在于，所述质控蛋白1包括鼠igg，所述质控蛋白2包括羊抗鼠igg。

4.根据权利要求1或者2所述的检测四种呼吸道疾病的免疫层析试纸条，其特征在于，所述免疫层析试纸条满足如下条件中的一个或者多个：

5.根据权利要求1或者2所述的检测四种呼吸道疾病的免疫层析试纸条，其特征在于，所述胶体金的平均粒径为30nm-50nm。

6.一种检测四种呼吸道疾病的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括试纸卡，所述试纸卡包括卡壳以及安装在所述卡壳中的权利要求1至5中任一项所述的试纸条；

7.根据权利要求6所述的检测四种呼吸道疾病的试剂盒，其特征在于，所述卡壳包括盖体和壳体，所述加样孔和所述检测窗口设置在所述盖体上；

8.根据权利要求6或者7所述的检测四种呼吸道疾病的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括样本缓冲液和拭子中的一种或者多种；

9.权利要求1至5中任一项所述的免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：

10.根据权利要求9所述的免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，所述样品垫经处理液处理后去除溶剂再进行组装；

技术总结
本发明属于生物检测技术领域，涉及检测四种呼吸道疾病的免疫层析试纸条及其制备方法和包含其的试剂盒。通过选择合适的包被抗体以及设计合适试纸条结构，有效的解决四个指标之间彼此交叉反应所产生的干扰问题，从而更好的在临床呼吸道疾病中的诊断应用。并且，本申请不需要昂贵仪器，操作流程简便，成本低，具有快速、准确度高、特异性高等特点，便于在条件落后及不发达地区开展应用。

技术研发人员：方芳,吴立江,王超露,魏格
受保护的技术使用者：杭州莱和生物技术有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15