对称型聚偏二氟乙烯微滤膜的用途及蛋白免疫印迹方法与流程

本发明涉及蛋白转印，特别是涉及一种对称型聚偏二氟乙烯微滤膜的用途及蛋白免疫印迹方法。

背景技术：

1、聚偏二氟乙烯(简称pvdf)因其优异的热稳定性、耐化学性和优异的机械强度等性能，是目前应用最广泛的膜材料之一。这些特性及其固有的疏水性，使pvdf作为膜材料在很多膜分离工艺中很受欢迎，如膜基气体吸收、膜蒸馏、海水淡化和废水处理等领域。此外，由于pvdf膜具有很强的疏水性和静电吸附作用，其对蛋白质有着很强烈的非特异性吸附能力，因此pvdf膜在生物医药领域有着广泛的应用前景。

2、目前，利用膜作为载体进行western-blotting实验，也早有相关报道。如中国专利(申请号为200610050833.4)其就制备出了用于蛋白质吸附的硝酸纤维素膜，但是其吸附量少，蛋白结合牢度低，同时纤维素膜强力差，容易破碎。相对硝酸纤维素膜，理论上pvdf膜的强力好，蛋白结合牢度高，且吸附量大，是理想的免疫印迹用膜，但是实际上目前制备得到的pvdf膜大多容易在表面形成致密层，造成孔径变小、皮层加厚等负面效果，如果将pvdf膜应用于转印膜，pvdf膜并不会比硝酸纤维素膜等产生更好的效果。因此亟待一种能够应用于蛋白免疫印迹的固相载体的pvdf膜。

技术实现思路

1、鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于：

2、第一方面，提供一种双诱导方法制备得到的对称型聚偏二氟乙烯微滤膜作为蛋白免疫印迹的固相载体的用途；

3、所述双诱导方法包括以下步骤：

4、s1、将聚偏二氟乙烯溶于溶剂中并加入添加剂混合均匀得到铸膜液；

5、s2、将铸膜液制备形成液态膜；

6、s3、将液态膜置于0℃～30℃的低温环境中进行诱导10秒～120秒至预凝胶状态为止，然后送至恒温恒湿环境中进行蒸汽诱导处理；所述恒温恒湿环境的温度为20℃～50℃、相对湿度为50rh％～100rh％；

7、s4、将蒸汽诱导处理后的液态膜置于凝固浴中得到凝胶膜，清洗并干燥得到膜孔均匀的对称型聚偏二氟乙烯微滤膜。

8、结合第一方面，在一种实现方式中，所述双诱导方法制备得到的所述对称型聚偏二氟乙烯微滤膜在短时快速的蛋白免疫印迹过程中作为固相载体对ug级别含量的蛋白样本进行检测的用途。

9、结合第一方面，在一种实现方式中，所述溶剂包括n，n-二甲基乙酰胺、n，n-甲基甲酰胺、n-甲基-2-吡咯烷酮、磷酸三乙酯、2-吡咯烷酮中的一种或多种。

10、结合第一方面，在一种实现方式中，所述铸膜液中各原料的质量分数为：聚偏二氟乙烯10wt％～30wt％、溶剂50wt％～60wt％～90wt％、添加剂为0wt％～40wt％。

11、结合第一方面，在一种实现方式中，所述添加剂包括添加剂一和/或添加剂二；

12、所述添加剂一包括甲醇、乙醇、甘油、异丙醇、正丁醇、二甘醇、三甘醇、四甘醇、水中的一种或多种，和/或，所述添加剂二包括聚乙烯吡咯烷酮、聚(2-乙基-2-噁唑啉)、乙烯基吡咯烷酮-乙酸乙烯酯共聚物中的一种；所述添加剂一的质量分数为0wt％～20wt％；和/或，所述添加剂二的质量分数为0wt％～20wt％。

13、结合第一方面，在一种实现方式中，所述步骤s3中低温环境温度为0℃～25℃，诱导时间为10～90秒。

14、结合第一方面，在一种实现方式中，所述步骤s1中聚偏二氟乙烯、溶剂、添加剂混合的温度为50℃～90℃。

15、结合第一方面，在一种实现方式中，所述恒温恒湿环境的温度为20℃～40℃、相对湿度为70rh％～100rh％。

16、结合第一方面，在一种实现方式中，所述凝固浴的温度为20～70℃，处理时间为2～10min；

17、和/或，所述步骤s4中清洗的时间为5～20min；

18、和/或，所述步骤s4中干燥的时间为1～10min，所述干燥的温度为50～90℃。

19、第二方面，还提供一种蛋白免疫印迹方法，其关键在于，包括：将蛋白样品在固相载体上进行电泳分离并转印，最后通过抗原抗体反应进行检测和分析，所述固相载体为具有第一方面任一种实现方式中所述用途的所述对称型聚偏二氟乙烯微滤膜。

20、如上所述，本发明的一种对称型聚偏二氟乙烯微滤膜的制备方法及微滤膜至少包括以下有益效果：由于聚合物是在高温条件下溶解在溶剂中的，且此时铸膜液处于一个亚稳态状态，进行低温冷诱导时，会变为非稳态，大量的结晶形成核点，而随着蒸汽诱导时间延长，晶体生长，最终将预凝胶的膜浸入凝固浴中，得到具有束状/棒状结晶的均匀孔结构无皮层pvdf膜，从而大幅度的提高了pvdf膜的孔隙率，进而增加了pvdf膜的真实蛋白质结合能力，在应用于蛋白免疫印迹的固相载体作为转印膜时，赋予了pvdf膜极高的检测灵敏度，特别是在短时快速转印的应用场景中，检测效果的提升尤为显著。

技术特征：

1.一种双诱导方法制备得到的对称型聚偏二氟乙烯微滤膜作为蛋白免疫印迹的固相载体的用途；

2.根据权利要求1所述对称型聚偏二氟乙烯微滤膜作为蛋白免疫印迹的固相载体的用途，其特征在于：所述双诱导方法制备得到的所述对称型聚偏二氟乙烯微滤膜在短时快速的蛋白免疫印迹过程中作为固相载体对微克级别含量的蛋白样本进行检测的用途。

3.根据权利要求1所述对称型聚偏二氟乙烯微滤膜作为蛋白免疫印迹的固相载体的用途，其特征在于：所述溶剂包括n，n-二甲基乙酰胺、n，n-甲基甲酰胺、n-甲基-2-吡咯烷酮、磷酸三乙酯、2-吡咯烷酮中的一种或多种。

4.根据权利要求1或2或3所述对称型聚偏二氟乙烯微滤膜作为蛋白免疫印迹的固相载体的用途，其特征在于，所述铸膜液中各原料的质量分数为：聚偏二氟乙烯10wt％～30wt％、溶剂50wt％～60wt％～90wt％、添加剂为0wt％～40wt％。

5.根据权利要求4任一项所述对称型聚偏二氟乙烯微滤膜作为蛋白免疫印迹的固相载体的用途，其特征在于：所述添加剂包括添加剂一和/或添加剂二；

6.根据权利要求1或2或3所述对称型聚偏二氟乙烯微滤膜作为蛋白免疫印迹的固相载体的用途，其特征在于：所述步骤s3中低温环境温度为0℃～25℃，诱导时间为10～90秒。

7.根据权利要求1或2或3所述对称型聚偏二氟乙烯微滤膜作为蛋白免疫印迹的固相载体的用途，其特征在于：所述步骤s1中聚偏二氟乙烯、溶剂、添加剂混合的温度为50℃～90℃。

8.根据权利要求1或2或3所述对称型聚偏二氟乙烯微滤膜作为蛋白免疫印迹的固相载体的用途，其特征在于：所述恒温恒湿环境的温度为20℃～40℃、相对湿度为70rh％～100rh％。

9.根据权利要求1或2或3所述对称型聚偏二氟乙烯微滤膜作为蛋白免疫印迹的固相载体的用途，其特征在于：

10.一种蛋白免疫印迹方法，其特征在于，包括：将蛋白样品在固相载体上进行电泳分离并转印，最后通过抗原抗体反应进行检测和分析，所述固相载体为具有权利要求1～9任一项所述用途的所述对称型聚偏二氟乙烯微滤膜。

技术总结
本发明提供一种双诱导方法制备得到的对称型聚偏二氟乙烯微滤膜作为蛋白免疫印迹的固相载体的用途；双诱导方法包括：低温环境中进行诱导及蒸汽诱导处理；再结合凝固浴处理得到的膜孔均匀的对称型聚偏二氟乙烯微滤膜。还提供一种蛋白免疫印迹方法。本发明中低温冷诱导将亚稳态铸膜液变为非稳态，大量的结晶形成核点，而随着蒸汽诱导时间延长，晶体生长，预凝胶状态的膜浸入凝固浴中，得到具有束状/棒状结晶的均匀孔结构无皮层PVDF膜，从而大幅度的提高了PVDF膜的孔隙率，进而增加了PVDF膜的真实蛋白质结合能力，在应用于蛋白免疫印迹的固相载体作为转印膜时，赋予了PVDF膜极高的检测灵敏度，特别是在短时快速转印的应用场景中，检测效果的提升尤为显著。

技术研发人员：张小明,赵新振,熊青山
受保护的技术使用者：迈博瑞生物膜技术(南通)有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16