一种O-叔丁基-L-苏氨酸手性分析的检测方法与流程

本发明涉及多肽领域，具体涉及一种o-叔丁基-l-苏氨酸手性分析的检测方法。

背景技术：

1、o-叔丁基-l-苏氨酸h-thr(tbu)-oh，其结构如下所示：

2、

3、苏氨酸是由w.c.rose1935年纤维蛋白水解物中分离和鉴定出来的。1936年，meger对它的空间结构进行了研究，因结构与苏糖相似，故将其命名为苏氨酸。苏氨酸有四种异构体，天然存在并且对机体有生理作用的是l-苏氨酸。

4、苏氨酸为人体必需的氨基酸，有促进生长发育和抗脂肪肝的作用，人和动物若缺乏苏氨酸会停止生长、体重减轻，引起贫血和脂肪肝等。因此，苏氨酸广泛用于食品强化剂和饲料添加剂。在医学上，苏氨酸是复合氨基酸输液的成分，又是制造高效低过敏广谱抗生素——单酰胺菌素的原料。苏氨酸分子结构为ɑ-氨基-β-羟基丁酸，因具有两个不对称碳原子，故存在以下四种异构体，l-苏氨酸(l-thr)，d-苏氨酸(d-thr)，l-别苏氨酸(l-allo-thr)，d-别苏氨酸(d-allo-thr)结构式如下所示：

5、

6、因此苏氨酸的衍生物，o-叔丁基-l-苏氨酸(h-thr(tbu)-oh)手性分离难度很大。

7、o-叔丁基-l-苏氨酸是重要的医药中间体，药物手性对于药效和毒性的影响较大，在手性药物质量研究中的一个关键问题就是对药物光学纯度的控制，所以o-叔丁基-l-苏氨酸的手性方法研究和控制对原料药和制剂的质量研究都有重要意义。

技术实现思路

1、本发明要解决的技术问题是：在充分研究o-叔丁基-l-苏氨酸结构的基础上，开发其手性分析方法，提供一种o-叔丁基-l-苏氨酸手性分析的检测方法，从而从源头上质控了o-叔丁基-l-苏氨酸的异构体纯度。

2、本发明解决上述技术问题的技术方案如下：

3、一种o-叔丁基-l-苏氨酸手性分析的检测方法，参数条件如下：

4、采用高效液相色谱法进行检测，检测波长为210～280nm，所用流动相a为正己烷，流动相b为异丙醇，均添加0.05～0.5％tfa成为离子对溶液，恒梯度洗脱条件：流动相a：流动相b＝90：10。

5、优选的，所述流动相a为100％正己烷加0.05％tfa，流动相b为100％异丙醇加0.05％tfa。

6、优选的，所述检测方法中色谱柱选自superchiral s-ad，0.46cm i.d.×15cm l，5um，2根串联。

7、优选的，所述检测方法中柱温为25～40℃，流动相流速为0.5～1.2ml/min。

8、优选的，所述检测方法中柱温为40℃，流动相流速为0.8ml/min，检测波长为254nm。

9、优选的，所述检测方法中直接采用流动相溶解样品，进样浓度为10～15mg/ml。

10、优选的，所述检测方法具体是用对硝基苯磺酰氯分别衍生h-thr(tbu)-oh，d-thr(tbu)-oh，h-allo-thr(tbu)-oh，d-allo-thr(tbu)-oh，这四种氨基酸，并制成混合溶液，以及将上述四种氨基酸的对照品分别进样定位，最后采用面积归一化法计算ns-[h-thr(tbu)-oh]的纯度。

11、优选的，所述检测方法中流动相中tfa的离子对溶液浓度为0.05～0.1％(体积比)。

12、对硝基苯磺酰氯常缩写成p-nscl，被广泛用于合成相应的磺酰胺和磺酸酯。对硝基苯磺酰氯与氨基酸反应的反应式如下：

13、

14、r分别代表h-thr(tbu)-oh，d-thr(tbu)-oh，h-allo-thr(tbu)-oh，d-allo-thr(tbu)-oh相应部分的取代基。

15、优选的，所述的检测方法在d-thr(tbu)-oh，h-allo-thr(tbu)-oh，d-allo-thr(tbu)-oh的手性分析中的应用。本方法适合d-thr(tbu)-oh，h-allo-thr(tbu)-oh，d-allo-thr(tbu)-oh的手性分析。

16、本发明中化合物的中文命名与结构式有冲突的，以结构式为准；结构式有明显错误的除外。

17、本发明提供的检测方法可以检测o-叔丁基-l-苏氨酸的手性，检测速度较快，结果准确，方法步骤简单，便于操作。本发明为o-叔丁基-l-苏氨酸的手性分析提供了一种新的方法，具有广阔的应用前景。

技术特征：

1.一种o-叔丁基-l-苏氨酸手性分析的检测方法，其特征在于参数条件如下：

2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述流动相a为100％正己烷加0.05％tfa，流动相b为100％异丙醇加0.05％tfa。

3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法中色谱柱选自superchiral s-ad，0.46cm i.d.×15cm l，5um，2根串联。

4.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法中柱温为25～40℃，流动相流速为0.5～1.2ml/min。

5.如权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法中柱温为40℃，流动相流速为0.8ml/min，检测波长为254nm。

6.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法中直接采用流动相溶解样品，进样浓度为10～15mg/ml。

7.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法具体是用对硝基苯磺酰氯分别衍生h-thr(tbu)-oh，d-thr(tbu)-oh，h-allo-thr(tbu)-oh，d-allo-thr(tbu)-oh，这四种氨基酸，并制成混合溶液，以及将上述四种氨基酸的对照品分别进样定位，最后采用面积归一化法计算ns-[h-thr(tbu)-oh]的纯度。

8.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法中流动相中tfa的离子对溶液浓度为0.05～0.1％。

9.如权利要求1-8任一项所述的检测方法在d-thr(tbu)-oh，h-allo-thr(tbu)-oh，d-allo-thr(tbu)-oh的手性分析中的应用。

技术总结
本发明涉及一种O‑叔丁基‑L‑苏氨酸手性分析的检测方法，参数条件如下：采用高效液相色谱法进行检测，检测波长为210～280nm，所用流动相A为正己烷，流动相B为异丙醇，均添加0.05～0.5％TFA成为离子对溶液，恒梯度洗脱条件：流动相A：流动相B＝90：10。本发明提供的检测方法可以检测O‑叔丁基‑L‑苏氨酸的手性，检测速度较快，结果准确，方法步骤简单，便于操作。本发明为O‑叔丁基‑L‑苏氨酸的手性分析提供了一种新的方法，具有广阔的应用前景。

技术研发人员：朱莉,徐红岩
受保护的技术使用者：吉尔生化（上海）有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15