新型冠状病毒和恶性疟原虫间日疟原虫抗体制备方法及其检测试剂盒与流程

本发明涉及一种病原体检测领域，具体涉及新型冠状病毒和恶性疟原虫间日疟原虫抗体制备方法及其检测试剂盒。

背景技术：

1、新型冠状病毒肺炎是继非典型性肺炎和中东呼吸综合症后当前发现的一种能够引起人严重急性呼吸系统病变的新疾病，具有传染性强、传播速度快等典型特征。

2、恶性疟原虫寄生于人体的四种疟原虫之一，造成恶性疟疾的病原体，恶性疟原虫以人和雌性按蚊作为宿主，在人体进行裂体增殖及配子生殖的开始，在蚊体完成配子生殖和孢子增殖。

技术实现思路

1、针对新型冠状病毒和恶性疟原虫的实际检测需求，本发明提供一种新型冠状病毒和恶性疟原虫间日疟原虫抗体制备方法及其检测试剂盒。

2、本发明是由以下技术方案来实现的：

3、本发明提供的一种同时检测新型冠状病毒和间日、恶性疟疾的抗原检测试剂盒，同时含有新型冠状病毒抗体和间日、恶性疟疾抗体。

4、所述新型冠状病毒抗体制备方法包括下列步骤：

5、(一)s重组蛋白制备

6、选取了s蛋白s1区段319-541aa，进行了细胞表达，并对表达产物进行了纯化、抗原性检测；

7、1、s蛋白表位选择分析

8、2、抗原位置确定

9、3、重组载体构建

10、4、细胞转染与筛选

11、采用elisa间接法检测原理，将sars-cov-2 s(抗原)蛋白按照包被浓度2ug/ml、包被于96孔微孔板中，对照组按照饱和浓度2ug/ml进行包被，制成固相载体，向微孔中分别加入sars-cov-2 s质控ace2-q1，ace2-q2、nc和空白限质控，质控中的ace2受体与连接于固相载体上的sars-cov-2 s蛋白结合，将未反应的组分洗净后，加入hrp标记的鼠抗人ace2抗体，elisa使用浓度为1/5k，充分反应，再次彻底洗涤后加入tmb底物显色；

12、(二)n蛋白制备

13、1、n蛋白抗原序列同源性分析

14、2、抗原确定

15、3、表达载体构建及诱导表达鉴定

16、4、蛋白分离纯化与鉴定

17、本发明所述的间日、恶性疟疾抗体制备方法包括下列步骤：

18、(一)恶性疟原虫富组氨酸蛋白2重组蛋白制备

19、1.目的基因的选择

20、参考genbank:aac47453.1 hrp2氨基酸序列，对其进行密码子优化，基因合成，构建至原核表达载体pet24a，转化大肠杆菌，进行重组表达、纯化获得大量纯度高、抗原性强的hrp2；

21、2.重组质粒构建

22、3.重组蛋白表达纯化(二)间日疟原虫裂殖子表面蛋白-1重组蛋白制备

23、1.目的基因的选择

24、参考genbank:aan86236.1序列，通过分析，选取其抗原优势表位，且保守性强的区域，对其进行密码子优化，基因合成，构建至原核表达载体pet24a，转化大肠杆菌，进行重组表达、纯化获得大量纯度高、抗原性强的msp-1重组蛋白；

25、2.重组质粒构建

26、3.重组蛋白表达纯化(三)富组氨酸蛋白2和裂殖子表面蛋白-1抗体的制备

27、1.小鼠免疫

28、2.抗体制备

29、3、抗体纯化

30、4、抗体验证

31、采用双抗体夹心法，对抗体配对效果进行验证；将10个抗体分别进行hrp标记，采用棋盘法进行双抗体夹心检测；包被相应抗体，加入pfhrp2(或pvmsp-1)蛋白，再加入hrp标记的抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，在底物显色液的作用下，通过酶标仪检测od450。

32、有益效果在于：

33、本发明产品性能符合质量标准的要求(阴性参考品检测结果全为阴性，阳性参考品检测结果全为阳性)，产品特异性和干扰试验均符合产量质量要求(与呼吸道相关疾病无交叉反应，试剂盒不受干甘油三酯、胆红素等血清基质的影响)，产品的加速稳定性实验符合1个月的要求。

技术特征：

1.一种同时检测新型冠状病毒和间日、恶性疟疾的抗原检测试剂盒，其特征在于，同时含有新型冠状病毒抗体和间日、恶性疟疾抗体。

2.根据权利要求1所述的抗原检测试剂盒，其特征在于，所述新型冠状病毒抗体制备方法包括下列步骤：

3.根据权利要求1所述的抗原检测试剂盒，其特征在于，所述间日、恶性疟疾抗体制备方法包括下列步骤：

技术总结
本发明涉及抗体抗原制备领域，具体是一种同时检测新型冠状病毒和间日、恶性疟疾的抗原检测试剂盒，同时含有新型冠状病毒抗体和间日、恶性疟疾抗体。本发明产品性能符合质量标准的要求（阴性参考品检测结果全为阴性，阳性参考品检测结果全为阳性），产品特异性和干扰试验均符合产量质量要求（与呼吸道相关疾病无交叉反应，试剂盒不受干甘油三酯、胆红素等血清基质的影响），产品的加速稳定性实验符合1个月的要求。

技术研发人员：滕新栋,李西峰,陈晓光,刘迪,刘万建
受保护的技术使用者：青岛国际旅行卫生保健中心（青岛海关口岸门诊部）
技术研发日：
技术公布日：2024/1/25