一种微球标记幽门螺杆菌抗体的方法、试剂条及试剂盒与流程

本发明涉及生物检测，尤其涉及一种微球标记幽门螺杆菌抗体的方法、试剂条及试剂盒。

背景技术：

1、就目前而言，幽门螺杆菌是一种革兰阴性菌，对生长条件要求十分苛刻，主要在胃及十二指肠的各个区域生存，是目前已知可在人胃中存活的唯一微生物，也是引起慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌、胃malt淋巴瘤等多种消化道疾病的重要病原体，能通过胃-口途径、口-口途径、粪-口途径、内窥镜等多种途径传播。因此，加强对幽门螺杆菌的筛查至关重要。

2、随着医疗技术的不断发展，诞生了多种检测幽门螺杆菌的方法。主要包括以下方法。

3、一、侵入性检测方法：这种检测方法主要是依赖胃镜提取活组织进行检查，包括组织学检查、细菌培养、快速尿素酶试验(rut)、幽门螺杆菌基因检测，如聚酶链式反应(pcr)、寡核苷酸探针杂交等。

4、二、非侵入性检测方法：与侵入性检测方法相比，这种检测方法不需要采集胃活检组织，避免了因其所导致的感染及给患者带来的疼痛，临床应用比较广泛，具有快速、廉价、易操作等优点，但是检测的精确度容易受到多种因素的影响。非侵入性检测方法包括c13或c14尿素呼气试验(ubt)、粪便幽门螺杆菌抗原检测、血清学检查等。

5、传统幽门螺杆菌的检测方法灵敏度低。因此，提供一种灵敏度高的检测人体中幽门螺杆菌的方法成为迫切需要。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的是提供一种微球标记幽门螺杆菌抗体的方法、试剂条及试剂盒，能够克服传统幽门螺杆菌检测灵敏度低等缺点，且具有较好的稳定性，灵敏性和特异性，还具有操作快速简便、结果准确、经济适用等优点。

2、本发明通过以下技术手段解决上述技术问题：

3、第一方面，本申请提供了一种微球标记幽门螺杆菌抗体的方法，包括以下步骤：

4、s1.将清洗后的微球与微球清洗液混匀，再加入活化剂，活化，得到混合液一；

5、s2.将混合液一与幽门螺杆菌抗体混合均匀，反应0.5-5h，得到混合液二；

6、s3.将微球封闭液加入经s2步骤处理的混合液二，封闭0.5-3h，将封闭后的微球再次用微球清洗液清洗，得到混合液三，保存，得到微球标记液。

7、在本方案中，幽门螺杆菌抗体为幽门螺杆菌标记抗体。

8、结合第一方面，在一些实施方式中，所述s1和s3步骤中，微球清洗液为2-(n-吗啉)乙磺酸与水的混合物或n-(2-羟乙基)哌嗪-n'-2-乙烷磺酸中的一种或多种，所述微球清洗液的浓度为10-1000mm，ph为2-10。

9、结合第一方面，在一些实施方式中，所述s1步骤中，活化剂包括活化剂一和活化剂二，在加入时，先加入活化剂一，与微球以及微球清洗液混匀，再加入活化剂二，再次混匀后，于36-38℃的条件下，活化5-20min。

10、结合第一方面，在一些实施方式中，所述活化剂一为：1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺，所述活化剂一的浓度为0.1-500mg/ml。

11、结合第一方面，在一些实施方式中，所述活化剂二为：n-羟基琥珀酰亚胺，所述活化剂二的浓度为0.1-500mg/ml。

12、结合第一方面，在一些实施方式中，所述s3步骤中，封闭液包括0.1-20％牛血清白蛋白和0.1-10％吐温。

13、结合第一方面，在一些实施方式中，所述s3步骤中，保存的方法具体包括：用微球保存液，于2-8℃的条件下，保存混合液三，得到微球标记液，所述微球保存液包括0.1-20％葡萄糖或蔗糖或海藻糖、0.1-20％牛血清白蛋白和0.01-10％防腐剂。

14、第二方面，本申请还公开了一种幽门螺杆菌抗原检测的试剂条，所述试剂条的制备包括以下步骤：

15、s10.将微球标记液用微球稀释液稀释，再用xyz三维划线喷金仪将稀释后的微球标记液喷在空白的释放垫上，干燥后制成标记垫；

16、s20.用xyz三维划线喷金仪将幽门螺杆菌包被抗体和羊抗鼠igg划在硝酸纤维素膜上，干燥后制成检测线和质控线；

17、s30.从加样端开始依次排列将样品垫、标记垫、硝酸纤维素膜和吸水纸组装在pvc底板上，用斩切机进行切条，得到试剂条。

18、结合第二方面，在一些实施方式中，所述微球稀释液包括0.1-20％三(羟甲基)氨基甲烷、0.1-20％牛血清白蛋白、0.1-20％葡萄糖或蔗糖或海藻糖、0.01-10％防腐剂和0.01％-10％吐温。

19、第三方面，本申请还公开了一种试剂盒，包括上述所述的试剂条和用于粪便样本的一体化检测装置。

20、采用上述方案的本申请，具有如下有益效果：

21、1.通过采用活化剂活化后的微球，并再与幽门螺杆菌标记抗体进行偶联，偶联后再采用封闭液封闭，能够得到具有较好稳定性、灵敏性和特异性的微球标记幽门螺杆菌标记抗体；

22、2.通过将具有较好稳定性、灵敏性和特异性的微球标记幽门螺杆菌标记抗体喷涂制成标记垫，再与样品垫、硝酸纤维素膜、吸水纸、pvc底板组装，得到试剂条，并将试剂条装配在用于粪便样本的一体化检测装置中，能够得到幽门螺杆菌抗原检测试剂盒，该试剂盒基于乳胶法制备得到，使其具有操作快速简便、结果准确、经济适用等优点。

技术特征：

1.一种微球标记幽门螺杆菌抗体的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述s1和s3步骤中，微球清洗液为2-(n-吗啉)乙磺酸与水的混合物或n-(2-羟乙基)哌嗪-n'-2-乙烷磺酸中的一种或多种，所述微球清洗液的浓度为10-1000mm，ph为2-10。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述s1步骤中，活化剂包括活化剂一和活化剂二，在加入时，先加入活化剂一，与微球以及微球清洗液混匀，再加入活化剂二，再次混匀后，于36-38℃的条件下，活化5-20min。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述活化剂一为：1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺，所述活化剂一的浓度为0.1-500mg/ml。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述活化剂二为：n-羟基琥珀酰亚胺，所述活化剂二的浓度为0.1-500mg/ml。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述s3步骤中，封闭液包括0.1-20％牛血清白蛋白和0.1-10％吐温。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述s3步骤中，保存的方法具体包括：用微球保存液，于2-8℃的条件下，保存混合液三，得到微球标记液，所述微球保存液包括0.1-20％葡萄糖或蔗糖或海藻糖、0.1-20％牛血清白蛋白和0.01-10％防腐剂。

8.一种如权利要求1-7任一项所述的微球标记幽门螺杆菌抗体的抗原检测的试剂条，其特征在于，所述试剂条的制备包括以下步骤：

9.根据权利要求8所述的试剂条，其特征在于，所述微球稀释液包括0.1-20％三(羟甲基)氨基甲烷、0.1-20％牛血清白蛋白、0.1-20％葡萄糖或蔗糖或海藻糖、0.01-10％防腐剂和0.01％-10％吐温。

10.一种试剂盒，其特征在于，包括权利要求8所述的试剂条和用于粪便样本的一体化检测装置。

技术总结
本发明涉及生物检测技术领域，尤其涉及一种微球标记幽门螺杆菌抗体的方法、试剂条及试剂盒，该方法包括以下步骤：S1.将清洗后的微球与微球清洗液混匀，再加入活化剂，活化，得到混合液一；S2.将混合液一与幽门螺杆菌抗体混合均匀，反应0.5‑5h，得到混合液二；S3.将微球封闭液加入经S2步骤处理的混合液二，封闭0.5‑3h，将封闭后的微球再次用微球清洗液清洗，得到混合液三，保存，得到微球标记液。其目的在于，能够克服传统幽门螺杆菌检测灵敏度低等缺点，且具有较好的稳定性，灵敏性和特异性，还具有操作快速简便、结果准确、经济适用等优点。

技术研发人员：孙婵,孟娇,左云国,马丹丹,赵亚丽
受保护的技术使用者：重庆新赛亚生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15