一种荧光标记抗体保护剂及其制备方法和应用与流程

本发明属于免疫检测，具体涉及一种荧光标记抗体保护剂及其制备方法和应用。

背景技术：

1、免疫荧光技术是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。它是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光基团，再用这种荧光抗体(或抗原)作为探针检查细胞或组织内的相应抗原(或抗体)。利用荧光显微镜可以看见荧光所在的细胞或组织，从而确定抗原或抗体的性质和定位，以及利用定量技术测定含量。

2、在免疫荧光检测试剂生产中，需要对荧光标记抗体进行保护，以使商品化试剂拥有更长的货架期。目前的抗体保护剂的保护期一般为1年，无法适应长时间保存的要求。并且因为现有抗体保护剂中含有由蛋白成分带入的免疫球蛋白(如传统的酶标抗体保护液中含有牛血清白蛋白、卵白蛋白和乳蛋白等蛋白，不可避免地代入igg、igy等免疫球蛋白)，给一些对免疫球蛋白灵敏的免疫检测实验带来背景值，导致酶联免疫检测试剂盒无法适用于一些特殊的酶联免疫分析，如以免疫球蛋白为检测对象的免疫分析，或者背景干扰要求较高的免疫分析。此外，对于检测目标分子量小于1000da的小分子，通常在制备抗体时需要将其与载体蛋白进行偶联，而常用的载体蛋白通常为牛血清白蛋白、卵白蛋白、血蓝蛋白，这些蛋白也是目前常用的蛋白保护剂，因此在实际检测时会对反应结果产生干扰。

3、因此，亟需提供一种保护期限长，且不会对免疫检测带来背景干扰的抗体保护剂。

技术实现思路

1、本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种荧光标记抗体保护剂及其制备方法和应用。本发明提供的荧光标记抗体保护剂，其保护期限长，且不会对免疫检测带来背景干扰。

2、本发明提供了一种荧光标记抗体保护剂。

3、具体地，一种荧光标记抗体保护剂，包括：鱼精蛋白、大豆多糖、表面活性剂和抑菌剂，所述抑菌剂包括ε-聚赖氨酸和proclin 300。

4、优选地，所述荧光标记抗体保护剂包括：0.3～3.0mg/ml鱼精蛋白、0.3～3.5mg/ml大豆多糖、0.1～4.0ml/l表面活性剂、0.05～3.0mg/mlε-聚赖氨酸和0.1～3.0ml/lproclin 300。

5、进一步优选地，所述荧光标记抗体保护剂包括：0.5～2.0mg/ml鱼精蛋白、0.5～3.0mg/ml大豆多糖、0.1～3.0ml/l表面活性剂、0.1～2.0mg/mlε-聚赖氨酸和0.3～2.5ml/lproclin 300。

6、更优选地，所述荧光标记抗体保护剂包括：0.5～2.0mg/ml鱼精蛋白、1.0～2.0mg/ml大豆多糖、0.1～3.0ml/l表面活性剂、0.5～1.5mg/mlε-聚赖氨酸和0.5～2.0ml/lproclin 300。

7、优选地，所述表面活性剂选自tween-20、tween-80、曲拉通x-100中的至少一种。

8、优选地，所述荧光标记抗体保护剂还包括缓冲溶液。

9、优选地，所述缓冲溶液的ph值为6.0-8.0。

10、优选地，所述缓冲溶液为磷酸盐缓冲液。

11、本发明还提供了一种荧光标记抗体保护剂的制备方法。

12、具体地，一种荧光标记抗体保护剂的制备方法，包括以下步骤：

13、将各组分溶于缓冲溶液中，配制成溶液，即制得荧光标记抗体保护剂。

14、更为具体地，一种荧光标记抗体保护剂的制备方法，包括以下步骤：

15、将鱼精蛋白、大豆多糖、ε-聚赖氨酸加入磷酸缓冲液中，然后加入表面活性剂和proclin 300，混合均匀后，使用滤膜过滤，制得荧光标记抗体保护剂。

16、本发明还提供了上述荧光标记抗体保护剂的应用。

17、具体地，上述荧光标记抗体保护剂在制备免疫检测试剂或试剂盒中的应用。

18、按照对荧光抗体的荧光强度的要求，采用上述荧光标记抗体保护剂稀释10-1000000倍。

19、本发明还提供了一种免疫检测试剂。

20、具体地，一种免疫检测试剂，包含上述荧光标记抗体保护剂。

21、本发明还提供了一种免疫检测试剂盒。

22、具体地，一种免疫检测试剂盒，包含上述荧光标记抗体保护剂。

23、传统荧光标记抗体的保护液中一般含有牛血清白蛋白、卵白蛋白等蛋白，在检测小分子时不可避免地会产生一定的交叉反应。本发明以鱼精蛋白替换传统的牛血清白蛋白或卵白蛋白等，能够有效避免交叉反应，减少载体蛋白对检测带来的干扰；同时鱼精蛋白具有抑菌活性，能够有效延长保质期。本发明采用大豆多糖作为稳定剂，大豆多糖可以在抗体分子界面形成膜，利用空间位阻来防止抗体沉淀聚集，增加抗体的稳定性，延长使用周期；且空间位阻的形成也能防止荧光淬灭。同时大豆多糖具有抗冻活性，能在低温下保证抗体的稳定性。本发明以ε-聚赖氨酸和proclin 300形成保护剂的抗菌体系，两者协同增效，能够有效提高抗菌效果，使荧光标记抗体在常温下的有效保质期可长达2年以上。

24、相比现有技术，本发明的有益效果在于：

25、(1)本发明提供的荧光标记抗体保护剂包括鱼精蛋白、大豆多糖、表面活性剂和抑菌剂；鱼精蛋白能够减少载体蛋白对检测带来的干扰，大豆多糖能够增加抗体的稳定性，延长使用周期；并通过ε-聚赖氨酸和proclin 300的复配使用，能够有效延长保护剂的保护期限。

26、(2)本发明提供的荧光标记抗体保护剂，其保护期限长，对免疫检测的背景干扰小；且其制备方法简单，能够广泛应用于免疫检测试剂或试剂盒中。

技术特征：

1.一种荧光标记抗体保护剂，其特征在于，包括：鱼精蛋白、大豆多糖、表面活性剂和抑菌剂，所述抑菌剂包括ε-聚赖氨酸和proclin 300。

2.根据权利要求1所述的荧光标记抗体保护剂，其特征在于，包括：0.3～3.0mg/ml鱼精蛋白、0.3～3.5mg/ml大豆多糖、0.1～4.0ml/l表面活性剂、0.05～3.0mg/mlε-聚赖氨酸和0.1～3.0ml/l proclin 300。

3.根据权利要求2所述的荧光标记抗体保护剂，其特征在于，包括：0.5～2.0mg/ml鱼精蛋白、0.5～3.0mg/ml大豆多糖、0.1～3.0ml/l表面活性剂、0.1～2.0mg/mlε-聚赖氨酸和0.3～2.5ml/l proclin 300。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的荧光标记抗体保护剂，其特征在于，所述表面活性剂选自tween-20、tween-80、曲拉通x-100中的至少一种。

5.根据权利要求1-3中任一项所述的荧光标记抗体保护剂，其特征在于，还包括缓冲溶液；所述缓冲溶液的ph值为6.0-8.0。

6.根据权利要求5所述的荧光标记抗体保护剂，其特征在于，所述缓冲溶液为磷酸盐缓冲液。

7.权利要求5或6所述的荧光标记抗体保护剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

8.权利要求1-6中任一项所述的荧光标记抗体保护剂在制备免疫检测试剂或试剂盒中的应用。

9.一种免疫检测试剂，其特征在于，包含权利要求1-6中任一项所述的荧光标记抗体保护剂。

10.一种免疫检测试剂盒，其特征在于，包含权利要求1-6中任一项所述的荧光标记抗体保护剂。

技术总结
本发明属于免疫检测技术领域，公开了一种荧光标记抗体保护剂及其制备方法和应用。该荧光标记抗体保护剂包括：鱼精蛋白、大豆多糖、表面活性剂和抑菌剂；抑菌剂包括ε‑聚赖氨酸和proclin 300。本发明提供的荧光标记抗体保护剂通过加入鱼精蛋白，能够减少载体蛋白对检测带来的干扰；大豆多糖能够增加抗体的稳定性，延长使用周期；而ε‑聚赖氨酸和proclin 300的复配使用，能够有效延长保护剂的保护期限。本发明提供的荧光标记抗体保护剂，其保护期限长，对免疫检测的背景干扰小；且其制备方法简单，能够广泛应用于免疫检测试剂或试剂盒中。

技术研发人员：冯荣虎,张世伟,李锦才,夏奇胜,贺颖,陈血建,王坤,吴会玲,王珍妮,张倩
受保护的技术使用者：深圳市计量质量检测研究院（国家高新技术计量站、国家数字电子产品质量监督检验中心）
技术研发日：
技术公布日：2024/2/1