一种简易快速制作植物叶表皮的新方法

本发明涉及一种简易快速制作植物叶表皮的新方法，属于生物。

背景技术：

1、植物的形态特征是植物分类的重要基础,植物叶表皮的性状特点在类群间的系统学关系(张志耘等,1998；于慧等,2011)、类群分类鉴定(税玉民等,1999；koesisetal.,2004)、植物突变体形态学(bernáetal.,1999；pérez-pérezetal.,2002)和植物对生态因子的特殊适应性(石硕等,2008)等研究方面均具有参考价值。因此对于植物叶表皮的观察方法的研究和技术改进,可为植物学研究提供更为完整的叶表皮形态信息。植物叶的表皮特征及气孔器的结构和类型已作为区分属间或种间的重要特征。有关于表皮装片的制作有多种方法，不同的学者针对不同性状的叶片，使用的方法也有所不同，包括直接撕取法、煮沸刮片法、透明胶带粘取法、离析法、印迹法、水杨酸甲酯透明法、电镜扫描法、叶片燃烧法、荧光显微镜法等(崔宏安等,2007；蒋天翼等，2022；王任翔等，2013)。直接撕取法虽然简单，但仅适合叶脉少，表皮细胞和叶肉细胞易分离的少部分植物，广适性不强，而且随机性强、定位性差，需要大量新鲜叶片。煮沸刮片法因经过沸处理叶片过软，很容易将表皮刮破，影响观察效果。指甲油印迹法会使表皮细胞产生皱缩，影响最终观察效果，同时也对后期数据测量的真实性有直接影响。胶带直接粘取法对有些植物叶片来说，表皮粘取不下来，无法完成制片。水杨酸甲酯透明法或铬酸离析法容易造成叶片结构的破坏，影响观察效果。也有学者采用先铬酸离析处理后胶带粘取法，但这种方法对实验人员的经验要求较高，粘取力度和速度不好掌控，用力过大或撕取速度不稳都会破坏表皮的完整性，制片效率低，缺乏稳定性和可重复性。叶片燃烧法对植物叶有要求，高度木质化且角质层较厚的叶才适用，且表皮细胞的附属结构观察不到，该法具有针对性和局限性。电镜扫描法对植物叶的前期处理过程较复杂，耗时长且成本也高。针对现有技术的不足，本发明的目的：制作植物叶表皮不同学者针对植物叶片质地不同，应用了上述多种方法，本方法对叶片的普适度较高，包括网状脉细脉较多者，表皮附属物较多者，不易撕取等情况均适用，且成本低，耗时短。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明在众多方法基础上提出一种新方法：先刮制后离析法：先使用双面刀片将所需观察表皮以外的叶肉及另一侧表皮轻轻刮去，然后用软刷或毛笔刷去除残余叶肉，放置于10％次氯酸钠溶液中离析，如有需要再进行苏木精或番红染色，这种方法与直接离析或直接撕取法相比较，得到表皮细胞及气孔器形态在观察中效果更好；与扫描电镜法相比，此方法操作简单，简化了制片程序，缩短了制片时间和制片成本。

2、本发明提供一种简易快速制作植物叶表皮的新方法，其包括以下步骤：

3、1)取新鲜植物叶片，或将植物叶片存放在faa固定液中；

4、2)用刀片切除叶片上下端1/3，仅留中间1/3部分，沿着主脉两侧各切下1-2cm宽叶片；

5、3)使用双面刀片将所需观察表皮以外的叶肉及另一侧表皮轻轻刮去，刮的过程中要保持叶片结构湿润，用胶头滴管冲洗表面；

6、4)刮至表皮细胞呈半透明或略带绿色膜状，用软刷或毛笔头刷蘸水刷除残余叶肉部分；

7、5)置于10％次氯酸钠溶液中离析；

8、6)切除已完成的表皮，蒸馏水清理以后，经过30％、50％、70％乙醇梯度脱水，二甲苯透明；

9、7)添加苏木精或番红染色；

10、8)擦拭干净载破片和盖玻片表面，使用加拿大树胶沿盖玻片边缘滴胶完成封片。

11、优选的，所述步骤1)中将植物叶片存放在faa固定液中24小时以上。

12、优选的，所述步骤2)中根据叶片实际大小留取，主脉部分要去除。

13、优选的，所述步骤3)中制作上表皮装片时，将上表皮朝下放置在载破片上，轻刮下表皮及中间叶肉部分。

14、优选的，所述步骤5)中离析10分钟-24小时。

15、本发明的有益效果：

16、本发明提供一种简易快速制作植物叶表皮的新方法，其可操作性强，易上手，观察到的叶片表皮细胞清晰度高且结构完整，制作成本低，保存更持久，适用于极大多数叶片制作，有些分类学者因现实原因无法在同一生长季采集到同科或同属的目标植物，所以此方法应用效果较好。

技术特征：

1.一种简易快速制作植物叶表皮的新方法，其特征在于：包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种简易快速制作植物叶表皮的新方法，其特征在于：所述步骤1)中将植物叶片存放在faa固定液中24小时以上。

3.根据权利要求1所述的一种简易快速制作植物叶表皮的新方法，其特征在于：所述步骤2)中根据叶片实际大小留取，主脉部分要去除。

4.根据权利要求1所述的一种简易快速制作植物叶表皮的新方法，其特征在于：所述步骤3)中制作上表皮装片时，将上表皮朝下放置在载破片上，轻刮下表皮及中间叶肉部分。

5.根据权利要求1所述的一种简易快速制作植物叶表皮的新方法，其特征在于：所述步骤5)中离析10分钟-24小时。

技术总结
本发明涉及一种简易快速制作植物叶表皮的新方法，属于生物技术领域。发明在众多方法基础上提出一种新方法：先刮制后离析法：先使用双面刀片将所需观察表皮以外的叶肉及另一侧表皮轻轻刮去，然后用软刷或毛笔刷去除残余叶肉，放置于10％次氯酸钠溶液中离析，如有需要再进行苏木精或番红染色，这种方法与直接离析或直接撕取法相比较，得到表皮细胞及气孔器形态在观察中效果更好；与扫描电镜法相比，此方法操作简单，简化了制片程序，缩短了制片时间和制片成本，其可操作性强，易上手，观察到的叶片表皮细胞清晰度高且结构完整，制作成本低，保存更持久，适用于极大多数叶片制作。

技术研发人员：吴东梅,曲同宝,钱锴,王豫,蒋丽,孟繁勇
受保护的技术使用者：吉林农业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/3/21