一种可溶性糖和可溶性有机酸的定性检测方法与流程

本发明涉及食品检测，尤其涉及一种可溶性糖和可溶性有机酸的定性检测方法。

背景技术：

1、瓯柑是浙江省温州市瓯海区特产，其果肉柔软多汁，初食时略带微苦，除了特有的苦味物质外，糖酸也是影响瓯柑果实内在品质的重要组成部分，其种类、含量及比例对果实的商品价值及口感风味起着决定性作用。耐贮藏是瓯柑另一大特点，在室温通风的条件下，瓯柑能够贮存至翌年五六月份，经贮藏后果实中可溶性有机酸的含量显著降低，但可溶性糖含量与苦味物质含量未有显著差异，表现出另一番风味。因此，对瓯柑果实中糖酸含量及组分的研究，有助于了解其果实可溶性糖和可溶性有机酸形成与变化的因素，进而通过调整合理的栽培、贮藏措施，提升果实品质。

2、现有的瓯柑果实糖酸定性检测方法有蒽酮比色法、菲林试剂比色法、高效毛孔管电泳法、二硝基水杨酸法、氢氧化钠滴定法和高效液相色谱法(hplc)，但它们存在检测时间长和干扰性高的问题。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种可溶性糖和可溶性有机酸的定性检测方法，实现可溶性糖和可溶性有机酸的具体种类的快速定性测定。

2、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

3、本发明提供了一种可溶性糖和可溶性有机酸的定性检测方法，包括如下步骤：

4、(1)将样品和乙醇混合，水浴后离心，分离得到上清液1和残渣；

5、(2)将残渣和乙醇混合，水浴后离心，分离得到上清液2；

6、(3)将上清液1和上清液2混合后干燥，得到提取产物；

7、(4)将提取产物溶解后过滤，得到待测样品；

8、(5)采用高效液相色谱对待测样品中的可溶性糖和可溶性有机酸含量进行定性检测。

9、作为优选，步骤(1)中所述的样品为瓯柑果肉粉末，所述瓯柑果肉粉末的制备方法为：将瓯柑果肉用液氮磨成粉末。

10、作为优选，步骤(1)中所述样品和乙醇的用量比为1g：2.8～3.2ml，所述乙醇的质量浓度为75～85％，所述水浴的温度为75～85℃，所述水浴的时间为25～35min，所述离心的转速为11000～13000rpm，所述离心的时间为8～12min。

11、作为优选，步骤(2)中所述残渣和乙醇的用量比为1g：2.8～3.2ml，所述乙醇的质量浓度为75～85％，所述水浴的温度为75～85℃，所述水浴的时间为25～35min，所述离心的转速为11000～13000rpm，所述离心的时间为8～12min。

12、作为优选，步骤(3)中所述干燥时采用冷冻干燥，所述冷冻干燥的温度为-75～-85℃。

13、作为优选，步骤(4)中所述溶解时采用超纯水进行溶解，所述超纯水和步骤(1)中样品的用量比为28～32ml：1g。

14、作为优选，步骤(5)中对可溶性糖含量进行定性检测时高效液相色谱的条件为：色谱柱：uplc acquity behamide；流动相：乙腈混合液与水，按照体积比80～90：10～20组成，流速：0.18～0.22ml/min，柱温：40～50℃，进样时间：10～20min，进样体积：1.8～2.2μl；检测条件包括：elsd检测器，气体压力：24～26psi，漂移管温度：53～57℃，喷雾器：23～27℃，所述乙腈混合液为含有质量分数为0.8～1.2％的氨水的乙腈。

15、作为优选，步骤(5)中对可溶性有机酸含量进行定性检测时高效液相色谱的条件为：色谱柱：acquity uplc hss t3；流动相：磷酸二氢钾溶液-甲醇，所述流动相中磷酸二氢钾的浓度为18～22mmol/l，甲醇的质量分数为0.8～1.2％，所述流动相的ph值＝2.3～2.5，流速：0.23～0.27ml/l，柱温：28～32℃，进样时间：4～6min，进样体积：1.8～2.2μl；检测条件包括：pda检测器，波长：212～216nm。

16、本发明提供了一种可溶性糖和可溶性有机酸的定性检测方法，包括如下步骤：(1)将样品和乙醇混合，水浴后离心，分离得到上清液1和残渣；(2)将残渣和乙醇混合，水浴后离心，分离得到上清液2；(3)将上清液1和上清液2混合后干燥，得到提取产物；(4)将提取产物溶解后过滤，得到待测样品；(5)采用高效液相色谱对待测样品中的可溶性糖和可溶性有机酸含量进行定性检测。本发明提供了一种瓯柑果实中可溶性糖和可溶性有机酸的定性检测方法。本发明提供的定性检测方法能够实现可溶性糖和可溶性有机酸的具体种类的快速定性测定。

技术特征：

1.一种可溶性糖和可溶性有机酸的定性检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的定性检测方法，其特征在于，步骤(1)中所述的样品为瓯柑果肉粉末，所述瓯柑果肉粉末的制备方法为：将瓯柑果肉用液氮磨成粉末。

3.根据权利要求1所述的定性检测方法，其特征在于，步骤(1)中所述样品和乙醇的用量比为1g：2.8～3.2ml，所述乙醇的质量浓度为75～85％，所述水浴的温度为75～85℃，所述水浴的时间为25～35min，所述离心的转速为11000～13000rpm，所述离心的时间为8～12min。

4.根据权利要求1所述的定性检测方法，其特征在于，步骤(2)中所述残渣和乙醇的用量比为1g：2.8～3.2ml，所述乙醇的质量浓度为75～85％，所述水浴的温度为75～85℃，所述水浴的时间为25～35min，所述离心的转速为11000～13000rpm，所述离心的时间为8～12min。

5.根据权利要求1所述的定性检测方法，其特征在于，步骤(3)中所述干燥时采用冷冻干燥，所述冷冻干燥的温度为-75～-85℃。

6.根据权利要求1所述的定性检测方法，其特征在于，步骤(4)中所述溶解时采用超纯水进行溶解，所述超纯水和步骤(1)中样品的用量比为28～32ml：1g。

7.根据权利要求1所述的定性检测方法，其特征在于，步骤(5)中对可溶性糖含量进行定性检测时高效液相色谱的条件为：色谱柱：uplc acquitybehamide；流动相：乙腈混合液与水，按照体积比80～90：10～20组成，流速：0.18～0.22ml/min，柱温：40～50℃，进样时间：10～20min，进样体积：1.8～2.2μl；检测条件包括：elsd检测器，气体压力：24～26psi，漂移管温度：53～57℃，喷雾器：23～27℃，所述乙腈混合液为含有质量分数为0.8～1.2％的氨水的乙腈。

8.根据权利要求1所述的定性检测方法，其特征在于，步骤(5)中对可溶性有机酸含量进行定性检测时高效液相色谱的条件为：色谱柱：acquityuplc hss t3；流动相：磷酸二氢钾溶液-甲醇，所述流动相中磷酸二氢钾的浓度为18～22mmol/l，甲醇的质量分数为0.8～1.2％，所述流动相的ph值＝2.3～2.5，流速：0.23～0.27ml/l，柱温：28～32℃，进样时间：4～6min，进样体积：1.8～2.2μl；检测条件包括：pda检测器，波长：212～216nm。

技术总结
本发明涉及食品检测技术领域。本发明提供了一种可溶性糖和可溶性有机酸的定性检测方法，包括如下步骤：(1)将样品和乙醇混合，水浴后离心，分离得到上清液1和残渣；(2)将残渣和乙醇混合，水浴后离心，分离得到上清液2；(3)将上清液1和上清液2混合后干燥，得到提取产物；(4)将提取产物溶解后过滤，得到待测样品；(5)采用超高效液相色谱对待测样品中的可溶性糖和可溶性有机酸含量进行定性检测。本发明提供了一种瓯柑果实中可溶性糖和可溶性有机酸的定性检测方法。本发明提供的定性检测方法能够实现可溶性糖和可溶性有机酸的具体种类的快速定性测定。

技术研发人员：张培安,赵泉,刘冬峰,宋洋,单琳雯,金欢淳,张涛
受保护的技术使用者：浙江省亚热带作物研究所（浙南林业科学研究院）
技术研发日：
技术公布日：2024/2/8