组氨酸发酵液快速检测含量的方法与流程

文档序号:37242350发布日期:2024-03-06 17:11阅读:64来源:国知局

本发明涉及组氨酸发酵液快速检测含量的方法,属于组氨酸含量检测。


背景技术:

1、组氨酸是20种氨基酸中唯一在生理ph下具有缓冲能力的氨基酸,其咪唑基的pkim为6.0,在ph7.0处有显著的缓冲能力,组氨酸在血红蛋白的组成中具有非常重要的意义。l-组氨酸能够广泛地应用于医疗、食品和饲料行业。目前,组氨酸越来越多地运用于医药行业,主要是氨基酸输液及综合氨基酸制剂,还用于消化道溃疡药及心脏循环器官医药品的生产原料等。

2、l-组氨酸的制备方法有化学合成法、蛋白质水解提取法和微生物发酵法等。本技术主要应用在微生物发酵产组氨酸过程中。

3、现有技术中检测组氨酸常用的方法包括高效液相法、纸层析法和薄层色谱法,其中高效液相法对色谱柱损害大,成本较高;纸层析测定高浓度组氨酸准确度差;薄层色谱层析测定速度和准确度适中,在实际应用中被广泛采用。常规检测氨基酸的方法是将展开剂展开后,再喷茚三酮进行染色,但是,在发酵过程中,通常需要对发酵液中的氨基酸进行快速定量,而上述方法步骤繁琐,检测时间长,难以满足快速定量发酵液中氨基酸的目的;并且,喷茚三酮的过程中,不同人喷量不一样会导致结果出现偏差,造成结果不准确,因此,所述操作对于人员熟练度要求较高。

4、现有的组氨酸检测方法步骤繁琐、耗时长,无法快速对组氨酸进行检测,且对实验人员的熟练度要求较高。


技术实现思路

1、组氨酸和茚三酮反应生产有色物质,本方法运用薄层色谱法快速检测组氨含量。

2、本发明提供了一种快速检测组氨酸含量的方法,包括以下步骤:

3、(1)标准样配制:配制不同浓度的组氨酸标准溶液;

4、(2)待测样处理:稀释待测样,得到样品清液;

5、(3)点板:将稀释好的待测样点在层析板上,吹干;

6、(4)层析展开:将茚三酮溶液加入到展开剂中,然后将步骤(3)得到的层析板放入盛有展开剂的层析缸中,展开后取出;

7、(5)显色:将步骤(4)得到的层析板烘干至斑点出现,目视比色,确定样品含量。

8、在一种实施方式中,步骤(3)中,将0.6μl样品清液和组氨酸标准样品分别点在层析板上,吹干。

9、在一种实施方式中,步骤(4)所述茚三酮溶液中,茚三酮的含量为0.5~2g/l。

10、在一种实施方式中,步骤(4)所述的展开剂为正丁醇:冰乙酸:水以体积比6.17:2.86:2混合制得。

11、在一种实施方式中,步骤(5)所述烘干为在80℃烘箱中烘干。

12、本发明还提供了一种提高组氨酸检测准确性的方法,将茚三酮加入到展开剂中,进行薄层层析。

13、在一种实施方式中,所述展开剂中,茚三酮的含量为0.5~2g/l。

14、本发明还提供所述方法在食品、医药、化工或农业领域的应用。

15、有益效果:

16、本发明提供了一种快速检测组氨酸的方法,利用组氨酸和茚三酮的显色反应,运用薄层色谱法快速检测组氨含量。本方法简化了传统检测方法,使得样品检测周期变短,同时提前加入茚三酮显色剂,使得操作稳定性更好。



技术特征:

1.一种快速检测组氨酸含量的方法,其特征在于,包括以下步骤:

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(3)中,将0.5~1μl样品清液和组氨酸标准样品分别点在层析板上,吹干。

3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(4)所述展开剂中,茚三酮的含量为0.5~2g/l。

4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(4)所述的展开剂为正丁醇:冰乙酸:水以体积比6.17:2.86:2混合制得。

5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(5)所述烘干为在烘箱中烘干。

6.一种提高组氨酸检测准确性的方法,其特征在于,将茚三酮加入到展开剂中,进行薄层层析。

7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,所述展开剂中,茚三酮的含量为0.5~2g/l。

8.权利要求1~7任一所述方法在食品、医药、化工或农业领域的应用。


技术总结
本发明公开了组氨酸发酵液快速检测含量的方法,属于组氨酸含量检测技术领域。本发明提供了一种快速检测组氨酸的方法,利用组氨酸和茚三酮的显色反应,运用薄层色谱法快速检测发酵液中组氨酸含量。

技术研发人员:宁健飞,刘哲,袁艺
受保护的技术使用者:无锡晶海氨基酸股份有限公司
技术研发日:
技术公布日:2024/3/5
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