一种利用HPLC测定恩格列净手性异构体杂质的方法与流程

本发明属于药物分析，具体涉及一种利用hplc测定恩格列净手性异构体杂质的方法。

背景技术：

1、糖尿病是一种以高血糖为特征的代谢性疾病。高血糖则是由于胰岛素分泌缺陷或其生物作用受损，或两者兼有引起。长期存在高血糖，将导致各种组织，特别是眼、肾、心脏、血管、神经的慢性损害、功能障碍。

2、恩格列净为新一代钠依赖性葡萄糖转运蛋白2(sglt2)抑制剂，是非胰岛素依赖的新型降糖药物。临床已证实恩格列净除了能降低血糖之外，还能减轻体重、减少尿蛋白排泄，及降低糖尿病患者的心血管病死亡率。

3、恩格列净的化学结构如下：

4、

5、其化学名为：(1s)-1,5-脱水-1-(4-氯-3-{4-[(3s)-四氢呋喃-3-基氧基]苄基}苯基)-d-葡萄糖醇。

6、恩格列净的结构中含有6个手性中心，其中4个手性中心为物料葡萄糖内酯引入，葡萄糖内酯为天然化合物葡萄糖的衍生物，其手性碳原子的构型相对固定。恩格列净的结构中其它的2个手性中心为合成过程中产生，这2个手性中心会导致此化合物有4种构型存在，其中一种构型为主要成分恩格列净，其它3种构型为恩格列净的反应副产物手性异构体杂质，这些杂质的化学结构如下：恩格列净手性异构体杂质emp-imp-2：

7、杂质emp-imp-3：

8、杂质emp-imp-4：

9、

10、中国专利cn106706769b公开了一种分离测定恩格列净及其光学异构体的方法，其控制了两个恩格列净的光学异构体杂质a(同emp-imp-2)和恩格列净的光学异构体杂质b(同emp-imp-3)，光学异构体杂质a和光学异构体杂质b的化学结构如下：

11、

12、上述专利公开的分析方法，仅控制了两个恩格列净的手性异构体杂质，并不能控制恩格列净手性异构体杂质emp-imp-4。因此，为控制恩格列净原料药和恩格列净片的质量，亟需建立一种能够快速分离测定恩格列净的三个手性异构体杂质的方法。

技术实现思路

1、针对上述技术问题，本发明的目的在于提供一种利用hplc测定恩格列净手性异构体杂质的方法，解决现有技术不能有效控制恩格列净原料药和片剂中手性异构体杂质含量的问题。

2、为实现上述目的，本发明通过如下技术方案实现：

3、一种利用hplc测定恩格列净手性异构体杂质的方法，该方法包括以硅胶表面共价键合纤维素-三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)为填料的手性柱为色谱柱，以低级烷基醇与正庚烷或正己烷的混合溶液为流动相，进行等度洗脱，以紫外检测器进行检测。

4、优选的，色谱柱的柱温为30℃～40℃，进一步优选为35℃，紫外检测波长为225nm。

5、优选的，流动相的流速为0.8～1.2ml/min，进一步优选为1.0ml/min。

6、优选的，流动相为乙醇、甲醇与正庚烷的混合溶液。

7、优选的，乙醇、甲醇和正庚烷的体积比为12：8：80。

8、优选的，恩格列净手性异构体杂质为emp-imp-2：

9、emp-imp-3：

10、emp-imp-4：

11、

12、优选的，本发明的分析分离方法进一步包括以下步骤：

13、(1)取恩格列净原料药或其药物组合物，用稀释剂完全溶解并稀释，配制成供试品溶液；

14、(2)以硅胶表面共价键合纤维素-三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)为填料的手性柱为色谱柱，以低级烷基醇与正庚烷或正己烷的混合溶液为流动相，等度洗脱；

15、(3)取供试品溶液注入高效液相色谱仪，完成恩格列净手性异构体杂质的测定。

16、优选的，步骤(1)中，稀释剂为乙醇和甲醇的混合液，乙醇和甲醇的体积比优选为3:2。

17、优选的，步骤(1)中，供试品溶液的浓度为0.5～2.0mg/ml。

18、优选的，步骤(3)中，供试品溶液的进样量为5～10μl。

19、本发明的有益效果是：

20、本发明以硅胶表面共价键合纤维素-三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)为填料的手性柱为色谱柱，以低级烷基醇与正庚烷或正己烷的混合溶液为流动相，进行等度洗脱，以紫外检测器进行检测。采用该方法可以快速分离测定恩格列净的三个手性异构体杂质，有效控制恩格列净原料药和恩格列净片的质量。该检测方法专属性强、精密度高、准确性强、耐受性好，操作方便，可有效控制药品质量，确保上市药物的有效性和用药安全性。

技术特征：

1.一种利用hplc测定恩格列净手性异构体杂质的方法，其特征在于，包括以硅胶表面共价键合纤维素-三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)为填料的手性柱为色谱柱，以低级烷基醇与正庚烷或正己烷的混合溶液为流动相，进行等度洗脱，以紫外检测器进行检测。

2.根据权利要求1所述的利用hplc测定恩格列净手性异构体杂质的方法，其特征在于，所述色谱柱的柱温为30℃～40℃，紫外检测波长为225nm。

3.根据权利要求1所述的利用hplc测定恩格列净手性异构体杂质的方法，其特征在于，所述流动相的流速为0.8～1.2ml/min。

4.根据权利要求1所述的利用hplc测定恩格列净手性异构体杂质的方法，其特征在于，所述流动相为乙醇、甲醇与正庚烷的混合溶液。

5.根据权利要求4所述的利用hplc测定恩格列净手性异构体杂质的方法，其特征在于，所述乙醇、甲醇和正庚烷的体积比为12：8：80。

6.根据权利要求1所述的利用hplc测定恩格列净手性异构体杂质的方法，其特征在于，所述恩格列净手性异构体杂质为emp-imp-2：emp-imp-3：emp-imp-4：

7.根据权利要求1所述的利用hplc测定恩格列净手性异构体杂质的方法，其特征在于，包括以下步骤：

8.根据权利要求7所述的利用hplc测定恩格列净手性异构体杂质的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述稀释剂为乙醇和甲醇的混合液。

9.根据权利要求7所述的利用hplc测定恩格列净手性异构体杂质的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述供试品溶液的浓度为0.5～2.0mg/ml。

10.根据权利要求7所述的利用hplc测定恩格列净手性异构体杂质的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述供试品溶液的进样量为5～10μl。

技术总结
本发明公开了一种利用HPLC测定恩格列净手性异构体杂质的方法，该方法包括以硅胶表面共价键合纤维素‑三(3,5‑二氯苯基氨基甲酸酯)为填料的手性柱为色谱柱，以低级烷基醇与正庚烷或正己烷的混合溶液为流动相，进行等度洗脱，以紫外检测器进行检测。本发明提供的方法专属性强、精密度高、准确性强、耐受性好，操作方便，可以测定恩格列净的三个手性异构体杂质，有效控制恩格列净原料药和恩格列净片的质量。

技术研发人员：李柏园,夏艳开,张志海,李晓晖
受保护的技术使用者：湖北省宏源药业科技股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/4/24