一种测定人卷曲螺旋结构领域蛋白2含量的试剂盒的制作方法

本发明涉及疾病检测技术，具体涉及一种测定人卷曲螺旋结构领域蛋白2含量的试剂盒。

背景技术：

1、人卷曲螺旋结构领域蛋白2 (chchd2) ，chchd2蛋白是一种具有一对半胱氨酸-x9-半胱氨酸（cx9c）结构的小分子蛋白，主要位于线粒体的膜间隙，同时它也是一种多功能蛋白，在调节线粒体代谢、合成呼吸链成分和调节细胞凋亡等方面发挥重要作用，chchd2基因突变与帕金森病及路易体痴呆、亨廷顿病、无脑回畸形等神经系统疾病相关，通过深入了解chchd2蛋白的病理生理学作用，可为探索治疗人类神经系统疾病的潜在新靶点提供线索， chchd2属于chchd蛋白家族，到目前为止，该家族已经鉴定出了9个成员：chchd1、chchd2、chchd3、chchd4、chchd5、chchd6、chchd7、chchd8和chchd10，该家族与线粒体结构关系密切，chchd1是线粒体核糖体的重要组成部分，chchd3、chchd6和chchd10参与维持线粒体嵴结构的完整性，chchd4可以影响线粒体呼吸链复合物亚基的表达；还有一些与神经系统疾病相关，其中chchd2是帕金森病(pd)的致病基因，chchd10与肌萎缩侧索硬化(als)和额颞叶痴呆（ftd）有关；chchd2蛋白的功能及作用机制及其与人类神经系统疾病的联系，人卷曲螺旋结构领域蛋白2 (chchd2) 是一种主要定位于线粒体的蛋白质，它在细胞的能量代谢和线粒体功能中起着重要作用，近年来，研究揭示了chchd2在多种疾病和健康状况中的潜在作用，尤其是在神经退行性疾病方面，帕金森氏症: chchd2的突变已经与遗传性帕金森氏症的发生有关。这种突变可能影响线粒体的功能，导致多巴胺能神经元的丧失，这是帕金森氏症的一个特征；其他神经退行性疾病: chchd2可能也与其他神经退行性疾病有关，包括阿尔茨海默症，线粒体功能障碍已经被认为是这些疾病的一个重要因素。

2、目前，检测脑脊液中蛋白标志物多采用酶联免疫吸附（elisa）的方法，此方法存在灵敏度低、线性范围窄、结果不稳定等缺陷，因此，现在需要一种灵敏度高、操作简单、结果稳定、自动化程度高且成本低的测定人卷曲螺旋结构领域蛋白2含量试剂盒。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种测定人卷曲螺旋结构领域蛋白2含量的试剂盒，以解决现有技术中存在灵敏度低、线性范围窄、结果不稳定等缺陷。

2、为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种测定人卷曲螺旋结构领域蛋白2含量的试剂盒，测定人卷曲螺旋结构领域蛋白2含量的试剂盒简称chchd2试剂盒，包括ri试剂，所述ri试剂为样本稀释液；

3、r2试剂，所述r2试剂为碱性磷酸酶标记的chchd2蛋白抗体稀释液；

4、磁分离试剂，所述磁分离试剂为chchd2单克隆抗体包被的磁微粒工作液；

5、校准品液系列，所述校准品液系列为含有不同浓度chchd2蛋白的抗原稀释液；

6、化学发光底物液，所述化学发光底物液为碱性磷酸酶催化发光的底物液。

7、进一步地，所述样本稀释液包括浓度为12-12.3g/l的tris、浓度为1.98-2.0g/l的叠氮钠、浓度为8.0-8.5g /l的氯化钠、摩尔浓度为1m的氯化镁溶液0.9-1.3ml / l、摩尔浓度为0.1m的氯化锌溶液0.9-1.3ml/ l、浓度为10-30g/l的鱼皮明胶、浓度为2-5g / l的牛血清白蛋白和浓度为10-50g/l的新生牛血清，其余组分为去离子水，所述样本稀释液的ph值为7.0-8.5。

8、进一步地，所述r2试剂是由缓冲液一稀释而成浓度为0.2-2.0μg/ml碱性磷酸酶标记的抗chchd2蛋白抗体稀释液，所述缓冲液一为ap conjugate stabilizer，所述缓冲液一的ph值为7.0-8.5。

9、进一步地，所述磁分离试剂是由缓冲液二稀释而成浓度为0.2-2.0mg/ml的chchd2单克隆抗体包被的磁微粒工作液，所述缓冲液二的ph值为7.0-8.5，所述缓冲液二包括浓度为12-12.3g/l的tris、浓度为1.98-2.0g/l的叠氮钠、浓度为8.0-8.5g /l的氯化钠、摩尔浓度为1m的氯化镁溶液0.9-1.3ml / l、摩尔浓度为0.1m的氯化锌溶液0.9-1.3ml/ l、浓度为5.0-5.5g/ l的牛血清白蛋白和浓度为9.8-10.0g/ l的特级羊血清，其余组分为去离子水。

10、进一步地，所述校准品液系列是由缓冲液三稀释而成含有不同浓度chchd2蛋白的抗原稀释液，所述缓冲液三包括浓度为7.0-8.5g/l tris、浓度为16-16.5g/l的氯化钠、浓度为0.01-0.02g/l的四环素盐酸盐、浓度为0.01-0.02g/l的硫酸新霉素、浓度为2.0-2.5g/ l的叠氮钠、浓度为10-15g/l的鱼皮明胶和浓度为1-2g/l的peg20000，其余组分为去离子水。

11、进一步地，所述校准品液系列的浓度范围为0-1000pg/ml，所述缓冲液三的ph值为7.0。

12、进一步地，所述校准品液系列包括分别含有浓度为0pg/ml、10pg/ml、50pg /ml、100pg/ml、500pg/ml、1000pg /mlchchd2蛋白的抗原稀释液。

13、进一步地，所述化学发光底物液是由碱性磷酸酶催化发光底物溶解于缓冲液四中，所述缓冲液四采用ph值为8-10、摩尔浓度为0.5-0.8m的tris-hcl缓冲液，所述碱性磷酸酶催化发光底物为9-(4'-氯苯硫代磷酰氧亚甲基)-10-甲基-9，10-二氢化吖啶二钠盐。

14、与现有技术相比，本发明提供的一种测定人卷曲螺旋结构领域蛋白2含量的试剂盒，具备以下有益效果：本发明采用的双抗体夹心法的反应模式，利用化学发光检测技术与磁微粒免疫分离技术相结合的原理，定量检测人血清样本中的chchd2蛋白含量，确保了检测的灵敏度，本试剂盒与传统试剂盒相比灵敏度高、无污染、特异性强、操作简单，并且对样品的前处理要求低、可检测样本类型广泛、可快速高通量检测大批量样本，便于临床试剂应用。

技术特征：

1.一种测定人卷曲螺旋结构领域蛋白2含量的试剂盒，其特征在于，包括ri试剂，所述ri试剂为样本稀释液；

2.根据权利要求1所述的一种测定人卷曲螺旋结构领域蛋白2含量的试剂盒，其特征在于，所述样本稀释液包括浓度为12-12.3g/l的tris、浓度为1.98-2.0g/l的叠氮钠、浓度为8.0-8.5g /l的氯化钠、摩尔浓度为1m的氯化镁溶液0.9-1.3ml / l、摩尔浓度为0.1m的氯化锌溶液0.9-1.3ml/ l、浓度为10-30g/l的鱼皮明胶、浓度为2-5g / l的牛血清白蛋白和浓度为10-50g/l的新生牛血清，其余组分为去离子水，所述样本稀释液的ph值为7.0-8.5。

3.根据权利要求1所述的一种测定人卷曲螺旋结构领域蛋白2含量的试剂盒，其特征在于，所述r2试剂是由缓冲液一稀释而成浓度为0.2-2.0μg/ml碱性磷酸酶标记的抗chchd2蛋白抗体稀释液，所述缓冲液一为ap conjugate stabilizer，所述缓冲液一的ph值为7.0-8.5。

4.根据权利要求1所述的一种测定人卷曲螺旋结构领域蛋白2含量的试剂盒，其特征在于，所述磁分离试剂是由缓冲液二稀释而成浓度为0.2-2.0mg/ml的chchd2单克隆抗体包被的磁微粒工作液，所述缓冲液二的ph值为7.0-8.5，所述缓冲液二包括浓度为12-12.3g/l的tris、浓度为1.98-2.0g/l的叠氮钠、浓度为8.0-8.5g /l的氯化钠、摩尔浓度为1m的氯化镁溶液0.9-1.3ml / l、摩尔浓度为0.1m的氯化锌溶液0.9-1.3ml/ l、浓度为5.0-5.5g/ l的牛血清白蛋白和浓度为9.8-10.0g/ l的特级羊血清，其余组分为去离子水。

5.根据权利要求1所述的一种测定人卷曲螺旋结构领域蛋白2含量的试剂盒，其特征在于，所述校准品液系列是由缓冲液三稀释而成含有不同浓度chchd2蛋白的抗原稀释液，所述缓冲液三包括浓度为7.0-8.5g/l tris、浓度为16-16.5g/l的氯化钠、浓度为0.01-0.02g/l的四环素盐酸盐、浓度为0.01-0.02g/l的硫酸新霉素、浓度为2.0-2.5g / l的叠氮钠、浓度为10-15g/l的鱼皮明胶和浓度为1-2g/l的peg20000，其余组分为去离子水。

6.根据权利要求5所述的一种测定人卷曲螺旋结构领域蛋白2含量的试剂盒，其特征在于，所述校准品液系列的浓度范围为0-1000pg/ml，所述缓冲液三的ph值为7.0。

7.根据权利要求5所述的一种测定人卷曲螺旋结构领域蛋白2含量的试剂盒，其特征在于，所述校准品液系列包括分别含有浓度为0pg/ml、10pg/ml、50pg /ml、 100pg/ml、500pg/ml、1000pg /mlchchd2蛋白的抗原稀释液。

8.根据权利要求1所述的一种测定人卷曲螺旋结构领域蛋白2含量的试剂盒，其特征在于，所述化学发光底物液是由碱性磷酸酶催化发光底物溶解于缓冲液四中，所述缓冲液四采用ph值为8-10、摩尔浓度为0.5-0.8m的tris-hcl缓冲液，所述碱性磷酸酶催化发光底物为9-(4'-氯苯硫代磷酰氧亚甲基)-10-甲基-9，10-二氢化吖啶二钠盐。

技术总结
本发明公开了一种测定人卷曲螺旋结构领域蛋白2含量的试剂盒，涉及疾病检测领域，包括RI试剂，所述RI试剂为样本稀释液；R2试剂，所述R2试剂为碱性磷酸酶标记的CHCHD2蛋白抗体稀释液；磁分离试剂，所述磁分离试剂为CHCHD2单克隆抗体包被的磁微粒工作液；校准品液系列，所述校准品液系列为含有不同浓度CHCHD2蛋白的抗原稀释液；化学发光底物液，所述化学发光底物液为碱性磷酸酶催化发光的底物液；该测定人卷曲螺旋结构领域蛋白2含量的试剂盒，通过利用化学发光检测技术与磁微粒免疫分离技术相结合的原理，定量检测人血清样本中的CHCHD2蛋白含量，确保了检测的灵敏度。

技术研发人员：赵科,李进,杨俊伟
受保护的技术使用者：北京豪迈生物工程股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15