一种牛奶中DHA的检测方法与流程

本发明属于乳制品检测，具体是一种牛奶中dha的检测方法。

背景技术：

1、气相色谱（gc）是一种分离、分析仪器，经过多年的技术发展，现在已经被广泛的运用在化工、医药、农业、科研等行业中，气相色谱主要是利用物质的沸点、极性及吸附性质的差异来实现混合物的分离：待测样品进入汽化室高温转化为气态后被载气（通常为惰性气体）带入色谱柱。样品进入色谱柱后，化合物因自身分子量、极性疏水性等物理化学特性，和色谱柱中的填充材料相互作用发生分离，依次通过检测器，根据出锋时间和峰面积计算相应脂肪酸浓度。

2、相关技术中dha乳制品dha含量通常低于30mg/100g，而不同牛奶不含dha或其含量低于检测下限，相关技术中dha检测方法，精密度较差，且无法区分原生dha和配方dha牛奶。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种牛奶中dha的检测方法，以解决上述背景技术中提出的问题和缺陷的至少一个方面。

2、具体如下，本发明公开了一种牛奶中dha的检测方法，包括以下步骤：

3、s1、将待测样品酶解处理后，制得酶解液；

4、s2、将所述酶解液、焦性没食子酸、内标品和酸液混合，制得第一混合物；

5、s3、将所述第一混合物采用有机溶剂提取后，收集有机相，浓缩，制得第二混合物；

6、s4、将所述第二混合物和碱的醇溶液混合后皂化，制得第三混合物；

7、s5、将所述第三混合物和三氟化硼甲醇溶液混合后甲酯化，制得第四混合物；

8、s6、将所述第四混合物、氯化钠溶液、正己烷和硫酸钠混合后，制得气相色谱进样品；

9、s7、将所述气相色谱进样品进行气相色谱检测；

10、所述气相色谱检测的温度梯度如下：

11、温度为90℃~100℃，时间为13min~15min；

12、温度从90℃~100℃升高至170℃~180℃，升温时间为7min~8min；

13、温度为170℃~180℃，时间为6min~7min；

14、温度从170℃~180℃升高至190℃~200℃，升温时间为18min~20min；

15、温度为190℃~200℃，时间为18min~20min；

16、温度从190℃~200℃升高至220℃~230℃，升温时间为7min~8min；

17、温度为220℃~230℃，时间为10min~11min。

18、根据本发明检测方法技术方案中的一种技术方案，至少具备如下有益效果：

19、本发明根据所测物质的特性，重新设定检测方法并进行了创新和优化，以提高原生dha牛奶的检测精密度。

20、牛奶中的dha为甘油三脂型，dha等多不饱和脂肪酸更大概率链接在sn-2位，可根据这一特性，在检测方法前处理过程中，加入酶解步骤，以提高牛奶中dha的提取率。

21、甘油三酯为主要天然存在形式，其中dha能结合在甘油三酯的不同位点上，依次被命名为sn-1、sn-2、sn-3；鱼油中有44.79 % ~ 72.99 %的dha位于2号位，藻油则是31.66 %~ 42.09 %，而人乳则是52.63~65.15%，牛乳与人乳接近，且较为稳定，根据这一特性可将牛乳中的甘油三酯dha通过酶解作用形成游离dha，从而增加检测的灵敏性和准确性。

22、牛奶中的脂质经充分酶解酸解，分解为游离脂肪酸，乙醚-石油醚提取，氢氧化钾甲醇皂化，三氟化硼甲醇甲酯化生成脂肪酸甲酯。在样品加入内标品，以提高分析的准确性。

23、根据本发明的一些实施方式，所述酶解处理选用脂肪酶。

24、根据本发明的一些实施方式，所述内标品为c11或c13中的至少一种。

25、根据本发明的一些实施方式，所述内标品为十一碳酸甲酯。

26、根据本发明的一些实施方式，所述酶解的温度为30℃~40℃。

27、根据本发明的一些实施方式，所述酶解的时间为15min~20min。

28、根据本发明的一些实施方式，步骤s1中所述待测样品和脂肪酶的质量比为15~25:1。

29、根据本发明的一些实施方式，所述待测样品和所述焦性没食子酸酸的质量比为15~25:1。

30、根据本发明的一些实施方式，所述待测样品和所述酸液的质量体积比为15g~25g：100ml。

31、根据本发明的一些实施方式，所述酸液为盐酸。

32、根据本发明的一些实施方式，所述盐酸的质量分数为36%~38%。

33、根据本发明的一些实施方式，所述待测样品和所述内标品的质量体积比为1.5g~2.5g：1ml。

34、根据本发明的一些实施方式，所述有机溶剂包括乙醇、乙醚和石油醚中的至少一种。

35、根据本发明的一些实施方式，所述石油醚的馏程为30℃~60℃。

36、根据本发明的一些实施方式，所述有机溶剂提取，包括以下步骤：

37、s01、将所述内标液、乙醇水溶液和乙醚混合后，混匀，制得第一混合物；

38、s02、将第一混合物和石油醚混合，收集第一上清液和第一下层液；

39、s03、将第一下层液和石油醚混合，收集第二上清液和第二下层液；

40、s04、将第二下层液和石油醚混合，收集第三上清液和第三下层液。

41、根据本发明的一些实施方式，所述第一上清液、第二上清液和第三上清液合并后浓缩。

42、根据本发明的一些实施方式，所述浓缩的温度为45℃~50℃。

43、根据本发明的一些实施方式，所述气相色谱检测的进样口温度为200℃~220℃。

44、根据本发明的一些实施方式，所述气相色谱检测的检测器温度为240℃~250℃。

45、根据本发明的一些实施方式，所述碱的醇溶液为氢氧化钠醇溶液。

46、根据本发明的一些实施方式，所述氢氧化钠醇溶液为氢氧化钠甲醇溶液。

47、根据本发明的一些实施方式，所述碱的醇溶液为氢氧化钾醇溶液。

48、根据本发明的一些实施方式，所述氢氧化钾醇溶液为氢氧化钾甲醇溶液。

49、根据本发明的一些实施方式，所述氢氧化钾甲醇溶液的摩尔浓度为0.4mol/l~0.5mol/l。根据本发明的一些实施方式，所述气相色谱检测中脂肪酸含量以质量分数xi计，数值以mg/100g表示；

50、xi的计算方式如下：

51、；

52、fi-脂肪酸甲酯i的响应因子；

53、ai-气相色谱进样品中脂肪酸甲酯i的峰面积；

54、ac11-气相色谱进样品中的内标物十一碳酸甲酯的峰面积；

55、cc11-十一碳酸甘油三酯的浓度，单位为mg/ml；

56、vc11-气相色谱进样品中加入的十一碳酸甘油三酯的体积，单位为ml；

57、fi-脂肪酸甲酯转化为脂肪酸的换算系数；

58、m-样品的质量，单位为g。

59、根据本发明的一些实施方式，所述脂肪酸甲酯i 的响应因子fi按下式计算：

60、；

61、fi-脂肪酸甲酯i的响应因子；

62、csi-混标中个脂肪酸甲酯i的浓度，单位为mg/ml；

63、a11-十一碳酸甲酯标准溶液的峰面积；

64、asi-脂肪酸甲酯的峰面积；

65、c11-混标中十一碳酸甲酯的浓度，单位为mg/ml。

66、根据本发明的一些实施方式，所述气相色谱检测的分流比为35~40:1。

67、根据本发明的一些实施方式，所述甲酯化的温度为60℃~70℃。

68、根据本发明的一些实施方式，所述甲酯化的时间为15min~20min。

69、根据本发明的一些实施方式，所述氯化钠溶液为饱和氯化钠溶液。