液液萃取药物制剂中薄荷油成分的气相色谱检测方法与流程

本发明属于检测，特别涉及一种离心管辅助液液萃取药物制剂中14种薄荷油(薄荷素油)成分的气相色谱快速检测方法。

背景技术：

1、薄荷属辛凉性中药，具有发汗解热、疏肝明目等功效，是治疗流感、头疼、目赤、身热、咽喉等症的良药，且具有抑菌抗炎、抗氧化和杀虫驱虫等广泛的生物活性。现代药理学研究表明，薄荷中的主要有效成分为挥发性油。这些成分具有抗炎、镇痛、抗菌、抗病毒、抗氧化、抗组胺、神经保护、调控血糖、抗辐射、抗肿瘤、保肝等作用。目前感冒类、咽喉肿痛、肠胃疾病等中西药复方制剂常加入薄荷素油，包括大黄碳酸氢钠片、复方熊胆薄荷含片、小儿清热片、止咳宝片、西瓜霜润喉片、金果饮咽喉片、金莲花润喉片、珍黄胶囊、复方草珊瑚片、胆康胶囊、健民咽喉片、桑菊感冒丸、桑菊感冒片、羚羊感冒片、鼻炎康片等含有薄荷(素)油的药物制剂。

2、尽管国内外已经有很多关于薄荷油的分析检测的研究解决，但质量控制主要集中于原料，对其相关的药物制剂的质量控制研究仍较缺乏。例如，大黄碳酸氢钠片的现标准收载于《卫生部药品标准》化学药品及制剂第一册，仅有大黄和钠盐两项定性鉴别及电位滴定法测定碳酸氢钠含量，未对处方中薄荷油进行质量控制。薄菏油在乙醇、氯仿、乙醚、液状石蜡或挥发油中极易溶解，在水中极微溶解。因此，薄荷油在储存的过程中会有不同程度的挥发，通过药物制剂的生产工艺可知，制剂在生产过程中通常制粒后加热烘干等过程，造成了挥发油的损失。因此，建立一个方便、准确的薄荷油成分的含量测定方法有助于含有薄荷油药物制剂的开发、优化和质量控制。

3、现有的制剂分析方法前处理如挥发油测定装置复杂繁琐，不易操作；有报道采用乙醇直接提取，但由于含量低采用样本就非常大，药品基质分散不好，提取很不完全，乙醇的提取效率并不高。常量和微量成分同时测定含量的分析检测是一项被认为非常有难度、具有挑战性的工作。因此如何从药物制剂中有效并完全的提取出薄荷油，例如大黄碳酸氢钠片的现标准收载于《卫生部药品标准》化学药品及制剂第一册，仅有大黄和钠盐两项定性鉴别及电位滴定法测定碳酸氢钠含量，未对处方中薄荷油进行质量控制。因此，需要开发一种简单、高效、准确的前处理方法，对薄荷油成分在药物制剂中的提取和净化过程进行优化。

技术实现思路

1、针对上述现有技术存在的问题，本发明提供了一种离心管辅助液液萃取药物制剂中14种薄荷油(薄荷素油)成分的气相色谱快速检测方法。

2、本发明采取如下技术方案：

3、离心管辅助液液萃取药物制剂中薄荷油成分的气相色谱检测方法，其包括以下步骤：

4、1)、制备基于离心管辅助液液萃取药物制剂中薄荷油上样溶液；

5、2)、制备标准溶液：将薄荷油成分的标准物质配制成混合标准系列工作溶液；

6、3)、将混合标准系列工作溶液注入气相色谱仪，确定薄荷油成分的出峰位置，以峰面积为纵坐标，以浓度为横坐标，制作标准曲线方程；

7、4)、取步骤1)所得的上样溶液按步骤3)测定各薄荷油成分的峰面积及其保留时间，根据各出峰时间以进行定性分析，按照步骤3)所得的标准曲线方程计算，得到待测药物制剂中各薄荷油成分的含量。

8、优选的，步骤1)具体包括以下步骤：

9、1.1、将待测样品充分混匀作为试样；

10、当待测药物制剂品为固体时，取样品5～30片置入50ml塑料或聚四氟乙烯离心管中，加入10～20ml去离子水，充分震荡至完全崩解，作为试样溶液；当待测药物制剂品为半固体时，取样品1～10g置入50ml塑料或聚四氟乙烯离心管中，加入10～20ml去离子水，充分震荡使其完全分散，作为试样溶液；当待测药物制剂为液体时，放置恢复至室温后，取1～10ml置入50ml塑料或聚四氟乙烯离心管中作为试样溶液；

11、1.2、在步骤1.1的离心管中，加入含2～30ml正庚烷、正己烷、氯仿、二氯甲烷、乙醚或乙酸乙酯，250r/min振荡20～60min后，于高速离心机上以5000～10000r/min离心2～20min；

12、1.3、取步骤1.2所得的上清液(正庚烷、正己烷、乙醚、乙酸乙酯)或用注射器吸取下层溶液(氯仿、二氯甲烷)，用0.45μm微孔有机滤膜过滤，滤液置于玻璃进样小瓶作为待测药品的上样溶液。

13、优选的，步骤3)的色谱条件为：程序升温：初始温度40℃，以每分钟10℃的速率升温至110℃，保持5min，然后以每分钟8℃的速率升温至200℃，再以每分钟25℃的速率升温至240℃，保持5min；进样口温度230℃；检测器温度300℃；分流进样，分流比25：1，载气氮气，流速1ml/min。

14、优选的，气相色谱柱为：ffap色谱柱(30m×0.25mm×0.25μm)。

15、优选的，步骤2)中，用庚烷、正己烷、氯仿、二氯甲烷、乙醚或乙酸乙酯作为溶剂，配制系列浓度的混合标准系列工作溶液，每个浓度的混合标准系列工作溶液中，薄荷脑浓度分别为2、4、8、20、40、80、200μg/ml；α-蒎烯、β-蒎烯、柠檬烯、桉油精、3-辛醇、胡薄荷酮、异薄荷醇、α松油醇、胡椒酮浓度相同，分别为0.2、0.4、0.8、2、4、8、20μg/ml；(-)薄荷酮浓度分别为0.6、1.2、2.4、6、12、24、60μg/ml；(+)薄荷酮、乙酸薄荷酯、新薄荷醇浓度相同，分别为0.4、0.8、1.6、4、8、16、40μg/ml。

16、优选的，十四种qacs：α-蒎烯、β-蒎烯、柠檬烯、桉油精、3-辛醇、(-)薄荷酮、(+)薄荷酮、乙酸薄荷酯、新薄荷醇、胡薄荷酮、薄荷脑、异薄荷醇、α松油醇、胡椒酮。

17、本发明建立了离心管辅助液液萃取前处理的气相色谱法测定药物制剂中薄荷油十四种成分的含量方法，本发明方法简单且准确，可操作性强，样品用量小，分析时间短，是一种药品中薄荷油成分含量分析的有效手段，有助于薄荷油药物制剂的开发、优化和质量控制。

技术特征：

1.液液萃取药物制剂中薄荷油成分的气相色谱检测方法，其特征在于包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)具体包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤1.1中，当待测药物制剂品为固体时，取样品置入塑料或聚四氟乙烯离心管中，加入去离子水，充分震荡至完全崩解，作为试样溶液；当待测药物制剂品为半固体时，取样品置入塑料或聚四氟乙烯离心管中，加入去离子水，充分震荡使其完全分散，作为试样溶液；当待测药物制剂为液体时，放置恢复至室温后，取置入塑料或聚四氟乙烯离心管中作为试样溶液。

4.根据权利要求1～3任一项所述的方法，其特征在于：步骤3)的色谱条件为：程序升温：初始温度40℃，以每分钟10℃的速率升温至110℃，保持5min，然后以每分钟8℃的速率升温至200℃，再以每分钟25℃的速率升温至240℃，保持5min；进样口温度230℃；检测器温度300℃；分流进样，分流比25：1，载气氮气，流速1ml/min。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，气相色谱柱为：ffap色谱柱。

6.根据权利要求1～3任一项所述的方法，其特征在于，步骤2)中，用庚烷、正己烷、氯仿、二氯甲烷、乙醚或乙酸乙酯作为溶剂，配制系列浓度的混合标准系列工作溶液，每个浓度的混合标准系列工作溶液中，薄荷脑浓度分别为2、4、8、20、40、80、200μg/ml；α-蒎烯、β-蒎烯、柠檬烯、桉油精、3-辛醇、胡薄荷酮、异薄荷醇、α松油醇、胡椒酮浓度相同，分别为0.2、0.4、0.8、2、4、8、20μg/ml；(-)薄荷酮浓度分别为0.6、1.2、2.4、6、12、24、60μg/ml；(+)薄荷酮、乙酸薄荷酯、新薄荷醇浓度相同，分别为0.4、0.8、1.6、4、8、16、40μg/ml。

技术总结
本发明公开了离心管辅助液液萃取药物制剂中薄荷油成分的气相色谱检测方法，其包括以下步骤：1)、制备基于离心管辅助液液萃取药物制剂中薄荷油上样溶液；2)、制备标准溶液：将薄荷油成分的标准物质配制成混合标准系列工作溶液；3)、将混合标准系列工作溶液注入气相色谱仪，确定薄荷油成分的出峰位置，以峰面积为纵坐标，以浓度为横坐标，制作标准曲线方程；4)、取步骤1)所得的上样溶液按步骤3)测定各薄荷油成分的峰面积及其保留时间，根据各出峰时间以进行定性分析，按照步骤3)所得的标准曲线方程计算，得到待测药物制剂中各薄荷油成分的含量。

技术研发人员：高丽琼,沈国芳,杨直,林丽琴
受保护的技术使用者：杭州市食品药品检验研究院
技术研发日：
技术公布日：2024/5/27