一种共轭亚油酸的超临界流体色谱快速检测方法与流程

本发明涉及分析检测，具体涉及一种共轭亚油酸的超临界流体色谱快速检测方法。

背景技术：

1、共轭亚油酸(cla)是亚油酸立体异构体和位置异构体混合物的总称，其共轭双键以顺式或反式结构存在。cla广泛分布在许多食品和保健品中，天然的cla主要存在于反刍动物牛和羊的肉制品和奶制品中，在植物和海洋生物中含量极少。

2、

3、研究发现cla是一种无毒、无遗传突变的可食用性油脂，被誉为“21世纪绿色营养保健品”。共轭亚油酸是人和动物不可或缺的脂肪酸之一，却是自身无法合成一种具有显著药理作用和营养价值的物质，对人体健康大有益处。大量文献证明，共轭亚油酸具有一定抗肿瘤、抗氧化、抗突变、抗菌、降低人体胆固醇、抗动脉粥样硬化、提高免疫力、提高骨骼密度、防治糖尿病及促进生长等生理功能。近年来，又有一些临床研究报告证明，共轭亚油酸进入机体后能够增加体能消耗，因此在体重控制方面可以有效降低体内脂肪沉积。

4、cla被广泛应用于食品、保健品、医药等领域，因此建立可靠、方便易行的分析检测方法的需求日渐迫切。目前，针对乳及乳制品中cla含量测定的现行方法是由2008年8月份由国家相关部门发布的气相色谱法，样品前处理过程复杂，步骤繁琐不适用于大批量样品的检测，气相色谱法检测单针时长为51min，限制了该方法在实际生产中的大规模应用。因此，提供一种共轭亚油酸的简单快速准确检测方法具有重要的意义。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的在于提供一种共轭亚油酸的超临界流体色谱快速检测方法。本发明提供的检测方法，前处理方法，工艺简单，操作简单，超临界流体色谱的检测速度快。

2、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

3、本发明提供了一种共轭亚油酸的超临界流体色谱快速检测方法，包括以下步骤，包括以下步骤：

4、将待测样品、浓硫酸和甲醇溶液混合，进行甲酯化处理，然后利用饱和烷烃进行萃取，得到的饱和烷烃层为待测样品液；

5、将所述待测样品液进行超临界流体色谱检测，得到共轭亚油酸的检测结果；

6、所述超临界流体色谱检测的流动相体系包括流动相a和流动相b，所述流动相a包括超临界流体co2，所述流动相b包括饱和烷烃；色谱柱的固定相包括硅胶表面涂敷或键合纤维素-三(4-甲基苯甲酸酯)或硅胶表面涂敷或键合纤维素-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)。

7、优选的，所述待测样品的质量与浓硫酸和甲醇的总体积之比为300～500mg：15～20ml；

8、所述浓硫酸的质量分数为95～98％；

9、所述浓硫酸在甲醇中的浓度为0.8～1.2mol/l。

10、优选的，所述甲酯化处理的温度为50～60℃，时间为20～25min。

11、优选的，所述待测样品的质量与饱和烷烃的体积之比为300～500mg：15～30ml；

12、所述饱和烷烃包括正己烷或正庚烷。

13、优选的，所述待测样品液的浓度为5～20mg/ml。

14、优选的，所述流动相b的流速为流动相a和流动相b总流速的1～10％所述饱和烷烃的极性范围为0.01～0.2；

15、所述超临界流体co2的纯度≥99.99％，密度为890～950kg/m3。

16、优选的，所述超临界流体色谱快速检测的洗脱程序为0～6min，所述流动相a的体积分数为90～99％。

17、优选的，所述超临界流体色谱检测的条件包括：柱温为30～40℃，检测波长为233～254nm，背压为10～15mpa，流动相体系的流速为1～3ml/min；进样量为1～5μl。

18、优选的，所述超临界流体色谱检测使用的超临界流体色谱仪连接有co2气源，所述的co2气源的压力为725～950psi。

19、优选的，所述超临界流体色谱仪平衡15～30min后运行待测样品液。

20、本发明首次提供了一种基于超临界流体色谱技术的共轭亚油酸快速检测方法。本发明将待测样品、浓硫酸和甲醇溶液混合，进行甲酯化处理后利用饱和烷烃萃取即可得到待测样品液。本发明采用的前处理方法，步骤简单，操作简单，能够显著提高亚油酸中共轭亚油酸的检测效率，成本低。本发明以超临界态的二氧化碳作为流动相a，以饱和烷烃作为流动相b，以硅胶表面涂敷或键合纤维素-三(4-甲基苯甲酸酯)或硅胶表面涂敷或键合纤维素-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)作为固定相，基于共轭亚油酸中双键在碳链上多种位置排列方式的不同，在π-π、偶极-偶极、氢键和非手性作用(如空间效应)等作用力的影响下，共轭亚油酸中的异构体实现快速有效分离。与现有的气相色谱法、银离子色谱法、毛细管电泳技术、紫外分光光度法以及红外光谱法相比较，本发明提供的检测方法，对待测样品无破坏性、无需复杂的前处理过程，操作简便快速，适用于大批量的食品、保健品和药品中共轭亚油酸的检测，应用前景广阔，有望成为气相色谱的替代方法，对大规模测试采集样品和药物前期开发工艺具有重要意义。

技术特征：

1.一种共轭亚油酸的超临界流体色谱快速检测方法，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的超临界流体色谱快速检测方法，其特征在于，所述待测样品的质量与浓硫酸和甲醇的总体积之比为300～500mg：15～20ml；

3.根据权利要求1或2所述的超临界流体色谱快速检测方法，其特征在于，所述甲酯化处理的温度为50～60℃，时间为20～25min。

4.根据权利要求1所述的超临界流体色谱快速检测方法，其特征在于，所述待测样品的质量与饱和烷烃的体积之比为300～500mg：15～30ml；

5.根据权利要求1或4所述的超临界流体色谱快速检测方法，其特征在于，所述待测样品液的浓度为5～20mg/ml。

6.根据权利要求1所述的超临界流体色谱快速检测方法，其特征在于，所述超临界流体co2的纯度≥99.99％，密度为890～950kg/m3。

7.根据权利要求1或6所述的超临界流体色谱快速检测方法，其特征在于，所述超临界流体色谱快速检测的洗脱程序为0～6min，所述流动相a的体积分数为90～99％。

8.根据权利要求1所述的超临界流体色谱快速检测方法，其特征在于，所述超临界流体色谱检测的条件包括：柱温为30～40℃，检测波长为233～254nm，背压为10～15mpa，流动相体系的流速为1～3ml/min；进样量为1～5μl。

9.根据权利要求1、6或8所述的超临界流体色谱快速检测方法，其特征在于，所述超临界流体色谱检测使用的超临界流体色谱仪连接有co2气源，所述的co2气源的压力为725～950psi。

10.根据权利要求9所述的超临界流体色谱快速检测方法，其特征在于，所述超临界流体色谱仪平衡15～30min后运行待测样品液。

技术总结
本发明提供了一种共轭亚油酸的超临界流体色谱快速检测方法，涉及分析检测技术领域。本发明将待测样品、浓硫酸和甲醇溶液混合，进行甲酯化处理后利用饱和烷烃萃取，将所得待测样品液进行超临界流体色谱检测。本发明提供的检测方法，前处理方法，步骤简单，操作简单，能够显著提高亚油酸中共轭亚油酸的检测效率，成本低。本发明以超临界态的二氧化碳‑饱和烷烃作为流动相，以硅胶表面涂敷或键合纤维素‑三(4‑甲基苯甲酸酯)或硅胶表面涂敷或键合纤维素‑三(3,5‑二甲基苯基氨基甲酸酯)作为固定相，在π‑π、偶极‑偶极、氢键和非手性作用等作用力的影响下，共轭亚油酸中的异构体实现快速有效分离，检测精度高，操作简便快速、应用范围广。

技术研发人员：祁威,李枝芳,王路,金海蛟
受保护的技术使用者：江苏汉邦科技股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/3/11