一种改良的凝块纤溶波形的检测试剂及检测方法和应用与流程

本发明涉及凝血检测，具体而言，涉及一种改良的凝块纤溶波形的检测试剂及检测方法和应用。

背景技术：

1、目前全自动凝血分析仪是开展凝血常规检测的常用仪器，能够检测凝血酶原时间(pt)、活化部分凝血活酶时间(aptt)、凝血酶时间(tt)、纤维蛋白原(fib))。较易获得的纤溶指标仅有d-二聚体和纤维蛋白(原)降解产物，而对于其他纤溶指标例如纤溶酶原(plg)、纤溶酶-抗纤溶酶复合物(pic)、纤溶酶原激活物抑制物-1(pai-1)、血栓弹力图ly30等，则难以获得。

2、目前医院使用的光学法全自动凝血分析仪，能够从常规凝血检测项目中获得反应凝固曲线，从凝固曲线中即可获得凝血阶段的信息，但是却无法获得纤维蛋白溶解(简称纤溶)阶段的相关信息。因此如何获得一种简便、敏感，易行且不需要其他特殊仪器的检测试剂和检测方法，能够获得纤溶的相关信息，是目前亟需解决的问题。

3、有鉴于此，特提出本申请。

技术实现思路

1、本发明所要解决的技术问题是从目前的常规凝血检测项目中无法获得纤维蛋白溶解的相关信息，目的在于提供一种改良的凝块纤溶波形的检测试剂及检测方法和应用，在不需要其他特殊试剂和仪器的前提下，通过在常规aptt检测项目的检测试剂氯化钙中加入纤溶酶原激活剂，能够获得凝块-纤溶波形的全局性试验，从而将纤维蛋白凝固曲线和纤维蛋白溶解曲线进行了有效的结合，能够灵敏地同时监测纤维蛋白凝块形成和纤溶状态，提供了一种简单、快速、敏感的、易于使用的判断新方法，能够帮助临床评估凝血和纤溶状态。

2、本发明通过下述技术方案实现：

3、一方面，本发明提供一种改良的凝块纤溶波形的检测试剂，包括用于检测活化部分凝血活酶时间的检测试剂氯化钙和纤溶酶原激活剂。

4、在某一具体实施方式中，所述纤溶酶原激活剂为非特异性纤溶酶原激活剂或特异性纤溶酶原激活剂，所述非特异性纤溶酶原激活剂为尿激酶或链激酶，所述特异性纤溶酶原激活剂为阿替普酶、尿激酶原、瑞替普酶或替奈普酶。

5、在某一具体实施方式中，所述纤溶酶原激活剂采用阿替普酶，阿替普酶的浓度为1.00～5.00μg/ml。

6、本发明在不需要其他特殊试剂和仪器的前提下，通过在常规aptt检测项目的检测试剂氯化钙中加入纤溶酶原激活剂，能够获得凝块-纤溶波形的全局性试验，从而将纤维蛋白凝固曲线和纤维蛋白溶解曲线进行了有效的结合，能够灵敏地同时监测纤维蛋白凝块形成和纤溶状态。

7、第二方面，本发明提供一种获得凝块纤溶波形的检测方法，包括如下步骤：

8、s1，将全自动凝血分析仪设置为活化部分凝血活酶时间(aptt)检测模式；

9、s2，向待检标本中加入aptt激活剂，进行温育；

10、s3，加入上述检测试剂氯化钙和阿替普酶的混合物进行反应；

11、s4，分析仪在检测波长为671nm监测下，记录检测时间300～1800s内的反应曲线；

12、s5，反应结束后，获得凝块纤溶波形图。

13、在某一具体实施方式中，反应体系为：待检标本50μl+aptt激活剂50μl+阿替普酶和氯化钙混合物50μl。

14、在某一具体实施方式中，步骤s2中温育的条件为：37℃温育180s。

15、在某一具体实施方式中，步骤s3中阿替普酶的浓度为1.67μg/ml或2.00μg/ml。

16、在某一具体实施方式中，步骤s4中检测时间为600s。

17、本发明通过添加最佳分析浓度的阿替普酶(并未影响凝血活化阶段)，并监测适宜时间内的凝固曲线，将只能反映凝血活化阶段的纤维蛋白凝固曲线转变成既能反映纤维蛋白凝固(凝块)又能反映纤维蛋白溶解(纤溶)阶段的凝块纤溶波形。

18、第三方面，本发明提供一种凝血和纤溶状态的评估方法，包括如下步骤：

19、s1，采集多例无出血性疾病和血栓性疾病的正常健康人的血液；

20、s2，利用上述检测方法，获得多个凝块纤溶波形图；

21、s3，获取每个凝块纤溶波形图上的5个参数：预凝固时间(ct)、纤维蛋白溶解滞后时间(flt)、最大凝固速度(|min1|)、最大纤溶速度(|fl-min1|)、纤维蛋白完全溶解时间(fdt)；

22、s4，整合所有凝块纤溶波形图的5个参数，分别获得5个参数各自的评估范围值；

23、s5，采集待评估患者的血液，利用上述检测方法，获得待评估患者的凝块纤溶波形图，并获取凝块纤溶波形图上的5个参数，将5个参数分别与步骤s4获得的参数评估范围进行对比；

24、s6，若数值落入评估范围值内，表示患者不存在凝血和/或纤溶异常，若数值在评估范围值之外，表示患者存在凝血和/或纤溶异常，具有出血或血栓风险。

25、第四方面，本发明提供一种获得凝块纤溶波形的检测方法的应用，其特征在于，用于评估患者出血性疾病和血栓性疾病的风险。

26、本发明通过从凝块纤溶波形中获得的5个参数预凝固时间(ct)、纤维蛋白溶解滞后时间(flt)、最大凝固速度(|min1|)、最大纤溶速度(|fl-min1|)、纤维蛋白完全溶解时间(fdt)，能够用于评估出血性疾病和血栓性疾病的凝血和纤溶状态，提供了一种简单、快速、敏感的、易于使用的判断新方法，能够帮助临床评估凝血和纤溶状态。

27、本发明与现有技术相比，具有如下的优点和增益效果：

28、1、本发明实施例提供的一种改良的凝块纤溶波形的检测试剂及检测方法和应用，在不需要其他特殊试剂和仪器的前提下，通过在常规aptt检测项目的检测试剂氯化钙中加入纤溶酶原激活剂，能够获得凝块-纤溶波形的全局性试验，从而将纤维蛋白凝固曲线和纤维蛋白溶解曲线进行了有效的结合，能够灵敏地同时监测纤维蛋白凝块形成和纤溶状态；

29、2、本发明实施例提供的一种改良的凝块纤溶波形的检测试剂及检测方法和应用，通过添加最佳分析浓度的阿替普酶(并未影响凝血活化阶段)，并监测适宜时间内的凝固曲线，将只能反映凝血活化阶段的纤维蛋白凝固曲线转变成既能反映纤维蛋白凝固(凝块)又能反映纤维蛋白溶解(纤溶)阶段的凝块纤溶波形；

30、3、本发明实施例提供的一种改良的凝块纤溶波形的检测试剂及检测方法和应用，通过从凝块纤溶波形中获得的5个参数预凝固时间(ct)、纤维蛋白溶解滞后时间(flt)、最大凝固速度(|min1|)、最大纤溶速度(|fl-min1|)、纤维蛋白完全溶解时间(fdt)，能够用于评估出血性疾病和血栓性疾病的凝血和纤溶状态，提供了一种简单、快速、敏感的、易于使用的判断新方法，能够帮助临床评估凝血和纤溶状态。

技术特征：

1.一种改良的凝块纤溶波形的检测试剂，其特征在于，包括用于检测活化部分凝血活酶时间的检测试剂氯化钙和纤溶酶原激活剂。

2.根据权利要求1所述的一种改良的凝块纤溶波形的检测试剂，其特征在于，所述纤溶酶原激活剂为非特异性纤溶酶原激活剂或特异性纤溶酶原激活剂，所述非特异性纤溶酶原激活剂为尿激酶或链激酶，所述特异性纤溶酶原激活剂为阿替普酶、尿激酶原、瑞替普酶或替奈普酶。

3.根据权利要求2所述的一种改良的凝块纤溶波形的检测试剂，其特征在于，所述纤溶酶原激活剂采用阿替普酶，阿替普酶的浓度为1.00～5.00μg/ml。

4.一种获得凝块纤溶波形的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

5.根据权利要求4所述的一种获得凝块纤溶波形的检测方法，其特征在于，反应体系为：待检标本50μl+aptt激活剂50μl+阿替普酶和氯化钙混合物50μl。

6.根据权利要求4所述的一种获得凝块纤溶波形的检测方法，其特征在于，步骤s2中温育的条件为：37℃温育180s。

7.根据权利要求4所述的一种获得凝块纤溶波形的检测方法，其特征在于，步骤s3中阿替普酶的浓度为1.67μg/ml或2.00μg/ml。

8.根据权利要求4所述的一种获得凝块纤溶波形的检测方法，其特征在于，步骤s4中检测时间为600s。

9.一种凝血和纤溶状态的评估方法，其特征在于，包括如下步骤：

10.权利要求4所述一种获得凝块纤溶波形的检测方法的应用，其特征在于，用于评估患者出血性疾病和血栓性疾病的风险。

技术总结
本发明公开了一种改良的凝块纤溶波形的检测试剂及检测方法和应用，检测试剂包括用于检测活化部分凝血活酶时间的检测试剂氯化钙和纤溶酶原激活剂，所述纤溶酶原激活剂采用阿替普酶，所述阿替普酶的浓度为1.0～5.0μg/mL。本发明在不需要其他特殊试剂和仪器的前提下，通过在常规APTT检测项目的检测试剂氯化钙中加入纤溶酶原激活剂，能够获得凝块‑纤溶波形的全局性试验，从而将纤维蛋白凝固曲线和纤维蛋白溶解曲线进行了有效的结合，能够灵敏地同时监测纤维蛋白凝块形成和纤溶状态，提供了一种简单、快速、敏感的、易于使用的判断新方法，能够帮助临床评估凝血和纤溶状态。

技术研发人员：白劲松
受保护的技术使用者：成都市新都区中医医院
技术研发日：
技术公布日：2024/3/24