一种中药制剂中毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮的检测方法及其应用与流程

本发明属于药物成分分析，具体涉及一种中药制剂中毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮的检测方法及其应用，尤其涉及一种中药制剂中毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮的检测方法及其应用。

背景技术：

1、黄芪注射液是近几年开发的中药制剂，具有益气养元、扶正祛邪、养心通脉、健脾利湿之功，主要用于治疗心气虚损、血脉痰之病毒性心肌炎、心功能不全及脾虚湿困之肝炎。

2、中药注射液质量控制方法的深入研究对于保证其有效性和临床使用安全性具有重要意义。黄芪注射液含有多种化学成分，但目前的标准只规定了黄芪甲苷的鉴别及含量测定方法。而对于黄芪注射液而言，毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮也是重要的成分，其对于黄芪注射液的质量控制同样存在重要意义，也需进行准确地检测。然而现有技术中并不存在同时检测黄芪注射液中上述成分的的方法，需要对每个组分进行单独检测，整体过程费时费力。

3、cn104181186b公开了一种黄芪注射液的1h-nmr指纹图谱的构建方法，属于中药注射液质量控制领域。该发明采用核磁共振技术获得黄芪注射液的指纹图谱及其特征峰，能同时表征黄芪注射液中初级和次级代谢产物共25种化学成分，准确反映黄芪注射液的整体质量特征，可用于黄芪注射液产品的质量控制，保证临床用药的安全有效。

4、cn104698021b公开了一种黄芪注射液初生代谢成分的含量检测方法，基于定量核磁共振技术和解卷积(gsd)处理方法对黄芪注射液中的多种初生代谢成分同时进行含量测定，具体步骤为：(1)黄芪注射液样品溶液的制备；(2)1h-nmr指纹图谱的测定；(3)质子信号峰的定性鉴别；(4)1h-nmr多成分的含量测定；(5)1h-nmr谱的处理和解卷积参数设置；所述方法具有简便易行、稳定性好、精密度高、重现性好、专属性强等特点，在全面检测黄芪注射液质量方面具有广阔的应用前景。

5、然而上述方法均未涉及对毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮三种成分的同时检测。因此，如何提供一种能够准确有效同时检测黄芪注射液中毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮三种成分的方法，成为了亟待解决的问题。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种中药制剂中毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮的检测方法及其应用，尤其提供一种中药制剂中毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮的检测方法及其应用。本发明提供的检测方法能够同时有效检测中药制剂中的毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮三种成分，具有操作简单、分离度高、准确度高的优点。

2、为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：

3、一方面，本发明提供了一种中药制剂中毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮的检测方法，所述检测方法包括以下步骤：

4、(1)将待测中药制剂过滤，取续滤液，即得供试品溶液；取毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮对照品与溶剂混合，得到混合对照品溶液；

5、(2)将供试品溶液和混合对照品溶液分别进行液相色谱检测，根据检测结果计算待测中药制剂中毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮的含量。

6、上述特定检测方法能够同时有效检测中药制剂中的毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮三种成分，具有操作简单、分离度高、准确度高的优点。

7、优选地，所述中药制剂为黄芪注射液。

8、优选地，步骤(1)所述溶剂选自甲醇。

9、优选地，步骤(1)所述混合对照品溶液中，毛蕊异黄酮葡萄糖苷的浓度为0.25-0.35mg/ml，芒柄花苷的浓度为0.1-0.3mg/ml，毛蕊异黄酮的浓度为0.01-0.03mg/ml。

10、其中，毛蕊异黄酮葡萄糖苷的浓度可以是0.25mg/ml、0.26mg/ml、0.27mg/ml、0.28mg/ml、0.29mg/ml、0.3mg/ml、0.31mg/ml、0.32mg/ml、0.33mg/ml、0.34mg/ml或0.35mg/ml等，芒柄花苷的浓度可以是0.1mg/ml、0.15mg/ml、0.2mg/ml、0.25mg/ml或0.3mg/ml等，毛蕊异黄酮的浓度可以是0.01mg/ml、0.015mg/ml、0.02mg/ml、0.025mg/ml或0.03mg/ml等，但不限于以上所列举的数值，上述数值范围内其他未列举的数值同样适用。

11、优选地，步骤(2)所述液相色谱检测中，色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶。

12、优选地，步骤(2)所述液相色谱检测中，流动相包括流动相a和流动相b，所述流动相a为乙腈，所述流动相b为水。

13、优选地，步骤(2)所述液相色谱检测采用梯度洗脱，所述梯度洗脱的具体流程如下：

14、第0-20min，流动相a的体积分数由13-17％匀速变化至28-32％，其余为流动相b；

15、第20-40min，流动相a的体积分数为28-32％，其余为流动相b；

16、第40-40.01min，流动相a的体积分数由28-32％匀速变化至13-17％，其余为流动相b；

17、第40.01-50min，流动相a的体积分数为13-17％，其余为流动相b。

18、优选地，步骤(2)所述液相色谱检测中，流动相的流速为0.8-1.2ml/min，例如0.8ml/min、0.9ml/min、1ml/min、1.1ml/min或1.2ml/min等，但不限于以上所列举的数值，上述数值范围内其他未列举的数值同样适用。

19、优选地，步骤(2)所述液相色谱检测中，柱温为28-32℃，例如28℃、29℃、30℃、31℃或32℃等，但不限于以上所列举的数值，上述数值范围内其他未列举的数值同样适用。

20、上述方法通过采用特定填充剂、流动相，并控制洗脱程序和流速、柱温等参数，进一步提高了检测的分离度和准确度。

21、优选地，步骤(2)所述液相色谱检测中，进样量为8-12μl，例如8μl、9μl、10μl、11μl或12μl等，但不限于以上所列举的数值，上述数值范围内其他未列举的数值同样适用。

22、另一方面，本发明还提供了如上所述的检测方法在中药制剂质量控制中的应用。

23、相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：

24、本发明提供了一种中药制剂中毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮的检测方法，其能够同时有效检测中药制剂中的毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮三种成分，具有操作简单、分离度高、准确度高的优点；并通过采用特定填充剂、流动相，并控制洗脱程序和流速、柱温等参数，进一步提高了检测的分离度和准确度。

技术特征：

1.一种中药制剂中毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)所述溶剂选自甲醇。

3.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)所述混合对照品溶液中，毛蕊异黄酮葡萄糖苷的浓度为0.25-0.35mg/ml，芒柄花苷的浓度为0.1-0.3mg/ml，毛蕊异黄酮的浓度为0.01-0.03mg/ml。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的检测方法，其特征在于，步骤(2)所述液相色谱检测中，色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的检测方法，其特征在于，步骤(2)所述液相色谱检测中，流动相包括流动相a和流动相b，所述流动相a为乙腈，所述流动相b为水。

6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，步骤(2)所述液相色谱检测采用梯度洗脱，所述梯度洗脱的具体流程如下：

7.根据权利要求1-6中任一项所述的检测方法，其特征在于，步骤(2)所述液相色谱检测中，流动相的流速为0.8-1.2ml/min。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的检测方法，其特征在于，步骤(2)所述液相色谱检测中，柱温为28-32℃。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的检测方法，其特征在于，步骤(2)所述液相色谱检测中，进样量为8-12μl。

10.一种根据权利要求1-9中任一项所述的检测方法在中药制剂质量控制中的应用。

技术总结
本发明提供了一种中药制剂中毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮的检测方法及其应用，所述检测方法包括以下步骤：(1)将待测中药制剂过滤，取续滤液，即得供试品溶液；取毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮对照品与溶剂混合，得到混合对照品溶液；(2)将供试品溶液和混合对照品溶液分别进行液相色谱检测，根据检测结果计算待测中药制剂中毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮的含量。本发明提供的检测方法能够同时有效检测中药制剂中的毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮三种成分，具有操作简单、分离度高、准确度高的优点。

技术研发人员：王锋
受保护的技术使用者：朗致集团江西医药有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/3/21