一种板青颗粒的质量判定方法与流程

本发明属于兽药质量控制领域，具体涉及一种板青颗粒的质量判定方法。

背景技术：

1、板青颗粒收载于《中国兽药典》2020年版二部，由板蓝根、大青叶两味中药煎煮浓缩后,与适量葡萄糖、糊精混合制粒而成。方中板蓝根、大青叶均可清热解毒，板蓝根重在凉血利咽，大青叶偏于凉血消斑，二药合用，共奏清热解毒、凉血之功。临床上广泛用于畜禽风热感冒、咽喉肿痛、热病发斑等温热性疾病的防治。

2、板青颗粒是治疗和预防畜禽温热性疾病的常用方剂。兽药生产厂家众多，临床应用广泛，如治疗猪流行性感冒、家禽温和型感冒等，疫苗免疫前添加板青颗粒能够提高抗体效价和群体抗体整齐度。但是缺乏现代药理学方面的研究资料。

3、就单味药材分析，板蓝根化学成分包含核苷类(鸟苷，腺苷，尿苷等)，(r,s)-告伊春等。大青叶化学成分含吲哚生物碱包括靛玉红、靛蓝等，还有核酸合成需要的腺苷、胞苷、尿苷、鸟苷等。

4、板蓝根中主要含量指标(r,s)-告伊春在煎煮过程中受提取次数，浸泡时间和加水量的影响，且影响依次增强。板蓝根提取液中告依春和核苷类成分存在热不稳定性，传统热回流提取时易降解损失，故前期采取减压提取法，以最大限度保护热敏性成分，避免热分解。

5、复方板蓝根颗粒主要有效成分包括：(r,s)-告伊春、核苷(腺苷、尿苷和鸟苷等)、氨基酸(主要是精氨酸)、靛玉红和多糖。复方板蓝根颗粒的制备多用水提醇沉法，而兽药典板青颗粒未提及醇沉。(r,s)-告伊春和核苷(腺苷、尿苷和鸟苷等)成分均为水溶性成分，故对板蓝根大青叶进行水提。醇沉后多糖，靛玉红、靛玉蓝成分溶出度低，故实验室以水提不醇沉为主，辅以做少部分醇沉进行试验比较。

6、目前板青颗粒的质量标准相对滞后,仅有理化显色鉴别及精氨酸的薄层鉴别，专属性不强，无指标性成分的定性鉴别及定量测定；且精氨酸的薄层鉴别方法在实际检验中存在定的问题，很难对板青颗粒质量的优劣进行全面评价,导致市场上的板青颗粒质量参差不齐，也给假劣产品混入提供了可乘之机。

技术实现思路

1、本发明所要解决的技术问题便是针对上述现有技术的不足，提供一种板青颗粒的质量判定方法，检测项目更全面完善，质量控制指标更科学合理，操作更简便，能进一步提升产品质量水平，以确保疗效。

2、本发明所采用的技术方案是：一种板青颗粒的质量判定方法，包括以下步骤：

3、步骤1、准备待检测板青颗粒，如进行精氨酸的鉴别，进入步骤2，如进行核苷类或(r,s)-告伊春的含量测定，进入步骤3；

4、步骤2、通过薄层色谱法进行精氨酸的鉴别，得到鉴别结果，具体如下：

5、制备供试品溶液和对照品溶液；

6、分别精密吸取相同量的供试品溶液和对照品溶液点于同一硅胶g薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水为展开剂，进行展开；

7、取出，热风吹干，喷以茚三酮试液，在105℃加热至斑点显色清晰，如供试品色谱中与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点则判定板青颗粒中含有精氨酸，如供试品色谱中与对照品色谱相应的位置上未显相同颜色的斑点则判定板青颗粒中未含有精氨酸；

8、步骤3、通过液相色谱法对核苷类或(r,s)-告伊春的含量进行测定，得到测定结果，具体如下：

9、制备供试品溶液和对照品溶液；

10、分别精密吸取相同量的供试品溶液和对照品溶液注入液相色谱仪，以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱的填充剂，以甲醇-水为流动相进行洗脱，检测波长为221～265nm，流速为每分钟0.8ml，柱温为30℃，测定，记录色谱图，得到核苷类或(r,s)-告伊春的含量；

11、步骤4、结合步骤2中得到的鉴别结果和步骤3中得到的各指标性成分含量测定结果对板青颗粒质量进行综合性评判。

12、其中一个实施例中，步骤1中，所述的核苷类包括鸟苷、腺苷和尿苷。

13、其中一个实施例中，步骤2中，所述的制备供试品溶液，具体如下：

14、取板青颗粒研磨成粉末，得到板青颗粒粉末；

15、取板青颗粒粉末，加溶剂，超声处理，过滤，取滤液蒸干，得到蒸干物；

16、再次加入溶剂使得到的蒸干物溶解，得到供试品溶液。

17、其中一个实施例中，步骤2中，所述的制备对照品溶液，具体如下：

18、取精氨酸，加溶剂混合，得到对照品溶液。

19、其中一个实施例中，所述对照品溶液的浓度为0.05～0.15mg·ml-1。

20、其中一个实施例中，步骤2中，展开剂正丁醇﹣冰醋酸﹣水的体积比为15:7:7。

21、其中一个实施例中，步骤3中，所述的制备供试品溶液，具体如下：

22、取板青颗粒研成粉末，得到板青颗粒粉末；其中一个实施例中，在得到的板青颗粒粉末中加入溶剂，超声处理，放冷，加溶剂，摇匀，得到供试品溶液。

23、其中一个实施例中，步骤3中，所述的制备对照品溶液，具体如下：

24、取(r,s)-告伊春、腺苷、鸟苷和尿苷，分别加入溶剂制成每1ml含r,s-告依春2.5μg、含腺苷10μg、含鸟苷10μg和含尿苷10μg的溶液，得到对照品溶液。

25、其中一个实施例中，步骤2中和步骤3中，制备供试品溶液和对照品溶液时，溶剂为甲醇或乙醇。

26、其中一个实施例中，步骤3中，所述的色谱柱为柱长为25cm、内径为4.6mm、粒度为5μm的atlantis t3色谱柱或等效色谱柱。

27、本发明的有益效果在于：

28、1、采用薄层色谱鉴别板青颗粒中精氨酸活性成分，且不会出现拖尾位移的情况，样品处理方法简便，分离度好，斑点清晰；高效液相色谱法测定药物中核苷类(鸟苷，腺苷，尿苷等)及(r,s)-告伊春的含量，操作简便，专属性强，重复性好，准确度高。

29、2、本方法检测项目更全面完善，质量控制指标更科学合理，操作更简便，能进一步提升产品质量水平，确保疗效。

技术特征：

1.一种板青颗粒的质量判定方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种板青颗粒的质量判定方法，其特征在于，步骤1中，所述的核苷类包括鸟苷、腺苷和尿苷。

3.根据权利要求1或2所述的一种板青颗粒的质量判定方法，其特征在于，步骤2中，所述的制备供试品溶液，具体如下：

4.根据权利要求3所述的一种板青颗粒的质量判定方法，其特征在于，步骤2中，所述的制备对照品溶液，具体如下：

5.根据权利要求4所述的一种板青颗粒的质量判定方法，其特征在于，所述对照品溶液的浓度为0.05～0.15mg·ml-1。

6.根据权利要求1、2、4或5所述的一种板青颗粒的质量判定方法，其特征在于，步骤2中，展开剂正丁醇﹣冰醋酸﹣水的体积比为15:7:7。

7.根据权利要求6所述的一种板青颗粒的质量判定方法，其特征在于，步骤3中，所述的制备供试品溶液，具体如下：

8.根据权利要求1、2、4、5或7所述的一种板青颗粒的质量判定方法，其特征在于，步骤3中，所述的制备对照品溶液，具体如下：

9.根据权利要求8所述的一种板青颗粒的质量判定方法，其特征在于，步骤2中和步骤3中，制备供试品溶液和对照品溶液时，溶剂为甲醇或乙醇。

10.根据权利要求9所述的一种板青颗粒的质量判定方法，其特征在于，步骤3中，所述的色谱柱为柱长为25cm、内径为4.6mm、粒度为5μm的atlantis t3色谱柱或等效色谱柱。

技术总结
本发明公开一种板青颗粒的质量判定方法，包括以下步骤：步骤1、准备待检测板青颗粒，如进行精氨酸的鉴别，进入步骤2，如进行核苷类或(R,S)‑告伊春的含量测定，进入步骤3；步骤2、通过薄层色谱法进行精氨酸的鉴别，得到鉴别结果；步骤3、通过液相色谱法对核苷类或(R,S)‑告伊春的含量进行测定，得到测定结果；步骤4、结合步骤2中得到的鉴别结果和步骤3中得到的测定结果综合判断板青颗粒质量。本发明检测项目更全面完善，质量控制指标更科学合理，操作更简便，能进一步提升产品质量水平，以确保疗效。

技术研发人员：邢双双,马亚,吕建波,莫虹瑕
受保护的技术使用者：四川恒通动保生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/3/27