一种检测黄曲霉毒素B1的胶体金试纸条制备方法与流程

本发明属于农产品质量安全检测，具体涉及一种检测黄曲霉毒素b1的胶体金试纸条制备方法。

背景技术：

1、黄曲霉毒素主要是黄曲霉和寄生曲霉的代谢产物，黄曲霉毒素污染的发生和程度随地理和季节因素以及作物生长、收获、贮存的条件不同而异，粮油作物在收获后、贮藏期以及加工后都能受到产毒菌株污染，有时早在作物收获前就已收到了产毒菌株的污染。食用受黄曲霉毒素污染的食品，会出现急性中毒。临床表现以黄疸为主，并有呕吐、厌食和发烧等症状。重症者在2-3周后出现腹水、下肢水肿，甚至死亡，死亡前出现胃肠道出血。长期摄入小剂量的黄曲霉毒素则造成慢性中毒。其主要变化特征为肝脏出现慢性损伤，如肝实质细胞变性、肝硬化等。出现动物生长发育迟缓，体重减轻，母畜不孕或产仔少等系列症状。国标gb/t 8233-2008中明确规定，芝麻油中黄曲霉毒素b1的检测方法，但在测定中需要借助精密仪器且操作复杂、检测时间长。针对快检技术在市场监督管理中应用的相关研究和分析来看，传统的实验室检验技术已经不能满足食品药品安全行业的发展需求，单纯依靠第三方实验室检测，成本高、周期长。

2、因此，迫切需要建立和开发一种快速、便捷、准确可靠的快速检测方法，作为芝麻油中黄曲霉毒素b1的快速筛查手段。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种检测黄曲霉毒素b1的胶体金试纸条制备方法。一种检测黄曲霉毒素b1的胶体金试纸条制备方法，按照如下步骤进行：

2、(1)胶体金制备：在容器中加入超纯水和质量浓度为0.5-2.5％的氯金酸溶液，加热至沸后加入质量浓度为0.5-2.5％的柠檬酸三钠溶液，反应8-15min，制成胶体金溶液；

3、(2)胶体金标记抗体：胶体金溶液用hcl和k2co3调至ph8.0-8.5，取黄曲霉毒素b1单克隆抗体、寡聚糖同时加入胶体金溶液，在磁力搅拌器下混合8-12min，加入bsa，制成胶体金标记抗体溶液；

4、(3)胶体金标记抗体纯化：胶体金标记抗体溶液在常温1000-2000rpm条件下离心10-30min，弃去沉淀，取上清溶液于4℃、7000-8000r/min离心20-40min；取沉淀转移到另外一个离心管中，用重悬液重悬至原量；

5、(4)结合垫的前处理：样品垫和结合垫剪裁后通过浸蘸处理液进行水化和封闭处理，浸泡20-40min后35-40℃、1-3h烘干；

6、(5)喷金：胶体金标记抗体溶液调浓度至od526为4-6，点样机将胶体金标记抗体在结合垫上均匀点样，点样量在20-40μl/cm2，35-40℃干燥；

7、(6)检测线抗原和控制线二抗的包被：将包被抗原cap-ova稀释到3-7μg/ml，二抗稀释到8-12μg/ml，点样在nc膜上分别划t线和c线，间距为3-7mm，35-40℃干燥；

8、(7)试纸条的组装：将nc膜、吸水纸、结合垫、样品垫依次粘贴在pvc胶板上，即成黄曲霉毒素b1胶体金试纸条。

9、步骤(1)所述超纯水、氯金酸溶液和柠檬酸三钠溶液的用量体积比为100：(0.5-3)(0.5-3)。

10、步骤(2)所述寡聚糖为葡甘露寡聚糖和半乳寡聚糖按照质量比1：1的混合寡聚糖；所述葡甘露寡聚糖的质量浓度为0.5％；所述半乳寡聚糖的质量浓度为0.5％，聚合度为812。

11、步骤(2)所述胶体金标记抗体溶液中黄曲霉毒素b1单克隆抗体浓度为5-20μg/ml；bsa质量浓度为0.5％。

12、步骤(2)所述hcl的浓度为0.1mol/l，k2co3的浓度为0.1mol/l。

13、所述重悬液包括如下组分：0.4％聚乙二醇2000、0.5％蔗糖、1％ bsa，余量为0.02mol/l pbs溶液。

14、步骤(4)所述处理液包括如下组分：0.3％吐温20、1％寡聚糖、6％蔗糖，余量为0.02mol/l pbs溶液。

15、所述寡聚糖为葡甘露寡聚糖和半乳寡聚糖按照质量比1：1的混合寡聚糖；所述葡甘露寡聚糖的质量浓度为0.5％；所述半乳寡聚糖的质量浓度为0.5％，聚合度为8-12。

16、步骤(3)重悬后，重复离心2-4次，最后重悬至原体积的1/20，加入0.1％的叠氮钠4℃保存备用。

17、本发明的有益效果：本发明制备的试纸条灵敏度高、重复性好、特异性强；操作简单、便捷，成本低、耗时少、携带方便、适合广泛使用。为芝麻油中黄曲霉毒素b1的检测提供了初筛方法，能够实现其现场快速检测，进而为食品安全监管提供了技术支持与保障。

技术特征：

1.一种检测黄曲霉毒素b1的胶体金试纸条制备方法，其特征在于，按照如下步骤进行：

2.根据权利要求1所述检测黄曲霉毒素b1的胶体金试纸条制备方法，其特征在于，步骤(1)所述超纯水、氯金酸溶液和柠檬酸三钠溶液的用量体积比为100：(0.5-3)(0.5-3)。

3.根据权利要求1所述检测黄曲霉毒素b1的胶体金试纸条制备方法，其特征在于，步骤(2)所述寡聚糖为葡甘露寡聚糖(200510034300.2一种葡甘露寡聚糖的制备方法)和半乳寡聚糖按照质量比1：1的混合寡聚糖；所述葡甘露寡聚糖的质量浓度为0.5％；所述半乳寡聚糖的质量浓度为0.5％，聚合度为8-12。

4.根据权利要求1所述检测黄曲霉毒素b1的胶体金试纸条制备方法，其特征在于，步骤(2)所述胶体金标记抗体溶液中黄曲霉毒素b1单克隆抗体浓度为5-20μg/ml；bsa质量浓度为0.5％。

5.根据权利要求1所述检测黄曲霉毒素b1的胶体金试纸条制备方法，其特征在于，步骤(2)所述hcl的浓度为0.1mol/l，k2co3的浓度为0.1mol/l。

6.根据权利要求1所述检测黄曲霉毒素b1的胶体金试纸条制备方法，其特征在于，所述重悬液包括如下组分：0.4％聚乙二醇2000、0.5％蔗糖、1％bsa，余量为0.02mol/l pbs溶液。

7.根据权利要求1所述检测黄曲霉毒素b1的胶体金试纸条制备方法，其特征在于，步骤(4)所述处理液包括如下组分：0.3％吐温20、1％寡聚糖、6％蔗糖，余量为0.02mol/l pbs溶液。

8.根据权利要求7所述检测黄曲霉毒素b1的胶体金试纸条制备方法，其特征在于，所述寡聚糖为葡甘露寡聚糖和半乳寡聚糖按照质量比1：1的混合寡聚糖；所述葡甘露寡聚糖的质量浓度为0.5％；所述半乳寡聚糖的质量浓度为0.5％，聚合度为8-12。

9.根据权利要求1所述检测黄曲霉毒素b1的胶体金试纸条制备方法，其特征在于，步骤(3)重悬后，重复离心2-4次，最后重悬至原体积的1/20，加入0.1％的叠氮钠4℃保存备用。

技术总结
本发明公开了一种检测黄曲霉毒素B1的胶体金试纸条制备方法。制备的步骤包括胶体金制备、胶体金标记抗体、胶体金标记抗体纯化、结合垫的前处理、喷金、检测线抗原和控制线二抗的包被、试纸条的组装。本发明制备的试纸条灵敏度高、重复性好、特异性强；操作简单、便捷，成本低、耗时少、携带方便、适合广泛使用。为芝麻油中黄曲霉毒素B1的检测提供了初筛方法，能够实现其现场快速检测，进而为食品安全监管提供了技术支持与保障。

技术研发人员：李华,贾红梅,王益萍,高晓睿,韩琰旭,陈发荣,郭妍
受保护的技术使用者：咸阳市食品药品检验检测中心（咸阳市食品药品检验检测技能培训中心）
技术研发日：
技术公布日：2024/8/15