一种基于HPLC-MS/MS检测血浆中Enasidenib含量的方法及试剂盒与流程

本发明属于enasidenib检测，具体涉及一种基于hplc-ms/ms检测血浆中enasidenib含量的方法及试剂盒。

背景技术：

1、enasidenib作为肿瘤代谢药物，属于idh2抑制剂，可以抑制多种促进细胞增殖的酶活性，可用于治疗携带异柠檬酸脱氢酶-2(idh2)基因突变的成人复发或难治性急性髓系白血病(aml)患者。fda数据显示，enasidenib口服生物利用度约为57％，达峰时间约为4h，血浆蛋白结合率为98.5％，其末端半衰期为25h，主要通过粪便消除，每天给药50～450mg浓度时间曲线下面积(auc)增加与剂量成正比。enasidenib主要通过细胞色素p450酶(cyp)和葡萄糖醛酸转移酶(ugts)代谢，在体内易与其它药物发生药物相互作用，导致药代参数变异较大，进而影响疗效。同时该药物在体内以蓄积，易产生蓄积毒性；因此，通过监测用药过程中enasidenib的体内浓度，进行个体化调整用药，对于浓度过低/过高或防止出现严重不良反应以及长期用药效果不佳的患者具有重要意义。

2、因此，建立一种准确、简单、灵敏、选择性高、可快速地测定血浆中enasidenib浓度的hplc-ms/ms方法，对评估enasidenib的疗效和安全性至关重要。

技术实现思路

1、本发明的目的在于克服现有技术中的的缺陷，提供了一种基于hplc-ms/ms检测血浆中enasidenib含量的方法及试剂盒，其血浆样品前处理简单，所需血浆样品量小，分析时间短，灵敏度和特异性好。

2、为实现上述目的，本发明所采取的技术方案如下：

3、一种基于hplc-ms/ms检测血浆中enasidenib含量的方法，以ivosidenib为内标对血浆中enasidenib的含量进行hplc-ms/ms检测；

4、hplc-ms/ms检测的液相色谱条件为：色谱柱为ultimate xb-c18，规格4.6mm×50mm，粒径5μm；柱温：60℃；流动相：流动相a为0.1％甲酸甲醇溶液，流动相b为2mmol/l乙酸铵-0.1％甲酸水溶液；色谱分离为梯度洗脱，梯度洗脱条件具体如下表：

5、

6、

7、流速：0.8ml/min；进样体积：2μl；

8、hplc-ms/ms检测的质谱检测条件为：电喷雾离子源，离子喷射电压：5500v，离子源温度：550℃，gs1：55psi，gs2：55psi，curtain gas：25psi，监测模式采用多重反应检测模式mrm。

9、作为进一步的技术方案，所述mrm的质谱条件如下表；

10、 母离子 子离子 dwelltime dp(v) ce(v) enasidenib 474.100 267.100 200 80 42 ivosidenib 583.200 476.000 150 85 30

11、作为进一步的技术方案，在对血浆样品进行hplc-ms/ms检测前，还需要进行血浆样品的前处理；

12、所述血浆样品的前处理方法，包括：取待测血浆，加入样本处理液和内标液，振荡混匀，离心取上清液，备用；

13、作为进一步的技术方案，血浆、样本处理液和内标液的体积比为：1:1:3。

14、作为进一步的技术方案，在对血浆样品进行hplc-ms/ms检测前，还需要绘制标准曲线；

15、所述绘制标准曲线，包括：将不同浓度梯度的enasidenib标准溶液，分别加入样本处理液，和内标液，然后进样检测，并以enasidenib校准溶液浓度为横坐标，以enasidenib标准溶液的实测峰面积与内标物峰面积的比值为纵坐标，绘制校准曲线，即可

16、作为进一步的技术方案，所述样本处理液为：2mmol/l乙酸铵-0.1％体积浓度的甲酸水溶液；

17、所述内标液为：250ng/ml的ivosidenib甲醇标准溶液。

18、作为进一步的技术方案，不同浓度梯度enasidenib标准溶液的配制方法为：以甲醇配制标准品储备液，然后用甲醇稀释成8个浓度梯度，8个浓度梯度分别为0μg/ml、0.05μg/ml、1μg/ml、1.75μg/ml、2.5μg/ml、10μg/ml、17.5μg/ml、25μg/ml。

19、作为进一步的技术方案，还包括质控，所述质控为采用质控品对检测方法进行验证；

20、所述质控品包含有单个水平的低、中、高浓度enasidenib质控溶液；

21、低浓度水平质控溶液采用的是0.75μg/ml的enasidenib标准溶液；

22、中浓度水平质控溶液采用的是7.5μg/ml的enasidenib标准溶液；

23、高浓度水平质控溶液采用的是20μg/ml的enasidenib标准溶液。

24、一种所述基于hplc-ms/ms检测血浆中enasidenib含量的方法所用的试剂盒，包括校准品、质控品、样本处理液、内标液和流动相，其中，所述校准品包括0μg/ml、0.05μg/ml、1μg/ml、1.75μg/ml、2.5μg/ml、10μg/ml、17.5μg/ml和25μg/ml的enasidenib标准溶液。

25、与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

26、本发明以ivosidenib为内标，并通过对hplc-ms/ms检测条件的优化，提高了enasidenib定量检测的准确性，避免了其收到常用药物及合并用药的干扰，最终获得了能够准确、简单、灵敏、选择性高、快速地测定血浆中enasidenib浓度的hplc-ms/ms方法；此外，其还具有血浆样品的前处理方法简单、样品用量少的特点，能够用于enasidenib临床血药浓度日常监测和药代动力学分析研究。

技术特征：

1.一种基于hplc-ms/ms检测血浆中enasidenib含量的方法，其特征在于，以ivosidenib为内标对血浆中enasidenib的含量进行hplc-ms/ms检测；

2.根据权利要求1所述的一种基于hplc-ms/ms检测血浆中enasidenib含量的方法，其特征在于，

3.根据权利要求1所述的一种基于hplc-ms/ms检测血浆中enasidenib含量的方法，其特征在于，

4.根据权利要求3所述的一种基于hplc-ms/ms检测血浆中enasidenib含量的方法，其特征在于，

5.根据权利要求3所述的一种基于hplc-ms/ms检测血浆中enasidenib含量的方法，其特征在于，在对血浆样品进行hplc-ms/ms检测前，还需要绘制标准曲线；

6.根据权利要求5所述的一种基于hplc-ms/ms检测血浆中enasidenib含量的方法，其特征在于，

7.根据权利要求5所述的一种基于hplc-ms/ms检测血浆中enasidenib含量的方法，其特征在于，不同浓度梯度enasidenib标准溶液的配制方法为：以甲醇配制标准品储备液，然后用甲醇稀释成8个浓度梯度，8个浓度梯度分别为0μg/ml、0.05μg/ml、1μg/ml、1.75μg/ml、2.5μg/ml、10μg/ml、17.5μg/ml、25μg/ml。

8.根据权利要求1所述的一种基于hplc-ms/ms检测血浆中enasidenib含量的方法，其特征在于，还包括质控，所述质控为采用质控品对检测方法进行验证；

9.一种如权利要求1-8任一项所述基于hplc-ms/ms检测血浆中enasidenib含量的方法所用的试剂盒，其特征在于，包括校准品、质控品、样本处理液、内标液和流动相，其中，所述校准品包括0μg/ml、0.05μg/ml、1μg/ml、1.75μg/ml、2.5μg/ml、10μg/ml、17.5μg/ml和25μg/ml的enasidenib标准溶液。

技术总结
本发明涉及一种基于HPLC‑MS/MS检测血浆中Enasidenib含量的方法及试剂盒，以Ivosidenib为内标对血浆中Enasidenib的含量检测；液相色谱条件为：色谱柱为Ultimate XB‑C18；柱温：60℃；流动相：流动相A为0.1％甲酸甲醇溶液，流动相B为2mmol/L乙酸铵‑0.1％甲酸水溶液；色谱分离为梯度洗脱，流速：0.8mL/min；进样体积：2μl；质谱检测条件为：电喷雾离子源，离子喷射电压：5500V，离子源温度：550℃，GS1：55psi，GS2：55psi，Curtain gas：25psi，监测模式采用多重反应检测模式MRM。本发明准确、简单、灵敏、选择性高、可快速地测定血浆中Enasidenib的含量。

技术研发人员：王磊,刘红星,刘瑞,孙文利
受保护的技术使用者：北京陆道培生物技术有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/5/6