一种渔用中草药散剂中抗生素的检测方法与流程

本发明属于渔用中草药成分分析，具体涉及一种渔用中草药散剂中抗生素的检测方法。

背景技术：

1、渔用中草药散剂主要用于防治水产动物的疾病，以提高养殖水产品的质量和产量。在我国现有的渔药中，渔用中草药散剂制剂所占的比重较大，是我国特色渔药之一。渔用中草药散剂制剂在水产动物防治疾病方面具有显著的效果，但发挥药效作用缓慢，对已发病的养殖水产动物的治疗效果较差。为了弥补这一不足，部分渔用中草药散剂制剂的生产者采取加入抗生素类药物的措施，称其为“中西结合”。但是抗生素需要达到一定的浓度才能发挥作用，当药物浓度不能达到杀菌或抑菌时，极易导致致病菌产生耐药性，对养殖水生动物和养殖水环境造成药物污染。抗生素残留在多种环境因子作用下发生转移转化或者在动植物体内蓄积，通过食物链的累积作用，使得抗生素残留浓度加深，达到了一定浓度会对人体产生致畸、致癌和致突变作用。

2、目前已报道的抗生素类药物残留的分析研究大多集中在动物源性食品或动物饲料上，而渔用中草药散剂制剂中抗生素类药物残留的检测方法尚处于探索之中。

技术实现思路

1、本发明的目的在于克服现有技术缺陷，提供一种渔用中草药散剂中抗生素的检测方法。

2、本发明的技术方案如下：

3、一种渔用中草药散剂中抗生素的检测方法，包括如下步骤：

4、(1)用提取溶剂对待测中草药散剂进行提取，得到中草药提取物；

5、(2)用净化剂吸附上述中草药提取物中的干扰杂质，得到供试品溶液；

6、(3)采用高效液相色谱-串联质谱法对上述供试品溶液中的抗生素含量进行定量分析；

7、其中，上述提取溶剂为0.1％的甲酸乙腈，上述净化剂为十八烷基硅胶键合相；

8、上述抗生素为喹诺酮类抗生素和磺酸类抗生素，其中，上述喹诺酮类抗生素为氧氟沙星、洛美沙星、丹诺沙星、恩诺沙星和双氟沙星中的至少一种，上述磺酸类抗生素为磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺间二甲氧嘧啶和磺胺喹恶啉中的至少一种。

9、在一些可能的实现方式中，待测中草药散剂与提取溶剂的用量比为0.9g-1.1g：5ml。

10、在一些可能的实现方式中，步骤(1)的操作为：在称取待测中草药散剂于离心管中，依次加入混合内标标准工作液和提取溶剂，混合，超声波提取；

11、其中，混合内标标准工作液为氘代恩诺沙星、氘代磺胺间二甲氧嘧啶和氘代磺胺邻二甲氧嘧啶的甲醇溶液，其中，氘代恩诺沙星、氘代磺胺间二甲氧嘧啶和氘代磺胺邻二甲氧嘧啶的浓度均为0.5μg/ml，混合内标标准工作液的用量为提取溶剂的1％，超声波提取的时间为5min。

12、在一些可能的实现方式中，待测中草药散剂与净化剂的用量的质量比为0.9-1.1：0.5。

13、在一些可能的实现方式中，步骤(2)的操作为：将中草药提取物与净化剂混合，离心，取上清液吹干，加入定容液，过滤得到供试品溶液；

14、定容液为0.002mol/l乙酸铵-0.1％甲酸水溶液与乙腈的混合溶液，0.002mol/l乙酸铵-0.1％甲酸水溶液与乙腈的体积比为85：15，过滤的滤膜孔径为0.22μm。

15、进一步优选地，待测中草药散剂与定容液的用量比为1.8g-2.2g：1ml。

16、进一步优选地，步骤(2)还包括，在将中草药提取物与净化剂混合之前，向中草药提取物中加入盐析分层剂，然后依次混合，离心和取上清液，盐析分层剂为氯化钠。

17、在一些可能的实现方式中，在步骤(3)中通过空白基质匹配标准溶液矫正法和内标法进行定量。

18、进一步优选地，在步骤(3)中，高效液相色谱-串联质谱法中的高效液相色谱的条件包括：ultimate xb-c18色谱柱，2.1mm×150mm×5μm；柱温35℃；流动相a为0.002mol/l乙酸铵-0.1％甲酸水溶液；流动相b为乙腈；流速0.25ml/min；进样量10μl；

19、流动相梯度洗脱程序如下：

20、

21、进一步优选地，在步骤(3)中，高效液相色谱-串联质谱法中的串联质谱的条件包括：

22、电喷雾离子源，正离子检测模式；喷雾电压3500v；鞘气压力241kpa；辅助气压力2l/min；离子传输毛细管温度350℃；选择反应监测；q1半峰宽0.7u；q3半峰宽0.7u；碰撞气氩气；碰撞气压力0.2pa；

23、选择反应监测的条件如下：

24、

25、*为定量离子。

26、本发明的有益效果是：本发明基于quechers结合高效液相色谱-串联质谱法建立了一种渔用中草药散剂中的喹诺酮类抗生素和磺胺类抗生素的检测方法，具有前处理简单、快速、准确、高灵敏度和高选择性等特点，适用于渔用中草药散剂中抗生素类药物残留的快速检测。

技术特征：

1.一种渔用中草药散剂中抗生素的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述待测中草药散剂与所述提取溶剂的用量比为1.98g-2.02g：10ml。

3.如权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)的操作为：在所述待测中草药散剂中依次加入混合内标标准工作液和提取溶剂，混合，超声波提取；

4.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述待测中草药散剂与所述净化剂的用量的质量比为1.98-2.02：0.5。

5.如权利要求1或4所述的检测方法，其特征在于，步骤(2)的操作为：将所述中草药提取物与净化剂混合，离心，取上清液吹干，加入定容液，过滤得到所述供试品溶液；

6.如权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述待测中草药散剂与所述定容液的用量比为1.98g-2.02g：1ml。

7.如权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(2)还包括，在将所述中草药提取物与净化剂混合之前，向所述中草药提取物中加入盐析分层剂，然后依次进行混合、离心和取上清液，所述盐析分层剂为氯化钠。

8.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，在所述步骤(3)中，通过空白基质匹配标准溶液校正法和内标法进行定量分析。

9.如权利要求8所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(3)中，所述高效液相色谱-串联质谱法中的高效液相色谱的条件包括：ultimate xb-c18色谱柱，2.1mm×150mm×5μm；柱温35℃；流动相a为0.002mol/l乙酸铵-0.1％甲酸水溶液；流动相b为乙腈；流速0.25ml/min；进样量10μl；

10.如权利要求8所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(3)中，所述高效液相色谱-串联质谱法中的串联质谱的条件包括：

技术总结
本发明公开了一种渔用中草药散剂中抗生素的检测方法，包括如下步骤：(1)用提取溶剂对待测中草药散剂进行提取，得到中草药提取物；(2)用净化剂吸附上述中草药提取物中的干扰杂质，得到供试品溶液；(3)采用高效液相色谱‑串联质谱法对上述供试品溶液中的抗生素含量进行定量分析；其中，上述提取溶剂为0.1％的甲酸乙腈，上述净化剂为十八烷基硅胶键合相。本发明基于QuEChERS结合高效液相色谱‑串联质谱法建立了一种渔用中草药散剂中的喹诺酮类抗生素和磺胺类抗生素的检测方法，具有前处理简单、快速、准确、高灵敏度和高选择性等特点，适用于渔用中草药散剂中抗生素类药物残留的快速检测。

技术研发人员：位绍红,钱卓真,汤水粉,刘智禹,刘海新,王丽娟,陈燕婷,陈宇锋,姜琳琳,余颖
受保护的技术使用者：福建省水产研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/4/24