一种用于荧光原位杂交的含红细胞的石蜡组织切片的处理方法及应用与流程

本发明涉及一种用于荧光原位杂交的含红细胞的石蜡组织切片的处理方法及应用，属于病理组织检测。

背景技术：

1、石蜡组织切片是病理诊断过程中重要的组成部分之一，其诊断报告是病理科等临床科室疾病诊疗的重要依据，其中常用的检测方法主要有常规染色、免疫组织化学、原位杂交等。而在实体瘤的病理诊断中，荧光原位杂交(fish)方法在肿瘤诊断、治疗监测和预后评判中发挥着重要作用。

2、目前，对于荧光原位杂交中使用的石蜡组织切片通常采用脱蜡水化、修复、消化、变性杂交、洗涤等主要步骤，修复为使用预处理液(如纯水、edta缓冲液、柠檬酸钠缓冲液等)对切片进行修复，消化为使用蛋白酶等对切片进行处理，但是部分石蜡包埋的组织(如肺，肝脏，子宫等器官的组织)在病理取材时会产生充血等现象，充血组织在包埋时会形成血块。充血组织切片对于常规病理染色和免疫组织化学染色影响不大，但是充血组织切片血块中的红细胞在荧光原位杂交过程中极容易产生背景荧光，影响目的荧光信号的观察。因此，在使用充血组织的石蜡切片进行荧光原位杂交时，对充血组织或充血组织的石蜡切片进行处理，减少红细胞引起的背景荧光有利于目的荧光信号的观察。

技术实现思路

1、本发明的第一个目的是提供一种用于荧光原位杂交的含红细胞的石蜡组织切片的处理方法，以解决现有技术中充血组织切片血块中的红细胞造成背景荧光增强，不利于目的荧光信号观察的问题。

2、本发明的第二个目的是提供一种用于荧光原位杂交的含红细胞的石蜡组织切片的处理方法在荧光原位杂交中的应用，以解决现有技术中充血组织切片血块中的红细胞造成背景荧光增强，不利于目的荧光信号观察的问题。

3、为了实现上述目的，本发明中一种用于含红细胞的石蜡组织切片的处理方法的技术方案是：

4、一种用于荧光原位杂交的含红细胞的石蜡组织切片的处理方法，将完成修复处理后、酶处理消化处理前的石蜡组织切片使用抗坏血酸溶液处理，以减弱或消除红细胞造成的背景荧光。

5、上述方案的有益效果在于：本发明的用于荧光原位杂交的含红细胞的石蜡组织切片的处理方法属于开拓性发明。现有技术中常使用低渗液或红细胞裂解液对组织进行处理，从而达到去除红细胞的目的，而本发明通过实验发现，使用低渗液或红细胞裂解液处理含红细胞的石蜡组织切片不能有效去除红细胞，在后续荧光原位杂交的结果观察时，有非常严重的背景荧光。而本发明使用抗坏血酸溶液对预处理液修复后的石蜡切片进行处理，在后续荧光原位杂交的结果观察时，红细胞引起的背景荧光减弱甚至消除，非常有利于目的荧光信号的观察。其中抗坏血酸能非特异性的还原降解血细胞中的血红素，使卟啉环α、β亚基的甲炔基发生氧化断裂，从而破坏血红蛋白的结构，这样更有利于后续蛋白酶对蛋白的消化，从而减弱甚至消除由于红细胞引起的背景荧光。本发明的处理方法为常规石蜡组织切片的预处理，方法简单有效，无需依靠复杂的仪器设备，也无需对石蜡切片进行复杂的操作，即可以保证后续荧光原位杂交的效果。

6、具体地，成熟的红细胞无细胞核，主要由血红蛋白组成，血红蛋白由一个珠蛋白和四个血红素(又称亚铁原卟啉)组成，每个血红素又由四个吡咯类亚基组成一个环，环中心为一个亚铁离子。每个珠蛋白则有四条多肽链，每条多肽链与一个血红素连接，构成血红蛋白的一个单体，或者说亚单位(即亚基)。在与人体环境相似的电解质溶液中血红蛋白的四个亚基可以自动组装成α2β2的形态。

7、作为进一步地改进，所述抗坏血酸溶液的质量浓度为5～10％。

8、作为进一步地改进，所述处理为37℃处理10～30min。

9、作为进一步地改进，所述抗坏血酸溶液的质量浓度为5％。

10、上述方案的有益效果在于：在使用抗坏血酸溶液处理时，抗坏血酸溶液的浓度过大时，会出现荧光原位杂交信号有所减弱的问题，当抗坏血酸溶液的质量浓度为5％，既能保证红细胞产生的背景荧光减弱，不影响荧光信号的观察，又不会出现处理过度导致目的荧光信号减弱的问题。

11、作为进一步地改进，所述处理为37℃处理20～30min。

12、为了实现上述目的，本发明中用于荧光原位杂交的含红细胞的石蜡组织切片的处理方法在荧光原位杂交中的应用的技术方案是：

13、一种用于荧光原位杂交的含红细胞的石蜡组织切片的处理方法在荧光原位杂交中的应用，所述应用为非疾病诊断和治疗的。

14、上述方案的有益效果在于：本发明的用于荧光原位杂交的含红细胞的石蜡组织切片的处理方法在荧光原位杂交中的应用属于开拓性发明。本发明通过实验证明去除红细胞常用的试剂低渗液和红细胞裂解液处理含红细胞的石蜡组织切片后，进行荧光原位杂交时不能减少红细胞引起的背景荧光，而使用抗坏血酸溶液处理后的含红细胞的石蜡组织切片，进行荧光原位杂交时，红细胞产生的背景荧光基本消除，不影响目的荧光信号的观察。

15、与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

16、第一，通过在样本预处理阶段添加抗环血酸处理从而使血红素发生还原降解，血红蛋白结构发生变化，从而有利于蛋白酶对血红蛋白的消化。

17、第二，与其他常规处理方法相比，抗环血酸处理能消除红细胞引起的背景荧光，保证荧光原位杂交的杂交效果，从而方便荧光信号的观察。

技术特征：

1.一种用于荧光原位杂交的含红细胞的石蜡组织切片的处理方法，其特征在于：将完成修复处理后、酶处理消化处理前的石蜡组织切片使用抗坏血酸溶液处理，以减弱或消除红细胞造成的背景荧光。

2.根据权利要求1所述的用于荧光原位杂交的含红细胞的石蜡组织切片的处理方法，其特征在于：所述抗坏血酸溶液的质量浓度为5～10％。

3.根据权利要求1或2所述的用于荧光原位杂交的含红细胞的石蜡组织切片的处理方法，其特征在于：所述处理为37℃处理10～30min。

4.根据权利要求2所述的用于荧光原位杂交的含红细胞的石蜡组织切片的处理方法，其特征在于：所述抗坏血酸溶液的质量浓度为5％。

5.根据权利要求4所述的用于荧光原位杂交的含红细胞的石蜡组织切片的处理方法，其特征在于：所述处理为37℃处理20～30min。

6.一种如权利要求1～5任一项所述的用于荧光原位杂交的含红细胞的石蜡组织切片的处理方法在荧光原位杂交中的应用，其特征在于：所述应用为非疾病诊断和治疗的。

技术总结
本发明涉及一种用于荧光原位杂交的含红细胞的石蜡组织切片的处理方法及应用，属于病理组织检测技术领域。本发明的处理方法中，将完成修复处理后、酶处理消化处理前的石蜡组织切片使用抗坏血酸溶液处理，以减弱或消除红细胞造成的背景荧光。本发明提出了一种针对充血组织切片的处理方法，通过将完成预处理液修复处理的石蜡组织切片使用抗坏血酸溶液处理，使血红素发生还原降解，血红蛋白结构发生变化，从而有利于蛋白酶对血红蛋白的消化，进而减弱或消除红细胞引起的背景荧光，保证荧光原位杂交的杂交效果，从而方便荧光信号的观察。

技术研发人员：霍清园,李贵喜,李三华,李丹阳,郭曙光,张森,谢夏,郭琴,楚珍妮,何梦晓,齐华
受保护的技术使用者：河南赛诺特生物技术有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/6/20