基于HPLC数据融合检测的食品中羟脯氨酸含量的测定方法与流程

本发明涉及羟脯氨酸的检测，具体为基于hplc数据融合检测的食品中羟脯氨酸含量的测定方法。

背景技术：

1、羟脯氨酸(hydroxyproline，hyp)是亚氨基酸之一，是一种非必需氨基酸，是胶原组织的主要成分之一，且为胶原中特有的氨基酸，约占胶原氨基酸总量的13％。胶原蛋白是体内含量最多的蛋白质，约占人体蛋白质总量1/3。利用羟脯氨酸在胶原蛋白中含量最高这一特点，通过血液和尿液对羟脯氨酸的测定，可了解体内胶原蛋白分解代谢情况，即可作为结缔组织分解情况指标，很多疾病可伴有胶原代谢变化而引起血、尿及组织羟脯氨酸的含量改变。临床检验普遍使用氨基酸自动分析仪效果满意，此外还有比色法、气相色谱法、高效液相色谱法、毛细管电泳法等。

2、大部分食品中都含有羟脯氨酸(奶制品、鱼虾肉类等等)，现有的对于食品中的羟脯氨酸的检测一般为食品加工出场时的检测，而未进行食品进入人体内的羟脯氨酸的吸收含量的检测，不能清楚的了解羟脯氨酸分解出来的实际含量实际作用人体的效果。

3、为此，我们提出基于hplc数据融合检测的食品中羟脯氨酸含量的测定方法。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供基于hplc数据融合检测的食品中羟脯氨酸含量的测定方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

2、为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：基于hplc数据融合检测的食品中羟脯氨酸含量的测定方法，包括以下步骤；

3、s1、称取样品盒质量，然后将食品置于样品盒中并进行碾碎，碾碎的食品为试样，并再次称取样品盒的重量；

4、s2、向样品盒中加入水解液进行水解处理，从而使试样中释放出羟脯氨酸，再采用高效液相色谱法对水解处理后的羟脯氨酸含量进行测定，得到x1；

5、所述水解处理中使用的水解液包括0.75％氯化亚锡溶液、4-8mol/l盐酸溶液、3～9mol/l氢氧化钠溶液以及助溶剂，水解温度为常温；

6、优选的，所述助溶剂包括二甲基亚砜(dmso)、二甲基乙酰胺(dma)和甲基-2-吡咯烷酮(nmp)，所述助溶剂还包括乙醇、丙二醇(pg)和聚乙二醇(peg)；

7、优选的，所述水解处理中通过搅拌并加气压方式对水解液进行加速溶解处理，且加压方式作用高效液相色谱法中流动的溶液通过固定相的过程，水解处理中加入不饱和溶液，不饱和溶液有氢氧化钡、硝酸盐；

8、优选的，所述水解液中还包括表面活性剂，表面活性剂浓度位于0.01％～1.0％(w/v)范围内依次递增使用，表面活性剂浓度位于0.01％～1.0％(w/v)范围内依次递增使用，且值得注意的是：先保证试样与表面活性剂和助溶剂完全融合，然后再稀释到水相中；

9、所述表面活性剂包括有聚山梨醇酯(如tween-80)和聚乙二醇蓖麻油(如cremophor el)，还包括有甘油酯44/14和聚乙二醇硬脂酸酯15(solutol hs-15)，通过表面活性剂增加助溶效果，且生物相容性及安全性更好。

10、s3、向水解后的溶液依次加入分解液，所述分解液粘稠度大于水解的溶液，然后对经过分解液处理后的溶液进行羟脯氨酸含量的测定，从而测定羟脯氨酸进入人体内的吸收的含量，所述分解液包括：

11、优选的，第一分解液；所述第一分解液为唾液腺液，第一分解液温度为人体的唾液腺温度，唾液腺液与水解后的溶液反应，得到第一分解后的溶液，然后采用高效液相色谱法对第一分解后的溶液中的羟脯氨酸含量进行测定，得到x2，再对第一分解后的溶液进行过滤，第一层过滤残渣，第二层过滤粘稠的第一分解液，然后将残渣倒回第一分解后溶液，第一分解后的溶液中残留少量的第一分解液，最后对第一分解后的溶液中加入第二分解液；

12、优选的，第二分解液；所述第二分解液为胃腺液，第二分解液温度为人体的胃腺温度，胃腺液与第一分解后的溶液反应，得到第二分解后的溶液，然后采用高效液相色谱法对第二分解后的溶液中的羟脯氨酸含量进行测定，得到x3，再对第二分解后的溶液进行过滤，第一层过滤残渣，第二层过滤粘稠的第二分解液，然后将残渣倒回第二分解后溶液，第二分解后的溶液中残留少量的第二分解液，最后对第二分解后的溶液中加入第三分解液；

13、优选的，第三分解液；所述第三分解液为肝脏液，第三分解液温度为人体的肝脏温度，肝脏液与第二分解后的溶液反应，得到第三分解后的溶液，然后采用高效液相色谱法对第三分解后的溶液中的羟脯氨酸含量进行测定，得到x4，再对第三分解后的溶液进行过滤，第一层过滤残渣，第二层过滤粘稠的第三分解液，然后将残渣倒回第三分解后溶液，第三分解后的溶液中残留少量的第三分解液，最后对第三分解后的溶液中加入第四分解液；

14、优选的，第四分解液；所述第四分解液为胰脏液，第四分解液温度为人体的胰脏温度，胰脏液与第三分解后的溶液反应，得到第四分解后的溶液，然后采用高效液相色谱法对第四分解后的溶液中的羟脯氨酸含量进行测定，得到x5，再对第四分解后的溶液进行过滤，第一层过滤残渣，第二层过滤粘稠的第四分解液，然后将残渣倒回第四分解后溶液，第四分解后的溶液中残留少量的第四分解液，最后对第四分解后的溶液中加入第五分解液；

15、优选的，第五分解液；所述第五分解液为肠腺液，第五分解液温度为人体的肠腺温度，肠腺液与第四分解后的溶液反应，得到第五分解后的溶液，然后采用高效液相色谱法对第五分解后的溶液中的羟脯氨酸含量进行测定，得到x6。

16、其中，所述s1中的过滤方式使用渗透膜，渗透膜始终保持25°，过滤前对水解后或者分解后的溶液进行温控处理，使溶液温度达到25°后，再通过渗透膜过滤，且羟脯氨酸含量进行测定前进行脱气处理。

17、与现有技术相比，本发明的有益效果是：

18、1、通过助溶剂和不饱和溶液、表面活性剂的配合，以及搅拌并加气压方式对水解液的作用，增加溶剂与溶质之间的分子间作用力，加快溶解效率，保证实验效果，其中，表面活性剂浓度推荐在0.01％-1.0％(w/v)范围内依次递增考察，保证溶解效率；

19、同时加气压方式有助于高效液相色谱法中流动的溶液通过固定相，配合通过微孔的渗透膜，避免堵塞了流动相的正常通道。

20、2、通过依次施加唾液腺液、胃腺液、肝脏液、胰脏液肠腺液，检测到羟脯氨酸含量的变化，从而计算出人体各器官对于羟脯氨酸的分解和吸收情况,清楚的了解羟脯氨酸分解出来的实际含量以及实际作用人体的效果,以便适当调整食品加工时的羟脯氨酸含量，保证食用者的健康。

技术特征：

1.基于hplc数据融合检测的食品中羟脯氨酸含量的测定方法，其特征在于，包括以下步骤；

2.根据权利要求1所述的基于hplc数据融合检测的食品中羟脯氨酸含量的测定方法，其特征在于：所述水解处理中通过搅拌并加气压方式对水解液进行加速溶解处理，且加压方式作用高效液相色谱法中流动的溶液通过固定相的过程。

3.根据权利要求1所述的基于hplc数据融合检测的食品中羟脯氨酸含量的测定方法，其特征在于：所述水解液中还包括表面活性剂，表面活性剂浓度位于0.01％～1.0％(w/v)范围内依次递增使用；

4.根据权利要求1所述的基于hplc数据融合检测的食品中羟脯氨酸含量的测定方法，其特征在于：先保证试样与表面活性剂和助溶剂完全融合，然后再稀释到水相中。

5.根据权利要求1所述的基于hplc数据融合检测的食品中羟脯氨酸含量的测定方法，其特征在于：所述s1中的过滤方式使用渗透膜，渗透膜始终保持25°，过滤前对水解后或者分解后的溶液进行温控处理，使溶液温度达到25°后，再通过渗透膜过滤。

6.根据权利要求1所述的基于hplc数据融合检测的食品中羟脯氨酸含量的测定方法，其特征在于：羟脯氨酸含量进行测定前进行脱气处理。

7.根据权利要求1所述的基于hplc数据融合检测的食品中羟脯氨酸含量的测定方法，其特征在于：所述助溶剂还包括乙醇、丙二醇(pg)和聚乙二醇(peg)。

8.根据权利要求1所述的基于hplc数据融合检测的食品中羟脯氨酸含量的测定方法，其特征在于：水解处理中加入不饱和溶液，不饱和溶液有氢氧化钡、硝酸盐。

9.根据权利要求3所述的基于hplc数据融合检测的食品中羟脯氨酸含量的测定方法，其特征在于：所述表面活性剂还包括有甘油酯44/14和聚乙二醇硬脂酸酯15(solutol hs-15)。

技术总结
本发明公开了基于HPLC数据融合检测的食品中羟脯氨酸含量的测定方法，包括以下步骤；S1、将称量好的食品试样置于样品盒中并进行碾碎；S2、向样品盒中加入水解液进行水解处理，从而使试样中释放出羟脯氨酸，再采用高效液相色谱法对水解处理后的羟脯氨酸含量进行测定，得到X1；S3、向水解后的溶液依次加入分解液，所述分解液粘稠度大于水解的溶液，然后对经过分解液处理后的溶液进行羟脯氨酸含量的测定，从而测定羟脯氨酸进入人体内的吸收的含量，通过依次施加唾液腺液、胃腺液、肝脏液、胰脏液肠腺液，检测到羟脯氨酸含量的变化，从而计算出人体各器官对于羟脯氨酸的分解和吸收情况，以便适当调整食品加工时的羟脯氨酸含量，保证食用者的健康。

技术研发人员：庞无瑕,廖方明
受保护的技术使用者：广州羽翔自动化设备有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/4/29