一种酸枣仁汤特征图谱的构建及质量检测方法

本发明涉及中药质量控制，具体涉及酸枣仁汤特征图谱的构建及质量检测方法。

背景技术：

1、酸枣仁汤出自东汉著名医家张仲景的《金匮要略·血痹虚劳病脉证并治》，处方由炒酸枣仁、知母、川芎、茯苓、甘草5味中药组成，具有养血安神、清心除烦的功效。现代药理研究表明，酸枣仁汤具有镇静催眠、抗抑郁、抗焦虑等药理作用。作用机制研究表明，酸枣仁汤能够改善因睡眠不足引起的认知障碍，延长睡眠时间，改善模型小鼠失眠行为表现降低失眠小鼠脑组织中ne、da含量，提高5-ht含量，其促进睡眠、抗抑郁作用可能与cgmp-pkg信号通路和il-17信号通路有关。临床试验证实，酸枣仁汤治疗失眠疗效确切,可改善患者生活、睡眠质量,减轻患者焦虑度,缩短其入睡时间，临床。

2、酸枣仁汤化学成分复杂，wang等(journal of pharmaceutical analysis,2019,9(6):406-413)用lc-ms和uplc-pda法，对酸枣仁汤中9种活性成分腺苷、原儿茶酸、木兰花碱、儿茶素、原儿茶素、维采宁-ii、斯皮诺素、山奈酚-3-o-芸香糖苷、6’-阿魏酰斯皮诺素进行了鉴别和定量测定。李佳涵等(中草药,2022,53(15):4698-4708)整合指纹图谱与多成分含量测定建立了市售酸枣仁汤的质量评价方法。中药药效发挥的强弱有赖于其所含的活性成分含量的高低，但对于有着几十甚至几百种生物活性成分的中药复方制剂而言，简单的定量几种成分显然不足以保证酸枣仁汤的有效性和安全性，达到全面控制其质量的目的。

3、有鉴于此，研究建立酸枣仁汤的指纹图谱，以提供更加简单快速、准确可靠的方法尤为必要，为酸枣仁汤的质量评价体系的完善提供了参考。

技术实现思路

1、本发明的目的在于克服现有技术中存在的缺陷，提供一种构建酸枣仁汤的指纹图谱的方法，具有快速准确的特点，同时提供质量检测方法。

2、为解决上述问题，本发明所采取的技术方案是：

3、本发明一方面提供了一种酸枣仁汤指纹图谱的构建方法，其包括如下步骤：

4、(1)制备供试品溶液；

5、(2)供试品溶液采用超高校液相色谱法检测，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.1％甲酸水为流动相a，乙腈为流动相b，采用梯度洗脱程序：0～2min,95～95％ a；2～7min,95～85％ a；7～14min,85～83％ a；14～18min,83～74％ a；18～22min,74～73％a；22～25min,73～55％ a；25～28min,55～45％ a；28～35min,45～5％ a；35～40min,5～5％ a；40～41min,5～95％ a；41～47min,95～95％ a。

6、作为本发明的进一步改进，所述步骤(2)中超高效液相色谱的条件还包括：流速为0.2ml/min，检测波长为90nm，柱温为30℃，进样量为1μl。

7、作为本发明的进一步改进，所述供试品为酸枣仁汤冻干粉，溶剂为70％甲醇。

8、作为本发明的进一步改进，所述酸枣仁汤冻干分的制备方法为：炒酸枣仁138g，茯苓27.6g，知母27.6g，川芎27.6g，甘草13.8g。工艺确定为：炒酸枣仁药材，粗碎，加水1600ml，煮至1200ml，再加入茯苓、知母、川芎、甘草，煮至600ml，过滤，浓缩，冻干，得冻干粉。

9、作为本发明的进一步改进，还包括采用对照品制备对照液的步骤，以及将步骤(2)中的供试品溶液替换为对照品溶液，得到对照品特征图谱的步骤。

10、作为本发明的进一步改进，所述对照品溶液分为对照品溶液一和对照品溶液二；

11、所述对照品溶液一的制备：精密称定适量的斯皮诺素、木兰花碱、6’-阿魏酰斯皮诺素、新芒果苷、芒果苷、阿魏酸、洋川芎内酯a、洋川芎内酯i、藁本内酯、绿原酸、隐绿原酸、甘草苷、芹糖异甘草苷、甘草素对照品溶于甲醇中，得到混合对照品一溶液，其中斯皮诺素15.98μg/ml、木兰花碱10.87μg/ml、6’-阿魏酰斯皮诺素6.17μg/ml、新芒果苷64.67μg/ml、芒果苷25.01μg/ml、阿魏酸5.33μg/ml、洋川芎内酯a45.30μg/ml、洋川芎内酯i7.75μg/ml、藁本内酯5.90μg/ml、绿原酸9.83μg/ml、隐绿原酸2.94μg/ml、甘草苷9.58μg/ml、芹糖异甘草苷17.14μg/ml、甘草素9.60μg/ml；

12、所述对照品溶液二的制备：精密称定适量的知母皂苷bⅱ、知母皂苷bⅲ、酸枣仁皂苷a、酸枣仁皂苷b、松苓新酸溶于甲醇中，得到混合对照品二溶液，其中知母皂苷bⅱ含量109.11μg/ml、知母皂苷bⅲ含量45.53μg/m、酸枣仁皂苷a32.23μg/ml、酸枣仁皂苷b100.43μg/ml、松苓新酸8.02μg/ml。

13、作为本发明的进一步改进，所述检测采用pda和elsd为检测器。

14、本发明另一方面提供了一种由上述方法构建得到的酸枣仁汤uplc特征图谱。

15、本发明再一方面提供了一种酸枣仁汤uplc特征图谱，具体如下：

16、包括有32个共有特征峰，以斯皮诺素为参比峰，各特征峰与参比峰的相对保留时间在规定值的±10％范围之内，1-26号各峰的规定值为0.19、0.43、0.47、0.57、0.61、0.65、0.67、0.71、0.75、0.92、0.96、1.00、1.03、1.46、1.48、1.54、1.55、1.57、1.60、1.64、1.66、1.67、2.04、2.35、2.41和2.49，以知母皂苷b2为参比峰，各特征峰与参比峰的相对保留时间在规定值的±10％范围之内，27-32号各峰的规定值为0.91、1.00、1.24、1.28、1.31、1.77。

17、本发明再一方面提供了一种酸枣仁汤的质量控制方法，包括将待测酸枣仁汤的特征图谱与前述构建方法得到的图谱进行比较的步骤。

18、采用上述技术方案所产生的有益效果在于：

19、本发明提供一种酸枣仁汤特征图谱的构建及质量检测方法，确定了绿原酸等32各共有特征峰，所构建的uhplc特征图谱中色谱峰实现较好分离，特征图谱信息丰富，色谱峰形好，检测方法具有良好的稳定性、重复性和精密度。

20、本发明构建的酸枣仁汤的uhplc特征图谱，填补了现有技术中存在的不足，为快速检测酸枣仁汤的质量提供了基础保障。

21、本方法操作简单，具有精密度高、稳定性好、重复性好及准确度高等优势，为中药材质量鉴别提供有效依据。

技术特征：

1.一种酸枣仁汤指纹图谱的构建方法，其特征在于，其包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种酸枣仁汤指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述步骤(2)中超高效液相色谱的条件还包括：流速为0.2ml/min，检测波长为90nm，柱温为30℃，进样量为1μl。

3.根据权利要求1所述的一种酸枣仁汤指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述供试品为酸枣仁汤冻干粉，溶剂为70％甲醇。

4.根据权利要求1所述的一种酸枣仁汤指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述酸枣仁汤冻干分的制备方法为：炒酸枣仁138g，茯苓27.6g，知母27.6g，川芎27.6g，甘草13.8g。工艺确定为：炒酸枣仁药材，粗碎，加水1600ml，煮至1200ml，再加入茯苓、知母、川芎、甘草，煮至600ml，过滤，浓缩，冻干，得冻干粉。

5.根据权利要求1所述的一种酸枣仁汤指纹图谱的构建方法，其特征在于，还包括采用对照品制备对照液的步骤，以及将步骤(2)中的供试品溶液替换为对照品溶液，得到对照品特征图谱的步骤。

6.根据权利要求5所述的一种酸枣仁汤指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述对照品溶液分为对照品溶液一和对照品溶液二；

7.根据权利要求1所述的一种酸枣仁汤指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述检测采用pda和elsd为检测器。

8.一种如权利要求1-7任一项所述的方法构建得到的酸枣仁汤uplc特征图谱。

9.一种酸枣仁汤uplc特征图谱，其特征在于，具体如下：

10.一种酸枣仁汤的质量控制方法，其特征在于包括将待测酸枣仁汤的特征图谱与权利要求1-7任一项构建方法得到的图谱进行比较的步骤。

技术总结
本发明及属于中药检测技术领域，具体涉及酸枣仁汤的UPLC特征图谱构建方法及质量控制方法。本发明的构建方法以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.1%甲酸水为流动相A，乙腈为流动相B，采用梯度洗脱程序，由此得到的特征图谱中色谱峰保留时间分布均匀，峰对称性好，分离度符合要求，基线平稳，精确度高。同时，本发明指认了32个共有峰，各峰响应较好，规定各特征峰的相对保留时间，特征峰容易定位。本发明的构建方法重现良好，准确可靠，检测方法精度度、稳定度高，为酸枣仁汤的科学质控提供了可行的方法。

技术研发人员：靳怡然,陈伟燕,刘敏彦
受保护的技术使用者：河北医科大学第二医院
技术研发日：
技术公布日：2024/5/8