一种CA50抗体标记吖啶的保存液及制备方法与流程

本发明属于化学发光免疫分析领域，涉及保存液及制备方法，尤其涉及一种ca50抗体标记吖啶的保存液及制备方法。

背景技术：

1、糖类抗原50(以下简称为“ca50”)是以唾液酸脂和唾液酸糖蛋白为主的肿瘤相关糖类抗原，见于胚胎组织或肿瘤组织，特别在肿瘤组织中ca50的含量大大超过在正常组织里的含量。ca50作为一种肿瘤标志物，目前临床的检测方法有酶联免疫法和化学发光免疫分析法，其中化学发光免疫分析法具有灵敏度高、特异性强、高通量、自动化程度高等优点，已成为临床免疫诊断的支柱方法。化学发光免疫分析法中的直接化学发光法，是以化学发光底物直接标记抗原或抗体的免疫测定方法，应用更为广泛。

2、吖啶酯是一种理想的发光底物，主要是因为吖啶酯在化学结构上有产生发光的特殊基团，在碱性条件下，吖啶酯分子受到过氧化氢攻击可生成二氧乙烷，二氧乙烷不稳定而分解为co2和电子激发态的n-甲基吖啶酮，当其回到基态时发出波长为430nm的光，这个过程不需要催化剂且发光系统简单。但是，吖啶酯标记抗体的稳定性较差、易水解，结合物稀释至工作浓度时，由于结合物浓度的降低会引起的试剂的稳定性下降，从而导致试剂的保存期缩短，造成发光值的降低，使得检验结果不准确。

3、为了提高试剂中吖啶酯标记抗体的保存稳定性，一方面可以优化吖啶标记抗原或抗体的工艺，另一方面可以优化吖啶标记物的保存液。但是对工艺优化的过程非常复杂，所涉及的物料价格昂贵，所以，针对吖啶标记物的保存液进行优化的研究较多。

4、如文献号为202310474979.5的中国发明专利申请《一种吖啶酯标记抗体保存液的制备方法》，对吖啶酯标记抗体保存液的组分进行改良，试验结果表明在37℃条件下处理3天、7天和14天，利用该方法所配置的吖啶酯标记抗体进行实验结果的发光值明显高于普通保存液配制的吖啶酯标记抗体液，该保存液在制备过程中需要加入n-苄氧羰基-l-苯丙氨酸-小鼠免疫球蛋白复合物，但是，该蛋白复合物的制备过程较为复杂，需要经过24h以上的透析。这就导致保存液的制备方法较为复杂，不适合大规模推广应用。

5、所以，仍需要对ca50抗体标记吖啶的保存液的组分进行研究，进而开发一种组分简单、制备成本低且制备方法简单的保存液。

技术实现思路

1、本发明的目的是针对一种ca50抗体标记吖啶的保存液及制备方法进行优化和改进，不仅提高了吖啶标记物的稳定性，还简化了组分和制备方法。

2、本发明采用的技术方案提供了一种ca50抗体标记吖啶的保存液，关键在于，上述的ca50抗体标记吖啶的保存液的组分包括水、水溶性蛋白质、水溶性多糖、表面活性剂、缓冲盐和防腐剂，ph值为6.5～7.0。

3、进一步的，上述的水溶性蛋白质具体为牛血清白蛋白，在保存液中所述的水溶性蛋白质的质量浓度为5g/l～8g/l。

4、更进一步的，上述的水溶性多糖为海藻糖或蔗糖中的任意一种，在保存液中所述的水溶性多糖的质量浓度为5g/l～10g/l。

5、具体的，上述的表面活性剂为月桂醇磺基乙酸酯钠，在保存液中所述的表面活性剂的质量浓度为2g/l～6g/l。

6、更具体的，上述的缓冲盐pbs，mes，bis-tris或hepes中的任意一种，在保存液中所述的缓冲盐的摩尔浓度为0.08mol/l～0.12mol/l。

7、优选的，上述的防腐剂为proclin200或proclin300中的任意一种，在保存液中所述的防腐剂的质量浓度为0.4g/l～1g/l。

8、一种ca50抗体标记吖啶的保存液的制备方法，用于制备上述ca50抗体标记吖啶的保存液，关键在于，具体步骤包括：

9、s1、称取纯化水，水溶性蛋白质，水溶性多糖，表面活性剂，缓冲盐和防腐剂；

10、s2、向纯化水中加入并依次溶解缓冲盐，水溶性蛋白质，水溶性多糖，表面活性剂和防腐剂，均速搅拌至混合均匀，将ph值调整至6.5～7.0；

11、s3、用纯化水定容后，用0.2μm或0.45μm的滤膜过滤，制备得到ca50抗体标记吖啶的保存液。

12、本发明与现有技术相比，具有以下有益效果：

13、本发明的ca50抗体标记吖啶的保存液无论在37℃的加速稳定性条件下，还是在2℃～8℃条件长期贮存，均表现出稳定的性质，可以延长保存时间和保存效果，避免吖啶酯标记抗体被降解。本发明所制备的保存液的ph值为中性偏酸性，更利于吖啶酯标记抗体的长期保存。

14、月桂醇磺基乙酸酯钠是一种阴离子表面活性剂，化学性质温和且稳定，不易分解，具有抗免疫抑制活性。而常用的其他表面活性剂如吐温-20、吐温-80为非离子表面活性剂，亲水性强，在电解质、弱酸和弱碱稳定，遇到强酸强碱逐渐皂化，当储存时间长时就会产生过氧化物。triton x-100和triton x-405为非离子表面活性剂，在生化应用中，triton x-100通常作为细胞破膜剂和细胞通透剂，可以溶解细胞膜上的脂质，在化学试剂中，它对稳定性没有直接的作用。triton x-405具有很好的分散作用以及乳化作用，它可以提升乳液的稳定性及成品的冻融稳定性，但对化学试剂中的稳定性效果一般。

15、本发明中不必使用金属螯合剂、过多种类和大量的蛋白质类物质和氨基酸类物质，这是因为在本发明的组分基础上额外加入金属螯合剂和氨基酸，对保存液的稳定性影响不大。而在额外添加氨基酸的组别中，发光值均有所降低，这可能是因为水溶性氨基酸分子结构中含有氨基和羧基，即碱性基团和酸性基团，在水溶液中可发生电离，造成因组分过于复杂而导致测试时发光值降低。

16、此外，本发明所制备的保存液流动性好，在使用时不挂壁、不起泡，降低了操作误差，有助于在一定程度上提高检验结果的准确程度；本发明的简单，制备过程也容易操作，大大降低了保存液的生产成本。

技术特征：

1.一种ca50抗体标记吖啶的保存液，其特征在于，所述的ca50抗体标记吖啶的保存液的组分包括水、水溶性蛋白质、水溶性多糖、表面活性剂、缓冲盐和防腐剂，ph值为6.5～7.0。

2.根据权利要求1所述的一种ca50抗体标记吖啶的保存液，其特征在于，所述的水溶性蛋白质具体为牛血清白蛋白，在保存液中所述的水溶性蛋白质的质量浓度为5g/l～8g/l。

3.根据权利要求1所述的一种ca50抗体标记吖啶的保存液，其特征在于，所述的水溶性多糖为海藻糖或蔗糖中的任意一种，在保存液中所述的水溶性多糖的质量浓度为5g/l～10g/l。

4.根据权利要求1所述的一种ca50抗体标记吖啶的保存液，其特征在于，所述的表面活性剂为月桂醇磺基乙酸酯钠，在保存液中所述的表面活性剂的质量浓度为2g/l～6g/l。

5.根据权利要求1所述的一种ca50抗体标记吖啶的保存液，其特征在于，所述的缓冲盐pbs，mes，bis-tris或hepes中的任意一种，在保存液中所述的缓冲盐的摩尔浓度为0.08mol/l～0.12mol/l。

6.根据权利要求1所述的一种ca50抗体标记吖啶的保存液，其特征在于，所述的防腐剂为proclin200或proclin300中的任意一种，在保存液中所述的防腐剂的质量浓度为0.4g/l～1g/l。

7.一种ca50抗体标记吖啶的保存液的制备方法，用于制备如权利要求1所述ca50抗体标记吖啶的保存液，其特征在于，具体步骤包括：

技术总结
本发明公开了一种CA50抗体标记吖啶的保存液及制备方法，所公开的CA50抗体标记吖啶的保存液的组分包括水、水溶性蛋白质、水溶性多糖、表面活性剂、缓冲盐和防腐剂，pH值为6.5～7.0；本发明的的保存液无论在37℃的加速稳定性条件下，还是在2℃～8℃条件长期贮存，均表现出稳定的性质，可以延长保存时间和保存效果，避免吖啶酯标记抗体被降解，此外本发明还有助于提高检验的准确性，适用性也更广。

技术研发人员：闫承夫,梁晓丹,陈钰茜,胡洋锋,杨美玲
受保护的技术使用者：河北医陆生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/5/29