一种高效液相色谱串联质谱法测定化妆品禁用植物生物碱的方法与流程

本发明涉及检测，更具体地说，它涉及一种高效液相色谱串联质谱法测定化妆品禁用植物生物碱的方法。

背景技术：

1、化妆品禁用植物原料中有毒组分最为普遍的是生物碱类化合物。如果化妆品中违规使用这些禁用植物原料，这些生物碱对人体尤其皮肤会产生不良反应。目前尚缺少有效的方法检测化妆品是否添加了禁用植物原料。通过检测化妆品中生物碱类化合物可以预警是否可能添加禁用植物原料。

2、目前测定生物碱种类最多的文献报道采用2％甲酸的75％甲醇为提取溶剂，超声提取，测定精油化妆品中31种生物碱。存在的问题主要是测定的生物碱种类极为有限，最多的测定31种生物碱，而且生物碱并不全都是禁用植物中的生物碱，测定的基质也较为有限。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种高效液相色谱串联质谱法测定化妆品禁用植物生物碱的方法，以解决上述问题。

2、本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：一种高效液相色谱串联质谱法测定化妆品禁用植物生物碱的方法，包括以下步骤：

3、s1.配制生物碱混合标准工作溶液；

4、s2.将样品0.8～1.2g置于50ml离心管中，再加入10ml0.05～0.5％甲酸乙腈溶液，涡旋混匀5min，超声提取15min，再以8000r/min离心5min，10000

5、移取5ml提取液至净化管中，充分涡旋净化后再离心，取适量净化液过0.22μm有机相滤膜后，待上机测试；其中，0.05～0.5％甲酸乙腈溶液由0.05～0.5％的甲酸水溶液1份，3份乙腈，体积比混合而成；

6、s3.利用超高效液相色谱串联质谱法对步骤s2处理后的试样进行分析，同时检测试样中的禁用植物生物碱的种类和含量。

7、通过采用上述技术方案，发明人综合考虑了化妆品基质复杂的因素、生物碱极性大且在酸性溶液中溶解性较好的因素，经过实验论证得出，在同时测定化妆品中55禁用生物碱的情况下，采用0.05～0.5％甲酸乙腈溶液作为提取溶剂的精密度远高于甲酸-甲醇溶液，同时实验得出，采用的甲酸乙腈溶液中，采用比例为1：3的甲酸乙腈溶液相较于采用比例为1：4的甲酸乙腈溶液具有更优异的回收效果，回收率更高。

8、本发明进一步设置为：所述植物生物碱包括金雀花碱、n-甲基野靛碱、一叶萩碱、氧化槐定碱、石蒜碱、野百合碱、苦参碱、樟柳碱、槐定碱、槐果碱、加兰他敏、麻黄碱、石蒜胺、氧化槐果碱、伪麻黄碱、氧化苦参碱、消旋山莨菪碱、东莨菪碱、钩吻碱、阿托品、马钱子碱、钩吻素子、钩吻素己、育亨宾、原阿片碱、苯甲酰新乌头碱、白屈菜碱、别隐品碱、澳洲茄碱、高乌甲素、四氢小檗碱、澳洲茄边碱、黄连碱、秋水仙碱、阿马碱、长春新碱、苯甲酰乌头原碱、长春质碱、苯甲酰次乌头碱、蒜藜芦碱、二氢血根碱、血根碱、长春碱、文多灵、藜芦碱、小檗碱、藜芦定、乌头碱、白屈菜红碱、乌头碱、次乌头碱、粗茎乌头碱甲、雷公藤吉碱、雷公藤次碱和二氢白屈菜红碱。

9、本发明进一步设置为：所述净化管中填充有25mgpsa、25mgc18和150mgmgso4。

10、通过采用上述技术方案，本方案采用quechers方法，利用净化管的吸附剂填料与提取液中的杂质相互作用，吸附杂质从而达到除杂净化的目的。

11、本发明进一步设置为：所述s3中色谱条件为：

12、色谱柱：lunaomegapolarc18(2.1mm×100mm×1.6μm)；流速：0.3ml/min；柱温：30℃；进样量：1μl；流动相a：乙腈；流动相b：水。

13、本发明进一步设置为：所述流动相的梯度洗脱程序为：

14、0.00min：流动相a体积分数2.0％、流动相b体积分数98.0％；

15、1.00min：流动相a体积分数2.0％、流动相b体积分数98.0％；

16、3.00min：流动相a体积分数12.0％、流动相b体积分数88.0％；

17、7.00min：流动相a体积分数40.0％、流动相b体积分数60.0％；

18、13.00min：流动相a体积分数93.0％、流动相b体积分数7.0％；

19、13.10min：流动相a体积分数98.0％、流动相b体积分数2.0％；

20、15.00min：流动相a体积分数98.0％、流动相b体积分数2.0％；

21、15.10min：流动相a体积分数2.0％、流动相b体积分数98.0％；

22、17.00min：流动相a体积分数2.0％、流动相b体积分数98.0％。

23、本发明进一步设置为：所述流动相a中还包括含体积分数0.01％的甲酸和2mmol/l甲酸铵；所述流动相b中还包括含体积分数0.01％的甲酸和2mmol/l甲酸铵。

24、本发明进一步设置为：所述s3中质谱条件为：

25、电离方式：电喷雾电离，正离子(esi+)模式；离子源温度：550℃；喷雾电压：5500v；气帘气压力35psi；雾化气压力55psi；辅助气压力：55psi；扫描模式：多反应监测(mrm)模式。

26、本发明进一步设置为：所述生物碱混合标准工作溶液按照以下方法进行制备：分别称取生物碱标准品各10mg，用甲醇溶解配成单标储备液，然后分别吸取适量单标储备液，用甲醇稀释成质量浓度为1000μg/l的生物碱混合标准中间液；吸取适量的生物碱混合标准溶液空白基质提取液稀释定容，得到质量浓度分别为10、20、50、100、200μg/l的混合标准工作溶液。

27、本发明进一步设置为：所述禁用植物生物碱在10-200μg/l的浓度范围内，具有良好的线性关系。

28、综上所述，本发明具有以下有益效果：1、优化了色谱质谱条件、一针进样同时检测至少55种违禁植物组分，样品检测灵敏度可达ng级水平。2、化妆品违禁植物组分分析的质谱库平台可以应用于食品、药品和生物样品中相应植物组分的筛查和阳性确证，完善我国化妆品中非法添加和残留植物组分的检测体系。3、通过采用提取和净化相结合的前处理方法，优化前处理操作，提高化妆品前处理的准确度和效率。

技术特征：

1.一种高效液相色谱串联质谱法测定化妆品禁用植物生物碱的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种高效液相色谱串联质谱法测定化妆品禁用植物生物碱的方法，其特征在于，所述生物碱包括金雀花碱、n-甲基野靛碱、一叶萩碱、氧化槐定碱、石蒜碱、野百合碱、苦参碱、樟柳碱、槐定碱、槐果碱、加兰他敏、麻黄碱、石蒜胺、氧化槐果碱、伪麻黄碱、氧化苦参碱、消旋山莨菪碱、东莨菪碱、钩吻碱、阿托品、马钱子碱、钩吻素子、钩吻素己、育亨宾、原阿片碱、苯甲酰新乌头碱、白屈菜碱、别隐品碱、澳洲茄碱、高乌甲素、四氢小檗碱、澳洲茄边碱、黄连碱、秋水仙碱、阿马碱、长春新碱、苯甲酰乌头原碱、长春质碱、苯甲酰次乌头碱、蒜藜芦碱、二氢血根碱、血根碱、长春碱、文多灵、藜芦碱、小檗碱、藜芦定、乌头碱、白屈菜红碱、乌头碱、次乌头碱、粗茎乌头碱甲、雷公藤吉碱、雷公藤次碱和二氢白屈菜红碱。

3.根据权利要求1所述的一种高效液相色谱串联质谱法测定化妆品禁用植物生物碱的方法，其特征在于，所述净化管中填充有25mgpsa、25mgc18和150mgmgso4。

4.根据权利要求1所述的一种高效液相色谱串联质谱法测定化妆品禁用植物生物碱的方法，其特征在于，所述s3中色谱条件为：

5.根据权利要求4所述的一种高效液相色谱串联质谱法测定化妆品禁用植物生物碱的方法，其特征在于，所述流动相的梯度洗脱程序为：

6.根据权利要求4所述的一种高效液相色谱串联质谱法测定化妆品禁用植物生物碱的方法，其特征在于，所述流动相a中还包括含体积分数0.01％的甲酸和2mmol/l的甲酸铵；所述流动相b中还包括含体积分数0.01％的甲酸和2mmol/l的甲酸铵。

7.根据权利要求1所述的一种高效液相色谱串联质谱法测定化妆品禁用植物生物碱的方法，其特征在于，所述s3中质谱条件为：

8.根据权利要求1所述的一种高效液相色谱串联质谱法测定化妆品禁用植物生物碱的方法，其特征在于，所述生物碱混合标准工作溶液按照以下方法进行制备：分别称取生物碱标准品各10mg，用甲醇溶解配成单标储备液，然后分别吸取适量单标储备液，用甲醇稀释成质量浓度为1000μg/l的生物碱混合标准中间液；吸取适量的生物碱混合标准溶液空白基质提取液稀释定容，得到质量浓度分别为10、20、50、100、200μg/l的混合标准工作溶液。

9.根据权利要求1所述的一种高效液相色谱串联质谱法测定化妆品禁用植物生物碱的方法，其特征在于，所述禁用植物生物碱在10-200μg/l的浓度范围内，具有良好的线性关系。

技术总结
本发明公开了一种高效液相色谱串联质谱法测定化妆品禁用植物生物碱的方法，包括以下步骤：S1.配制生物碱混合标准工作溶液；S2.将样品0.8～1.2g置于50ml离心管中，再加入10mL0.05～0.5％甲酸乙腈溶液，涡旋混匀5min，超声提取15min，再以8000r/min离心5min，移取5mL提取液至净化管中，充分涡旋净化后再离心，取适量净化液过0.22μm有机相滤膜后，待上机测试；其中，甲酸乙腈溶液由0.05～0.5％的甲酸水溶液1份，3份乙腈，体积比混合而成；S3.利用超高效液相色谱串联质谱法对步骤S2处理后的试样进行分析，同时检测试样中的禁用植物生物碱的种类和含量。具有可同时准确测定化妆品中55种禁用植物生物碱的效果。

技术研发人员：蒋武,项林敏,周建峰,林君,邵晓林
受保护的技术使用者：温州市质量技术检测科学研究院
技术研发日：
技术公布日：2024/11/14