油籽油料中真菌毒素的快速检测方法与流程

本发明涉及油籽油料检测，是一种油籽油料中真菌毒素的快速检测方法。

背景技术：

1、真菌毒素（mycotoxins），又称霉菌毒素，是在适宜的环境条件下由产毒真菌产生的次级代谢产物。油籽和油料在生长、收获及贮藏过程中，由于贮存条件不当、运输条件或气候异常等因素的影响，真菌毒素会迅速累积，从而造成毒素污染。我国作为农业大国，每年因霉变而导致大量粮食不能食用。根据联合国粮农组织（fao）统计，全球农产品污染率高达25%，损失达10亿吨。因此，为了控制食物链中的真菌毒素，需要对其进行检测。世界各国均对植物油脂中的部分真菌毒素含量制定了相关规定。我国仅对食用植物油中的黄曲霉毒素b1进行了限量，gb 2761-2017《食品安全国家标准食品中真菌毒素限量》规定食用油中黄曲霉毒素b1含量不得超过10μg•kg-1，其中花生油和玉米油不得超过20μg•kg-1。

2、近年来，液相色谱串联质谱法（lc-ms/ms）是目前应用于真菌毒素检测最普遍的方法，根据不同真菌毒素化合物的理化性质差异，在色谱柱中将极性不同的化合物混合溶液洗脱分离，该方法分离性能好、质谱定性能力强、准确度和灵敏度高，适用于多种真菌毒素的定性定量分析，但检测准确性及灵敏度非常依赖前处理过程中的基质净化过程，需要去除基质中的大分子杂质和其他干扰因素。目前，常用于测定食品中真菌毒素的前处理方法有液液萃取法（lle）、固相萃取法（spe）和免疫亲和层析法等。这些前处理方法耗时较长，操作过程复杂，检测效率低，成本高，并且只对一种或一类结构相似的真菌毒素提取效果好，但对高油脂样品中多种真菌毒素同步提取的研究较少，因此需要建立一种能够快速同步检测油籽油料中多种真菌毒素的方法。

技术实现思路

1、本发明提供了一种油籽油料中真菌毒素的快速检测方法，克服了上述现有技术之不足，其能有效解决现有食品中真菌毒素的前处理方法操作过程复杂，检测效率低，成本高，无法实现同时检测的问题。

2、本发明的技术方案是通过以下措施来实现的：一种油籽油料中真菌毒素的快速检测方法，包括以下步骤：

3、配制真菌毒素的基质标准工作溶液；

4、采用羧基-氨基化多壁碳纳米管对油籽油料样品进行净化处理，得到样品提取液；

5、采用液相色谱串联质谱对真菌毒素的基质标准工作溶液和样品提取液进行分离和检测；

6、根据液相色谱串联质谱的检测结果得到真菌毒素的标准曲线，结合真菌毒素的标准曲线得到样品提取液中真菌毒素的含量；

7、其中，羧基-氨基化多壁碳纳米管由多壁碳纳米管依次经过羧基化改性和氨基化改性得到。

8、下面是对上述发明技术方案的进一步优化或/和改进：

9、上述真菌毒素包括黄曲霉毒素b1、黄曲霉毒素b1、黄曲霉毒素g1、黄曲霉毒素g2、玉米赤酶烯酮、赭曲霉毒素a、赭曲霉毒素b、t-2毒素、伏马毒素b1和伏马毒素b2。

10、上述羧基-氨基化多壁碳纳米管的直径为15nm至25nm。

11、上述多壁碳纳米管依次经过羧基化改性和氨基化改性的操作包括：

12、采用具有氧化性的混合强酸对多壁碳纳米管进行羧化，得到羧基化多壁碳纳米管；

13、羧基化多壁碳纳米管和乙二胺在缩合剂dcc的作用下，于100℃至130℃反应20h至30h，得到羧基-氨基化多壁碳纳米管。

14、上述混合强酸为体积比3:1的浓硫酸和浓硝酸的混合液；缩合剂dcc的用量为每200mg羧基化多壁碳纳米管添加缩合剂dcc 3g至5g；乙二胺的用量为每200mg羧基化多壁碳纳米管添加乙二胺20ml至30ml。

15、上述采用羧基-氨基化多壁碳纳米管对油籽油料样品进行净化处理的操作为：

16、向油籽样品或油料样品中加入提取剂，分离后取上清液；

17、向上清液中加入所需量的羧基-氨基化多壁碳纳米管，混合后分离，得到样品提取液。

18、上述提取剂包括提取溶剂、无水硫酸镁和氯化钠；其中，提取溶剂为体积比为80:20的乙腈-水混合溶液，并添加乙腈-水混合溶液总体积2%的甲酸。

19、上述每5.0g油籽样品或油料样品中羧基-氨基化多壁碳纳米管的添加量为20mg。

20、上述液相色谱串联质谱的色谱条件为：色谱柱为c18反相色谱柱，流速0.25ml/min，柱温30℃至40℃；采用正负离子模式和梯度洗脱；梯度洗脱流动相a为0.1%甲酸-水溶液，流动相b为0.1%甲酸-甲醇溶液。

21、上述液相色谱串联质谱的质谱条件为：离子源为电喷雾离子源（esi）；离子源温度为550℃；离子喷雾电压为正离子模式5500v，负离子模式-4500v；采用多反应监测（mrm）模式进行监测。

22、本发明采用经过羧基化和氨基化改性的多壁碳纳米管结合液相色谱串联质谱对油籽油料中的真菌毒素进行测定，该方法操作简便快捷、大大缩短了前处理时间、有机溶剂消耗少、整个过程绿色环保，适用于油籽油料中多种类真菌毒素的测定。

技术特征：

1.一种油籽油料中真菌毒素的快速检测方法，其特征在于包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的油籽油料中真菌毒素的快速检测方法，其特征在于真菌毒素包括黄曲霉毒素b1、黄曲霉毒素b1、黄曲霉毒素g1、黄曲霉毒素g2、玉米赤酶烯酮、赭曲霉毒素a、赭曲霉毒素b、t-2毒素、伏马毒素b1和伏马毒素b2。

3.根据权利要求1或2所述的油籽油料中真菌毒素的快速检测方法，其特征在于羧基-氨基化多壁碳纳米管的直径为15nm至25nm。

4.根据权利要求1至3任一项所述的油籽油料中真菌毒素的快速检测方法，其特征在于多壁碳纳米管依次经过羧基化改性和氨基化改性的操作包括：

5.根据权利要求4所述的油籽油料中真菌毒素的快速检测方法，其特征在于混合强酸为体积比3:1的浓硫酸和浓硝酸的混合液；或/和，缩合剂dcc的用量为每200mg羧基化多壁碳纳米管添加缩合剂dcc 3g至5g；或/和，乙二胺的用量为每200mg羧基化多壁碳纳米管添加乙二胺20ml至30ml。

6.根据权利要求1至5任一项所述的油籽油料中真菌毒素的快速检测方法，其特征在于采用羧基-氨基化多壁碳纳米管对油籽油料样品进行净化处理的操作为：

7.根据权利要求6所述的油籽油料中真菌毒素的快速检测方法，其特征在于提取剂包括提取溶剂、无水硫酸镁和氯化钠；其中，提取溶剂为体积比为80:20的乙腈-水混合溶液，并添加乙腈-水混合溶液总体积2%的甲酸。

8.根据权利要求6或7所述的油籽油料中真菌毒素的快速检测方法，其特征在于每5.0g油籽样品或油料样品中羧基-氨基化多壁碳纳米管的添加量为20mg。

9.根据权利要求1至8任一项所述的油籽油料中真菌毒素的快速检测方法，其特征在于液相色谱串联质谱的色谱条件为：色谱柱为c18反相色谱柱，流速0.25ml/min，柱温30℃至40℃；采用正负离子模式和梯度洗脱；梯度洗脱流动相a为0.1%甲酸-水溶液，流动相b为0.1%甲酸-甲醇溶液。

10.根据权利要求1至9任一项所述的油籽油料中真菌毒素的快速检测方法，其特征在于液相色谱串联质谱的质谱条件为：离子源为电喷雾离子源；离子源温度为550℃；离子喷雾电压为正离子模式5500v，负离子模式-4500v；采用多反应监测模式进行监测。

技术总结
本发明涉及油籽油料检测技术领域，是一种油籽油料中真菌毒素的快速检测方法，该方法包括：配制真菌毒素的基质标准工作溶液；采用羧基‑氨基化多壁碳纳米管对油籽油料样品进行净化处理，得到样品提取液；采用液相色谱串联质谱对真菌毒素的基质标准工作溶液和样品提取液进行分离和检测；根据液相色谱串联质谱的检测结果得到真菌毒素的标准曲线，结合真菌毒素的标准曲线得到样品提取液中真菌毒素的含量。本发明建立了一种能够快速同步检测油籽油料中多种真菌毒素的方法，可实现油籽油料中多种真菌毒素的同时提取和检测，该方法操作简便快捷、大大缩短了前处理时间、有机溶剂消耗少、整个过程绿色环保，适用于油籽油料中多种类真菌毒素的测定。

技术研发人员：王静静,吴小勇,巩志国,王猛,姚伟琴,王思源
受保护的技术使用者：乌鲁木齐海关技术中心
技术研发日：
技术公布日：2024/7/15