一种细胞固定脱水协同处理试剂及其应用的制作方法

本发明属于生物，具体涉及一种细胞固定脱水协同处理试剂及其应用。

背景技术：

1、甲醛是一种典型的交联固定剂，使蛋白质侧链彼此形成牢固的共价键，从而防止酶解作用和微生物侵蚀对标本的结构与化学成分的破坏。用甲醛对细胞进行固定后再进行脱水、透明、包埋、切片、溶解、复性等处理加工成为液态的细胞质控品。

2、使用4％甲醛溶液(10％福尔马林)进行组织细胞固定，然后使用梯度乙醇进行脱水是对组织细胞石蜡包埋的常规预处理方式；或者使用体积占90％的95％乙醇和体积占10％的40％甲醛配制的固定液直接进行固定加脱水的联合作用。

3、常规处理方法脱水过程较为温和，对于细胞形态的保持效果好，但是固定和脱水都是需要较长时间的步骤：固定一般在2小时至24小时；梯度脱水需要4小时～6小时。甲醛乙醇联合固定液可以固定和脱水同步进行，节省了大量的时间，但是直接在高浓度乙醇中进行脱水会使细胞迅速产生皱缩，破坏细胞本身形态。而且质控品细胞相较于组织细胞来说没有结缔组织的保护和包围，对于脱水过程的条件变化更为敏感，一旦失去细胞形态则丢失了其作为质控品的特性。

4、因此开发出一款适合制备细胞质控品的细胞固定脱水协同处理试剂是亟需解决的问题。

技术实现思路

1、为了解决上述问题中的至少一种，本发明提供了一种细胞固定脱水协同处理试剂及其应用。采用该试剂处理的细胞能够保持原有形态不被破坏，并且固化脱水在同一步骤进行，减少实验步骤，节约实验总时间。

2、为了达到上述目的，本发明采用了如下技术手段：

3、本发明的第一方面提供了一种细胞固定脱水协同处理试剂，所述试剂包括甲醛、乙醇、pb缓冲溶液。

4、在本发明的具体实施方案中，所述试剂中各组分按照体积比为：甲醛3.6-4％、乙醇70-80％、pb缓冲溶液0.9-1％，采用去离子水补足体积。在一些优选实施例中，所述试剂中各组分按照体积比为：40％甲醛溶液10％、无水乙醇80％、10x pb溶液10％。

5、在本发明的另一种实施方案中，所述试剂还包括dmso。

6、在本发明的具体实施方案中，所述dmso的添加量按照体积比为0.4-0.6％；在一些优选实施例中，所述dmso的添加量按照体积比为0.5％。

7、本发明的第二方面提供了第一方面所述的细胞固定脱水协同处理试剂在制备适用于组织细胞检测和分析中的质控品及临床细胞样本中的应用。

8、在本发明的一些实施方案中，所述组织细胞检测和分析包括免疫细胞化学、原位杂交中的至少一种。

9、进一步地，所述应用包括如下步骤：

10、(1)配制细胞固定脱水协同处理试剂：按照预配制的处理试剂的体积，按照体积比取各试剂：甲醛3.6-4％、乙醇70-80％、pb缓冲溶液0.9-1％，dmso 0.4-0.6％，采用去离子水定容，混合均匀；

11、(2)待处理细胞样本用pbs重悬后离心，并清洗一次后弃清洗液，加入步骤(1)中的细胞固定脱水协同处理试剂处理1.5-2.5小时；

12、(3)用无水乙醇脱水处理0.5-1.5小时；

13、后续还包括：用二甲苯进行透明；用石蜡包埋成石蜡块；石蜡切片制备细胞悬液以及免疫组织化学染色等步骤。

14、本发明的第三方面提供了一种免疫细胞化学检测试剂盒，包括第一方面所述的细胞固定脱水协同处理试剂。

15、本发明的第五方面提供了一种原位杂交试剂盒，包括第一方面所述的细胞固定脱水协同处理试剂。

16、本发明的有益效果

17、相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：本发明提供了一种固定脱水一体化处理试剂，实现将固化和脱水步骤在同一步骤内协同处理完成，处理后的细胞形态不被破坏，并且不影响固定和脱水效果，较传统的分别固定和脱水的操作，一方面减少了实验步骤，另一方面也节约了整体实验时间，总实验时长节约50％；可应用在组织细胞检测和分析方面。

技术特征：

1.一种细胞固定脱水协同处理试剂，其特征在于：所述试剂包括甲醛、乙醇以及pb缓冲溶液。

2.根据权利要求1所述的一种细胞固定脱水协同处理试剂，其特征在于：所述试剂中各组分按照体积比为：甲醛3.6-4％、乙醇70-80％、pb缓冲溶液0.9-1％，采用去离子水补足体积。

3.根据权利要求1所述的一种细胞固定脱水协同处理试剂，其特征在于：所述乙醇为无水乙醇。

4.根据权利要求2所述的一种细胞固定脱水协同处理试剂，其特征在于：所述试剂还包括dmso。

5.根据权利要求3所述的一种细胞固定脱水协同处理试剂，其特征在于：所述dmso的添加量按照体积比为0.4-0.6％。

6.权利要求1-5任一项所述的细胞固定脱水协同处理试剂在制备适用于组织细胞检测和分析中的质控品及临床细胞样本中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述组织细胞检测和分析包括免疫细胞化学以及原位杂交中的一种。

8.一种免疫组织化学检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-5任一项所述的细胞固定脱水协同处理试剂。

9.一种原位杂交试剂盒，其特征在于：包括权利要求1-5任一项所述的细胞固定脱水协同处理试剂。

技术总结
本发明公开了一种细胞固定脱水协同处理试剂及其应用，所述试剂中各组分按照体积比为：甲醛3.6‑4％、乙醇70‑80％、PB溶液0.9‑1％，采用去离子水补足体积，还包括体积比为0.4‑0.6％DMSO。该细胞固定脱水协同处理试剂实现将固化和脱水步骤在同一步骤内协同处理完成，处理后的细胞形态不被破坏，并且不影响固定和脱水效果，较传统的分别固定和脱水的操作，一方面减少了实验步骤，另一方面也节约了整体实验时间，总实验时长节约50％。

技术研发人员：胡旻,陈尔净,吴佳,李明振,蔡宁
受保护的技术使用者：杭州百凌生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/7/11