一种用于肺移植后排斥反应诊断的标志物及其应用的制作方法

本发明属于生物医学，涉及一种用于肺移植后排斥反应诊断的标志物及其应用。

背景技术：

1、移植后排斥反应是肺移植后的严重并发症，移植后的第一年发生率约为28％～65％。急性排斥反应是移植后前两个月最常见且最严重的并发症，可以导致急性移植物功能衰竭，进而导致慢性肺移植物功能障碍，增加肺移植受者的死亡率，而慢性排斥反应是影响肺移植远期存活率的主要原因。对排斥反应的及时诊断可以显著提高患者的生存率。

2、目前肺移植后排斥反应诊断的金标准是经气管镜肺活检(transbronchial lungbiopsy，tblb)后病理检查，但此方法存在以下几个方面的问题：(1)此检查方法为有创性检查，有导致患者出现气胸、出血、感染的风险；(2)病理检查耗时长，通常需要3-5天，易延误最佳治疗时机；(3)tblb存在禁忌症，如重症患者，合并严重的脏器功能不全，合并凝血功能障碍等，应用存在一定限制；(4)对气管镜操作医生、病理科医生水平要求高，基层医院无法开展；(5)无法频繁行tblb检查，不适合动态监测病情变化，指导用药；(6)费用较高。因此，开发无创、可用于肺移植后排斥反应诊断的高敏感性及高特异性的检查手段逐渐成为本领域的研究热点，目前临床应用最广泛的是检测外周血中供体来源的游离dna(donor-derived cell free dna,ddcfdna),此方法需要通过高通量基因测序技术检测供体来源的cfdna用于评估肺移植排斥的情况，但由于费用高昂，检测需要高通量测序仪，检测程序繁琐，，并未广泛得到使用。

3、综上，开发新型的无创诊断肺移植后排斥反应手段，仍是肺移植领域亟需解决的问题之一。

技术实现思路

1、为解决上述技术问题，本发明提供一种用于肺移植后排斥反应诊断的标志物及其应用，提高肺移植后排斥反应检出率及检出准确性。

2、为达此目的，本发明采用以下技术方案：

3、第一方面，本发明提供了一种用于肺移植后排斥反应诊断的标志物，所述标志物为外周血cd45+ddr2+细胞。

4、本发明采用流式细胞学方法检测外周血单个核细胞(pbmcs)中cd45+ddr2+细胞比例，发现肺移植受者外周血中cd45+ddr2+细胞比例与发生排斥反应相关，与肺移植后无排斥患者、肺部感染的患者、健康人群相比，肺移植后发生排斥反应的患者外周血中cd45+ddr2+细胞比例显著提高，因此可以用外周血中cd45+ddr2+细胞比例为检测指标，用于肺移植后排斥反应的诊断，具有检测精确度高、方便快捷以及安全无创的特点。

5、可选地，所述标志物来源于受试者的生物样本，所述生物样本包括受试者的外周血。

6、第二方面，本发明提供检测第一方面所述的用于肺移植后排斥反应诊断的标志物的物质在制备诊断肺移植后排斥反应的产品中的应用。

7、第三方面，本发明提供一种诊断肺移植后排斥反应的产品，所述产品包括检测第一方面所述的用于肺移植后排斥反应诊断的标志物的细胞比例的试剂和/或设备。

8、可选地，所述产品包括检测试剂盒，所述试剂盒包括检测cd45+ddr2+细胞的流式分析试剂。

9、可以理解，本领域通用的能够检测cd45+ddr2+细胞的流式分析试剂均适用于本发明。

10、第四方面，本发明提供第一方面所述的用于肺移植后排斥反应诊断的标志物在构建肺移植后排斥反应诊断模型或制备肺移植后排斥反应诊断装置中的应用。

11、第五方面，本发明提供一种肺移植后排斥反应诊断模型，所述肺移植后排斥反应诊断模型的输入变量包括第一方面所述的用于肺移植后排斥反应诊断的标志物的细胞比例；所述肺移植后排斥反应诊断模型的输出变量包括差异倍数，所述差异倍数的计算公式为：

12、

13、肺移植后排斥的判断标准为：受试者待测样品中标志物的细胞比例≥3％，和/或所述差异倍数≥11。

14、第六方面，本发明提供一种肺移植后排斥反应的诊断装置，所述装置包括如下单元：

15、分析单元，用于执行包括：

16、检测受试者的待测样品中第一方面所述的用于肺移植后排斥反应诊断的标志物的细胞比例；

17、评估单元，用于执行包括：

18、将分析单元检测到的细胞比例输入第五方面所述的肺移植后排斥反应诊断模型中进行计算，输出差异倍数，并判断是否为肺移植后排斥反应

19、优选地，所述待测样品包括外周血。

20、第七方面，本发明提供第一方面所述的用于肺移植后排斥反应诊断的标志物作为靶点在筛选预防或治疗肺移植后排斥反应的药物中的应用。

21、优选地，所述筛选包括基于候选药物使用前和使用后对所述用于肺移植后排斥反应诊断的标志物的影响，从而确定候选药物是否可以用于预防或治疗肺移植后排斥反应的发生。

22、与现有技术相比，本发明至少具有以下有益效果：

23、本发明首次发现了外周血中cd45+ddr2+细胞与肺移植后排斥反应有关，cd45+ddr2+细胞的细胞比例在肺移植后排斥反应组、稳定组、感染组、健康组中存在显著差异，用于肺移植后排斥反应的诊断，具有检测精确度高、方便快捷以及安全无创的特点。

技术特征：

1.一种用于肺移植后排斥反应诊断的标志物，其特征在于所述标志物包括cd45+ddr2+细胞。

2.根据权利要求1所述的用于肺移植后排斥反应诊断的标志物，其特征在于，所述标志物来源于受试者的生物样本，所述生物样本包括受试者的外周血。

3.检测权利要求1或2所述的用于肺移植后排斥反应诊断的标志物的物质在制备诊断肺移植后排斥反应的产品中的应用。

4.一种诊断肺移植后排斥反应的产品，其特征在于，所述产品包括检测权利要求1或2所述的用于肺移植后排斥反应诊断的标志物的细胞比例的试剂和/或设备。

5.权利要求1或2所述的用于肺移植后排斥反应诊断的标志物在构建肺移植后排斥和/或感染诊断模型或制备肺移植后排斥反应诊断装置中的应用。

6.一种肺移植后排斥反应诊断模型，其特征在于，所述肺移植后排斥反应诊断模型的输入变量包括权利要求1或2所述的用于肺移植后排斥反应诊断的标志物的细胞比例；

7.一种肺移植后排斥反应的诊断装置，其特征在于，所述装置包括如下单元：

8.根据权利要求7所述的装置，其特征在于，所述待测样品包括外周血。

9.权利要求1或2所述的用于肺移植后排斥反应诊断的标志物作为靶点在筛选预防或治疗肺移植后排斥反应的药物中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述筛选包括基于候选药物使用前和使用后对所述用于肺移植后排斥反应诊断的标志物的影响，从而确定候选药物是否可以用于预防或治疗肺移植后排斥反应。

技术总结
本发明涉及一种用于诊断肺移植后患者发生排斥反应的标志物及其应用。所述标志物包括CD45<supgt;+</supgt;DDR2<supgt;+</supgt;细胞。本发明首次发现了外周血中CD45<supgt;+</supgt;DDR2<supgt;+</supgt;细胞与肺移植后排斥反应有关，CD45<supgt;+</supgt;DDR2<supgt;+</supgt;细胞的细胞比例在肺移植后排斥反应患者与肺移植术后稳定患者、感染患者及健康人群中存在显著差异，可用于肺移植后排斥反应的诊断，具有检测精确度高、方便快捷以及安全无创的特点。

技术研发人员：请求不公布姓名
受保护的技术使用者：菲创生物医学技术（广州）有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/10/24