一种抗体稀释剂及其制备方法和应用与流程

本发明涉及一种抗体稀释剂及其制备方法和应用。

背景技术：

1、免疫印迹检测是分子生物学、生物化学和免疫遗传学等生命科学研究中常用的一种试验方法。其原理是通过sds-聚丙烯酰胺凝胶电泳区分待测样品不同组分，再在电流的作用下，使蛋白质从凝胶转移至印迹膜上。通过特异性抗体作为探针，对靶抗原蛋白质进行检测，通过分析特异性反应的位置和强度，获得特定蛋白质在所分析的细胞和/或组织中的表达情况的信息。免疫印迹检测过程中可以应用dab显色，ecl化学发光底物显色，荧光标记的二抗直接显色等，该技术已经被广泛应用于蛋白质表达水平的检测中。

2、在进行免疫反应的实验中，是用已经制备的抗体检测样本中的抗原。常用的抗体试剂的效价很高，需要稀释一定的倍数后才可以用于检测抗原的实验反应中。在免疫反应中，用于稀释抗体的溶液，也就是稀释剂，称为抗体稀释剂。抗体稀释剂的主要功能除稀释抗体之外，还应具有保护抗体效价，提高信噪比，减少非特异性吸附等性能。

3、现有抗体稀释剂多分为含有生物制品和不含有生物制品两类。其中，生物制品例如是牛血清蛋白(bsa)、脱脂牛奶、酪蛋白、动物明胶等蛋白质，或者其他生物制品。含有生物制品的抗体稀释剂多采用bsa。而市面上多数抗体稀释剂的主要差异在于bsa浓度、使用的吐温-20(tween-20)浓度、缓冲体系的种类等。

4、上述含有生物制品的抗体稀释剂，通常只含有bsa和有效成分，该稀释剂对于抗体的效价并没有明显的提升，同时bsa的存在会提高背景值，导致信噪比下降。

5、上述不含生物制品的抗体稀释剂由于没有蛋白质，导致抗体非特异性吸附无法得到降低，从而导致背景高，信噪比差。

6、现有技术中存在采用含有磷酸盐缓冲体系的抗体稀释剂体系，但该稀释剂不能稀释连有碱性磷酸酶的抗体，使其使用场景受到较大的限制。

技术实现思路

1、针对现有技术的缺点和不足，本发明提供了一种改进的抗体稀释剂，其可以有效增强信噪比、提高抗体效价、减少抗体非特异性吸附，且使用场景不受限制。

2、为达到上述目的，本发明采用的技术方案如下：

3、一种抗体稀释剂，以重量百分比计，所述抗体稀释剂包括以下组分：0.5％-5％牛血清白蛋白、3％-10％聚乙烯吡咯烷酮、0.2％-2％吐温和73％-96.3％tbs缓冲液。

4、本发明中，tbs缓冲液是指三乙醇胺缓冲盐水溶液。

5、现有技术中，含有生物制品例如牛血清白蛋白bsa的抗体稀释剂对于抗体的效价并没有明显的提升，信噪比也不够高，而不含有bsa等生物制品的抗体稀释剂，会使得抗体容易非特异性吸附，信噪比较低。本申请的发明人通过研究发现，通过采用牛血清白蛋白bsa、聚乙烯吡咯烷酮pvp和吐温的复配，同时控制三种组分特定的用量，可以实现抗体稀释剂用于稀释抗体时，增强信噪比、提高抗体效价、减少抗体非特异性吸附的效果。其中，bsa组分为蛋白质生物组分，可以明显减少抗体的非特异性吸附，而聚乙烯吡咯烷酮pvp作为聚合物，其在稀释剂中主要作为类似表面活性剂的成分，帮助减少抗体与相关介质产生非特异性吸附，从而降低背景值，提高信噪比。此外，pvp还可以对抗体进行保护，防止溶液中残留的其他对于蛋白质有害物质损伤抗体的关键结构域-抗原结合区，提高抗体效价，提高信噪比。

6、在一些实施方式中，所述抗体稀释剂还包括抑菌防腐剂。

7、在一些实施方式中，以重量百分比计，所述抗体稀释剂包括以下组分：0.5％-5％牛血清白蛋白、3％-10％聚乙烯吡咯烷酮、0.2％-2％吐温、0.05％-5％抑菌防腐剂和78％-96.25％tbs缓冲液。

8、在一些实施方式中，所述吐温选自吐温-20、吐温-80和吐温-60中的一种或多种的组合。

9、在一些实施方式中，所述tbs缓冲液的ph为7.2-7.8。

10、在一些实施方式中，所述抑菌防腐剂选自proclean950、proclin300、bit-10和bnd-10中的一种或多种的组合。

11、在一些实施方式中，所述抗体稀释剂包括以下组分：1％-2.5％牛血清白蛋白、4％-10％聚乙烯吡咯烷酮、0.2％-2％吐温、0.05％-5％抑菌防腐剂和78％-94.75％tbs缓冲液。

12、本发明还提供了前述抗体稀释剂的制备方法，所述制备方法包括将所述牛血清白蛋白、聚乙烯吡咯烷酮、吐温、抑菌防腐剂和tbs缓冲液混合均匀的步骤。

13、本发明还提供了前述抗体稀释剂用于蛋白质免疫印迹、单细胞免疫印迹、抗原抗体反应中稀释抗体的用途。

14、本发明还提供了一种经稀释的抗体，所述经稀释的抗体包括抗体和抗体稀释剂，所述抗体稀释剂为前述抗体稀释剂。

15、与现有技术相比，本发明具有如下优势：

16、本发明的抗体稀释剂可以有效增强信噪比、提高抗体效价、减少抗体非特异性吸附。

17、本发明的抗体稀释剂适用于蛋白质免疫印迹(western blot)、单细胞免疫印迹(single cell western blot)以及所有进行抗原抗体反应中抗体的稀释。

18、本发明的抗体稀释剂采用tbs作为缓冲体系，tbs对于生物蛋白或细胞均无影响，可以应用于所有类型抗体稀释，因此本发明的抗体稀释剂的使用场景不受限制。

技术特征：

1.一种抗体稀释剂，其特征在于：以重量百分比计，所述抗体稀释剂包括以下组分：0.5％-5％牛血清白蛋白、3％-10％聚乙烯吡咯烷酮、0.2％-2％吐温和73％-96.3％tbs缓冲液。

2.根据权利要求1所述的抗体稀释剂，其特征在于：所述抗体稀释剂还包括抑菌防腐剂。

3.根据权利要求2所述的抗体稀释剂，其特征在于：以重量百分比计，所述抗体稀释剂包括以下组分：0.5％-5％牛血清白蛋白、3％-10％聚乙烯吡咯烷酮、0.2％-2％吐温、0.05％-5％抑菌防腐剂和78％-96.25％tbs缓冲液。

4.根据权利要求1所述的抗体稀释剂，其特征在于：所述吐温选自吐温-20、吐温-80和吐温-60中的一种或多种的组合。

5.根据权利要求1所述的抗体稀释剂，其特征在于：所述tbs缓冲液的ph为7.2-7.8。

6.根据权利要求2所述的抗体稀释剂，其特征在于：所述抑菌防腐剂选自proclean950、proclin300、bit-10和bnd-10中的一种或多种的组合。

7.根据权利要求2所述的抗体稀释剂，其特征在于：所述抗体稀释剂包括以下组分：1％-2.5％牛血清白蛋白、4％-10％聚乙烯吡咯烷酮、0.2％-2％吐温、0.05％-5％抑菌防腐剂和78％-94.75％tbs缓冲液。

8.权利要求1-7任一项所述的抗体稀释剂的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括将所述牛血清白蛋白、聚乙烯吡咯烷酮、吐温、抑菌防腐剂和tbs缓冲液混合均匀的步骤。

9.权利要求1-7任一项所述的抗体稀释剂用于蛋白质免疫印迹、单细胞免疫印迹、抗原抗体反应中稀释抗体的用途。

10.一种经稀释的抗体，所述经稀释的抗体包括抗体和抗体稀释剂，其特征在于：所述抗体稀释剂为权利要求1-7任一项所述的抗体稀释剂。

技术总结
本发明公开了一种抗体稀释剂及其制备方法和应用。以重量百分比计，所述抗体稀释剂包括以下组分：0.5％‑5％牛血清白蛋白、3％‑10％聚乙烯吡咯烷酮、0.2％‑2％吐温和73％‑96.3％TBS缓冲液。所述抗体稀释剂还包括抑菌防腐剂。该抗体稀释剂可用于蛋白质免疫印迹、单细胞免疫印迹、抗原抗体反应中稀释抗体，其可以有效增强信噪比、提高抗体效价、减少抗体非特异性吸附，且使用场景不受限制。

技术研发人员：请求不公布姓名,郝晋,许佩佩,樊多超,吴加慧
受保护的技术使用者：水熊健康科技（南通）有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/11/18