一种南瓜蒂药材、饮片、标准汤剂及其配方颗粒HPLC特征图谱构建方法与流程

本发明涉及分析检测，尤其是涉及一种南瓜蒂药材、饮片、标准汤剂及其配方颗粒hplc特征图谱构建方法。

背景技术：

1、南瓜蒂为葫芦科植物南瓜cucurbita moschata(duch.ex lam.)duch.ex poir.的干燥瓜蒂。瓜熟后摘取，干燥。具有和中，益气，安胎，解毒，敛疮。用于胃虚气逆，胎动不安，痈疮的功效。标准汤剂是由药材经炮制后水煎，按固定的制备工艺而成的冻干粉。

2、为了确保南瓜蒂药材、饮片及其标准汤剂质量的均一、稳定，本文建立一种新的特征图谱方法对其质量进行把控。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种南瓜蒂药材、饮片、标准汤剂及其配方颗粒hplc特征图谱构建方法，本发明构建的南瓜蒂药材、饮片、标准汤剂及其配方颗粒hplc特征图谱方法稳定，可靠，可以对南瓜蒂药材、饮片、标准汤剂及其配方颗粒的质量进行控制。

2、本发明提供了一种南瓜蒂药材、饮片、标准汤剂及其配方颗粒hplc特征图谱构建方法，包括：

3、a)将南瓜蒂原料采用溶剂提取，得到待测液；

4、b)将待测液采用高效液相色谱法测定，得到南瓜蒂原料的hplc特征图谱；

5、所述高效液相色谱法色谱条件为：色谱柱为c18柱；流动相a为乙腈，流动相b为0.2％醋酸，梯度洗脱。

6、本发明提供的一种南瓜蒂药材、饮片、标准汤剂及其配方颗粒hplc特征图谱构建方法首先取南瓜蒂原料，溶剂提取，得到待测液。所述溶剂优选为70％乙醇。

7、按照本发明，所述南瓜蒂原料为南瓜蒂药材、饮片、标准汤剂及其配方颗粒。

8、按照本发明，本发明将南瓜蒂原料采用70％乙醇加热回流或超声提取30min，放冷，摇匀，滤过，即得。

9、本发明药材和饮片的制样方式优选采用回流提取的，而标准汤剂和颗粒优选采用超声提取的。

10、所述南瓜蒂原料的质量g和溶剂的体积ml的比为(0.5～2)：20。

11、本发明采用上述提取溶剂色谱峰信息量大，效果好。

12、所述南瓜蒂原料为南瓜蒂药材、南瓜蒂饮片或汤剂。本发明对其不进行限定，上述原料皆可通过本发明的方法进行质量控制和定性检测。

13、本发明还包括制备参照物溶液：分别取香草酸对照品，采用70％乙醇溶解，得到对照品参照物溶液；

14、取南瓜蒂对照药材加70％乙醇加热回流提取，得到对照药材参照物溶液；

15、将所述对照品和对照药材参照物溶液采用高效液相色谱法测定，分别得到对照品和对照药材参照物的色谱图；并根据对照品和对照药材参照物的色谱图对南瓜蒂药材、饮片、标准汤剂及其配方颗粒hplc特征图谱的成分进行定性测定。

16、本发明所述流动相a为乙腈，流动相b为0.2％醋酸溶液，梯度洗脱。

17、本发明所述梯度洗脱优选具体为：

18、0～30min，a相：7％、b相：93％；

19、30～50min，a相：7％～13％、b相：93％～87％；

20、50～58min，a相：13％、b相：87％。

21、本发明在上述洗脱梯度下基线分离好，各个峰分离度好，基线平稳。

22、c18柱，规格为5μm，4.6×250mm；柱温30℃。

23、本发明色谱柱在上述30℃条件下色谱峰对称、分离度好，出峰时间适中。

24、流动相流速优选为1.0ml/min。

25、本发明发现流速1.0ml/min下各色谱峰分离较好，峰形较对称，分离度适中，作为最优选方案。

26、本发明检测波长优选为270nm。

27、本发明人发现，在270nm处色谱信息丰富，色谱峰信息量大，各成分均有较好吸收，响应值适中，各峰分离度较好，基线平稳。

28、本发明进样量优选为10μl。

29、本发明的有益效果是，一个液相色谱条件下，以指纹图谱控制南瓜蒂药材、饮片、标准汤剂及其配方颗粒的物质群，以香草酸对指纹图谱进行定位；能够大大降低检测的成本，实现定性检测。

30、采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统对南瓜蒂药材、饮片、标准汤剂及其配方颗粒hplc特征图谱的相似度进行评价，得到由7个特征峰构成的南瓜蒂药材、饮片、标准汤剂及其配方颗粒hplc标准特征图谱，其中峰2(s)：香草酸峰。

31、在所述南瓜蒂标准汤剂特征图谱中，以香草酸峰为参照峰s峰，计算各特征峰与s峰的相对保留时间，所述相对保留时间在规定值的±10％之内，所述规定值分别为：0.70(峰1)、1.13(峰3)、1.19(峰4)、1.48(峰5)、1.62(峰6)、1.82(峰7)。

32、质量判断标准：取南瓜蒂药材、饮片、标准汤剂及其配方颗粒样品，按上述同法操作，得到南瓜蒂药材、饮片、标准汤剂及其配方颗粒特征图谱，采用国家药典委员会《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》2012版对南瓜蒂药材、饮片、标准汤剂及其配方颗粒标准特征图谱和样品特征图谱进行分析，相似度大于0.90。

33、采用本发明所提供的方法能有效的监控不同批次南瓜蒂药材、饮片、标准汤剂及其配方颗粒的质量，使其质量稳定，方法具有精密度高、重现性好等特点，有利于全面监控产品的质量。

34、本发明建立的南瓜蒂药材、饮片、标准汤剂及其配方颗粒特征图谱以香草酸，为参照物，注重各个特征峰的顺序和与药材及中间产品的相关性，能全面评价产品的整体质量面貌特征，方法科学可靠。

35、本发明新建的特征图谱方法，可以检测南瓜蒂及其标准汤剂中极性较大的成分。且供试品制备方法简单容易操作，指认特征峰相对较多。可对南瓜蒂及其制剂进行准确、可靠的特征图谱检测。对南瓜蒂及其制剂的真实性和质量的一致性以及稳定性均可有效地加以检测和控制。为有效控制和较全面评价南瓜蒂标准汤剂的质量提供依据。确保南瓜蒂及其标准汤剂质量的均一、稳定。

36、本发明提供了一种南瓜蒂药材、饮片、标准汤剂及其配方颗粒hplc特征图谱构建方法，包括：a)将南瓜蒂原料采用溶剂提取，得到待测液；b)将待测液采用高效液相色谱法测定，得到南瓜蒂原料的hplc特征图谱；所述高效液相色谱法色谱条件为：色谱柱为c18柱；流动相a为乙腈，流动相b为0.2％醋酸，梯度洗脱。本发明采用高效液相色谱法，选用乙腈-0.2％醋酸为流动相进行梯度洗脱，以香草酸为参照物，建立了南瓜蒂药材、饮片、标准汤剂及其配方颗粒hplc特征图谱，重复性、精密度好，方法稳定，可靠，可以对南瓜蒂药材、饮片、标准汤剂及其配方颗粒的质量进行控制。

技术特征：

1.一种南瓜蒂药材、饮片、标准汤剂及其配方颗粒hplc特征图谱构建方法，包括：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括制备对照品和对照药材参照物溶液：

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脱具体为：

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述色谱柱为c18柱，规格为5μm，4.6×250mm；柱温30℃。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述流动相流速为1.0ml/min；检测波长为270nm；进样量为10μl。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统对南瓜蒂药材、饮片、标准汤剂及其配方颗粒hplc特征图谱的相似度进行评价，得到由7个特征峰构成的南瓜蒂药材、饮片、标准汤剂及其配方颗粒hplc标准特征图谱，其中峰2(s)：香草酸峰。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，在所述南瓜蒂标准汤剂特征图谱中，以香草酸峰为参照峰s峰，计算各特征峰与s峰的相对保留时间，所述相对保留时间在规定值的±10％之内，所述规定值分别为：0.70(峰1)、1.13(峰3)、1.19(峰4)、1.48(峰5)、1.62(峰6)、1.82(峰7)。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤a)所述南瓜蒂原料

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述步骤a)具体为：

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述南瓜蒂原料的质量g和溶剂的体积ml的比为(0.5～2)：20。

技术总结
本发明提供了一种南瓜蒂药材、饮片、标准汤剂及其配方颗粒HPLC特征图谱构建方法，包括：A)将南瓜蒂原料采用溶剂提取，得到待测液；B)将待测液采用高效液相色谱法测定，得到南瓜蒂原料的HPLC特征图谱；所述高效液相色谱法色谱条件为：色谱柱为C18柱；流动相A为乙腈，流动相B为0.2％磷酸，梯度洗脱。本发明采用高效液相色谱法，选用乙腈‑0.2％磷酸为流动相进行梯度洗脱，以香草酸参照物，建立了南瓜蒂药材、饮片、标准汤剂及其配方颗粒HPLC特征图谱，重复性、精密度好，方法稳定，可靠，可以对南瓜蒂药材、饮片、标准汤剂及其配方颗粒的质量进行控制。

技术研发人员：周厚成,周靖惟,黄宇,姚必军,周良云,刘珂,刘璐,鄢宇梅,钟磊,费文波,陈玉梅
受保护的技术使用者：四川新绿色药业科技发展有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/10/31